实验二十pH对微生物的影响一、实验目的和内容目的：了解pH对微生物生长的影响，确定微生物生长所需最适pH条件。内容：学习测定微生物生长最适pH值的方法。二、实验材料和用具粪产碱杆菌（Alcaligenesfaecalis）、大肠杆菌、酿酒酵母。牛肉膏蛋白陈液体培养基，用1mo1/LNaOH和1mol/LHC1将其pH分别调至3，5，7，9。无菌生理盐水、无菌吸管、大试管、1cm比色杯、722型分光光度计。三、操作步骤1.无菌操作吸取适量无菌生理盐水加入到粪产碱杆菌、大肠杆菌及酿酒酵母斜面试管中，制成菌悬液，使其0Deo0m值均为0.05。2.无菌操作分别吸取0.1ml上述三种菌悬液，分别接种于装有5ml不同pH的牛肉膏蛋白陈液体培养基的大试管中。注意吸取菌液时要将菌液吹打均匀，保证各管中接入的菌液浓度一致。3.将接种大肠杆菌和粪产碱杆菌的8支试管置于37℃温室保温24~48h，将接种有酿酒酵母的试管置于28℃温室保温48~72h。4．将上述试管取出，利用722型分光光度计测定培养物的0D600m值。四、实验报告将测定结果填入下表，说明三种微生物各自的生长pH范围及最适pH。ODe00 mm菌名pH3pH5pH7pH9大肠杆菌粪产碱杆菌酿酒酵母五、问题和思考1.氨基酸、蛋白质为何被称为天然缓冲系统？2.若大肠杆菌在以葡萄糖和NHC1作为碳、氮源的合成培养基及牛肉膏蛋白陈培养基中生长，两种培养基pH值均为7，在培养过程中每隔6小时测定一次OD600nm，，结果记录于下表：53
53 实验二十 pH 对微生物的影响 一、 实验目的和内容 目的：了解 pH 对微生物生长的影响，确定微生物生长所需最适 pH 条件。 内容：学习测定微生物生长最适 pH 值的方法。 二、 实验材料和用具 粪产碱杆菌（Alcaligenes faecalis）、大肠杆菌、酿酒酵母。 牛肉膏蛋白胨液体培养基，用 1mol/L NaOH 和 1mol/L HCl 将其 pH 分别调至 3，5，7，9。 无菌生理盐水、无菌吸管、大试管、1cm 比色杯、722 型分光光度计。 三、 操作步骤 1. 无菌操作吸取适量无菌生理盐水加入到粪产碱杆菌、大肠杆菌及酿酒酵母斜面试管中， 制成菌悬液，使其 OD600nm值均为 0.05 。 2. 无菌操作分别吸取 0.1ml 上述三种菌悬液，分别接种于装有 5ml 不同 pH 的牛肉膏蛋白胨 液体培养基的大试管中。 注意吸取菌液时要将菌液吹打均匀，保证各管中接入的菌液浓度一致。 3. 将接种大肠杆菌和粪产碱杆菌的 8 支试管置于 37℃温室保温 24~48h，将接种有酿酒酵母 的试管置于 28℃温室保温 48~72h。 4. 将上述试管取出，利用 722 型分光光度计测定培养物的 OD600nm值。 四、 实验报告 将测定结果填入下表，说明三种微生物各自的生长 pH 范围及最适 pH。 OD600 nm 菌 名 pH3 pH5 pH7 pH9 大肠杆菌 粪产碱杆菌 酿酒酵母 五、 问题和思考 1. 氨基酸、蛋白质为何被称为天然缓冲系统？ 2. 若大肠杆菌在以葡萄糖和 NH4Cl 作为碳、氮源的合成培养基及牛肉膏蛋白胨培养基中生 长，两种培养基 pH 值均为 7，在培养过程中每隔 6 小时测定一次 OD600nm,，结果记录于下表：
ODeo0 m培养时间（h）合成培养基牛肉膏蛋白陈培养基60.1000.100120.3000.500180.2750.900240.1251.50试问，为什么大肠杆菌在合成培养基中培养12小时后群体生长停止，而在牛肉膏蛋白陈培养基中18~24小时仍在继续生长？54
54 OD600 nm 培养时间（h） 合成培养基 牛肉膏蛋白胨培养基 6 0.100 0.100 12 0.300 0.500 18 0.275 0.900 24 0.125 1.50 试问，为什么大肠杆菌在合成培养基中培养 12 小时后群体生长停止，而在牛肉膏蛋白胨培 养基中 18~24 小时仍在继续生长？