实验十霉菌的形态观祭一、实验目的和内容目的：了解霉菌形态，掌握微生物载玻片培养观察法。内容：1.霉菌载玻片培养。2.曲霉、青霉、根霉、毛霉形态观察。二、实验材料和用具产黄青霉（Penicilliumchrysogenum）、黑曲霉（Aspergillusniger）、黑根霉（Rhizopusnigricans）、总状毛霉（Mucorracemosus）培养2~5天的马铃薯琼脂平板培养物。土豆琼脂培养基或察氏琼脂培养基、乳酸石炭酸棉蓝染色液、20%甘油、50%乙醇。无菌吸管、平血、载玻片、盖玻片、U形玻棒、解剖针、解部刀、镊子、显微镜等。三、操作步骤（一）直接制片观察法在载玻片上加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解削针从霉菌菌落边缘处挑取少量已产抱子的霉菌菌丝，先置于50%乙醇中浸一下以洗去脱落的孢子，再放在载玻片上的染液中，用解剖针小心地将菌丝分散开。盖上盖玻片，置低倍镜下观察，必要时换高倍镜观察。挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态；加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。（二）载玻片培养观察法1.培养小室的灭菌在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆形滤纸片，再放一U形玻棒，其上放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖上血盖，外用纸包扎，经121℃湿热灭菌30min后，置60℃烘箱中烘干，备用。2.琼脂块的制作取已灭菌的马铃薯琼脂（或察氏琼脂）培养基6~7ml注入另一灭菌平皿中，使之凝固成薄层。用解剖刀切成0.5~1cm的琼脂块，并将其移至上述培养室中的载玻片上（每片放两块）。（图10-1）制作过程应注意无菌操作。22
22 实验十 霉菌的形态观察 一、 实验目的和内容 目的：了解霉菌形态，掌握微生物载玻片培养观察法。 内容：1. 霉菌载玻片培养。 2. 曲霉、青霉、根霉、毛霉形态观察。 二、 实验材料和用具 产黄青霉（Penicillium chrysogenum）、黑曲霉（Aspergillus niger）、黑根霉（Rhizopus nigricans）、 总状毛霉（Mucor racemosus）培养 2~5 天的马铃薯琼脂平板培养物。 土豆琼脂培养基或察氏琼脂培养基、乳酸石炭酸棉蓝染色液、20%甘油、50%乙醇。 无菌吸管、平皿、载玻片、盖玻片、U 形玻棒、解剖针、解剖刀、镊子、显微镜等。 三、 操作步骤 （一）直接制片观察法 在载玻片上加一滴乳酸石炭酸棉蓝染色液，用解剖针从霉菌菌落边缘处挑取少量已产孢子的 霉菌菌丝，先置于 50%乙醇中浸一下以洗去脱落的孢子，再放在载玻片上的染液中，用解剖针小 心地将菌丝分散开。盖上盖玻片，置低倍镜下观察，必要时换高倍镜观察。 挑菌和制片时要细心，尽可能保持霉菌自然生长状态；加盖玻片时勿压入气泡，以免影响观察。 （二）载玻片培养观察法 1. 培养小室的灭菌 在平皿皿底铺一张略小于皿底的圆形滤纸片，再放一 U 形玻棒，其上 放一洁净载玻片和两块盖玻片，盖上皿盖，外用纸包扎，经 121℃湿热灭菌 30min 后，置 60℃烘 箱中烘干，备用。 2. 琼脂块的制作 取已灭菌的马铃薯琼脂（或察氏琼脂）培养基 6~7ml 注入另一灭菌平皿 中，使之凝固成薄层。用解剖刀切成 0.5~1cm2 的琼脂块，并将其移至上述培养室中的载玻片上 （每片放两块）。（图 10-1） 制作过程应注意无菌操作
3国中45bCD图10-1小室载玻片培养法示意图上：正面观：下：侧面观1.平皿：2.U形玻璃棒：3.盖玻片：4.培养物：5.载玻片：6.保湿用滤纸3.接种用尖细的接种针挑取很少量的孢子接种于琼脂块的边缘上，用无菌镊子将盖玻片覆盖在琼脂块上。接种量要少，尽可能将分散的孢子接种在琼脂块边缘上，否则培养后菌丝过于稠密影响观察。4.培养先在平血的滤纸上加3~5mL20%的无菌甘油，以保持血内的湿度。盖上皿盖，血盖上注明菌名、组别和接种日期。置28℃恒温培养3~5d。5.镜检根据需要可以在不同培养时间内取出载玻片置低倍镜下观察，必要时换高倍镜。四、实验报告绘图说明四种霉菌的形态特征。五、问题和思考1.你主要根据哪些形态特征来区分上述四种霉菌？2.根据载玻片培养观察方法的基本原理，你认为上述操作过程中的哪些步骤可以根据具体情况作一些改进或可用其他的替代方法？23
23 图10-1 小室载玻片培养法示意图 上：正面观；下：侧面观 1．平皿；2．U形玻璃棒；3．盖玻片；4．培养物；5．载玻片；6．保湿用滤纸 3. 接种 用尖细的接种针挑取很少量的孢子接种于琼脂块的边缘上，用无菌镊子将盖玻片 覆盖在琼脂块上。 接种量要少，尽可能将分散的孢子接种在琼脂块边缘上，否则培养后菌丝过于稠密影响观察。 4. 培养 先在平皿的滤纸上加 3~5 mL20%的无菌甘油，以保持皿内的湿度。盖上皿盖，皿 盖上注明菌名、组别和接种日期。置 28℃恒温培养 3~5d。 5. 镜检 根据需要可以在不同培养时间内取出载玻片置低倍镜下观察，必要时换高倍镜。 四、 实验报告 绘图说明四种霉菌的形态特征。 五、 问题和思考 1. 你主要根据哪些形态特征来区分上述四种霉菌？ 2. 根据载玻片培养观察方法的基本原理，你认为上述操作过程中的哪些步骤可以根据具体 情况作一些改进或可用其他的替代方法？