实验三十一双向免疫扩散试验实验目的和内容目的：学习双向免疫扩散试验的操作方法，观察抗原、抗体在琼脂中形成的沉淀线，了解双向免疫扩散试验的用途。内容：双向免疫扩散试验。二、实验材料和用具1%离子琼脂（配法见附录IⅢI）、兔抗马血清、马血清、牛血清、山羊血清、人血清。方阵型打孔器或单孔金属管（孔径约3mm）、吸管、毛细滴管、2.5X7cm载玻片、注射针头、含湿滤纸或湿纱布的培养皿或带盖糖瓷盒。三、 操作步骤1．在沸水浴中溶解1%离子琼脂。2.冷至50~60℃左右，吸3.5~4ml加在载玻片（必须放在水平位置）上，使其均匀布满玻片而又不流失。3.琼脂凝固后，取方阵型打孔器打孔，或单孔金属管按图31-1打孔，再用注射针头挑去孔中琼脂，每琼脂板打两个方阵型。4．用记号笔在琼脂板的底面将孔编号。000oOo0000图31-1双向扩散模型5.用毛细滴管加兔抗马血清抗体于两个方阵型的中央孔中，第一方阵型的周围孔1加牛血清，孔2加马血清，孔3加羊血清，孔4加人血清。第二方阵型周围各孔加入的抗原与第一方阵型相同，但浓度均改为1:20。注意所加血清与抗血清不能溢出孔外。6．将玻片放入有湿滤纸的培养血或有盖塘瓷盒内。81
81 实验三十一 双向免疫扩散试验 一、 实验目的和内容 目的：学习双向免疫扩散试验的操作方法，观察抗原、抗体在琼脂中形成的沉淀线，了解双 向免疫扩散试验的用途。 内容：双向免疫扩散试验。 二、 实验材料和用具 1％离子琼脂（配法见附录Ⅲ）、兔抗马血清、马血清、牛血清、山羊血清、人血清。 方阵型打孔器或单孔金属管（孔径约 3mm）、吸管、毛细滴管、2.5×7cm 载玻片、注射针头、 含湿滤纸或湿纱布的培养皿或带盖搪瓷盒。 三、 操作步骤 1. 在沸水浴中溶解 1％离子琼脂。 2. 冷至 50~60℃左右，吸 3.5~4ml 加在载玻片（必须放在水平位置）上，使其均匀布满玻 片而又不流失。 3. 琼脂凝固后，取方阵型打孔器打孔，或单孔金属管按图 31-1 打孔，再用注射针头挑去孔 中琼脂，每琼脂板打两个方阵型。 4. 用记号笔在琼脂板的底面将孔编号。 图 31-1 双向扩散模型 5. 用毛细滴管加兔抗马血清抗体于两个方阵型的中央孔中，第一方阵型的周围孔 1 加牛血 清，孔 2 加马血清，孔 3 加羊血清，孔 4 加人血清。第二方阵型周围各孔加入的抗原与第一方阵 型相同，但浓度均改为 1:20。注意所加血清与抗血清不能溢出孔外。 6. 将玻片放入有湿滤纸的培养皿或有盖搪瓷盒内
7.置37℃温箱，24~48小时后取出观察结果。四、实验报告1.抗体与抗原之间有沉淀线形成为阳性结果，以“+”表示；无沉淀线为阴性结果，以“”表示。将结果记录于下表中（抗体为兔抗马血清）。抗原孔抗原未稀释抗原稀释抗原牛血清1马血清2羊血清32.画下两个方阵型与所形成的沉淀线。3．分别测量两个方阵型中抗原与沉淀线之间的距离，两者有何区别？五、问题和思考1.根据所得结果分析马血清与牛血清、羊血清、人血清之间有无共同成分？2.抗马血清的纯度如何？3.Ouchterlony技术与在液体中进行沉淀反应的技术相比，有哪些优越性？82
82 7. 置 37℃温箱，24~48 小时后取出观察结果。 四、 实验报告 1. 抗体与抗原之间有沉淀线形成为阳性结果，以“+”表示；无沉淀线为阴性结果，以“－” 表示。将结果记录于下表中（抗体为兔抗马血清）。 2. 画下两个方阵型与所形成的沉淀线。 3. 分别测量两个方阵型中抗原与沉淀线之间的距离，两者有何区别？ 五、 问题和思考 1. 根据所得结果分析马血清与牛血清、羊血清、人血清之间有无共同成分？ 2. 抗马血清的纯度如何？ 3. Ouchterlony 技术与在液体中进行沉淀反应的技术相比，有哪些优越性？