实验十一细菌大小的测定一、 实验目的和内容目的：学会测微尺的使用和计算方法及对球菌和杆菌的测量。内容：1.认识测微尺，学习目镜测微尺的标定。2.测定金黄色葡萄球菌和大肠杆菌菌体的大小。二、实验材料和用具金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）、大肠杆菌（E.coli）的玻片标本。香柏油、二甲苯。显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。三、操作步骤1.测微尺的构造显微镜测微尺是由目镜测微尺和镜台测微尺组成，目镜测微尺是一块可放在接目镜内的圆形玻片，其中央有精确的等分刻度，把5mm长度刻成50等分，或把10mm长度刻成100等分。测量时，需将其放在接目镜中的隔板上，来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的相对长度。0.01 mm0o图11-1台镜测微尺a及其中央部分的放大b镜台测微尺1020304050日镜测微尺图11-2用镜台测微尺矫正目镜测微尺24
24 实验十一 细菌大小的测定 一、 实验目的和内容 目的：学会测微尺的使用和计算方法及对球菌和杆菌的测量。 内容：1. 认识测微尺，学习目镜测微尺的标定。 2. 测定金黄色葡萄球菌和大肠杆菌菌体的大小。 二、 实验材料和用具 金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、大肠杆菌（E.coli）的玻片标本。 香柏油、二甲苯。 显微镜、目镜测微尺、镜台测微尺、擦镜纸。 三、 操作步骤 1. 测微尺的构造 显微镜测微尺是由目镜测微尺和镜台测微尺组成，目镜测微尺是一块可放在接目镜内的圆形 玻片，其中央有精确的等分刻度，把 5mm 长度刻成 50 等分，或把 10 mm 长度刻成 100 等分。测 量时，需将其放在接目镜中的隔板上，来测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同目镜、物镜 组合的放大倍数不相同，目镜测微尺每格实际表示的长度也不一样，因此目镜测微尺测量微生物 大小时须先用置于镜台上的镜台测微尺校正，以求出在一定放大倍数下，目镜测微尺每小格所代 表的相对长度。 a b 图 11-1 台镜测微尺 a 及其中央部分的放大 b 图 11－2 用镜台测微尺矫正目镜测微尺 0.01 mm
镜台测微尺（图11-1）是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将1mm等分为100格，每格长10μm（即0.01mm），是专门用来校正目镜测微尺的。2.装目镜测微尺取出接目镜，把目镜上的透镜旋下，将目镜测微尺刻度朝下放在目镜镜筒内的隔板上，然后旋上目镜透镜，再将目镜插入镜筒内。3.校正目镜测微尺（1）放镜台测微尺将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。（2）校正先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央，调节焦距，当清晰地看到镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行，移动推动器，使两尺在某一区域内两线完全重合，然后分别数出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺所占的格数。（图11-2)用同样的方法换成高倍镜和油镜进行校正，分别测出在高倍镜和油镜下，两重合线之间镜台测微尺和目镜测微尺分别所占的格数。观察时光线不宜过强，否则难以找到镜台测微尺的刻度；换高倍镜和油镜校正时，务必十分细心，防止按物镜压坏镜台测微尺和损坏镜头。（3）计算由于已知镜台测微尺每格长10μm，根据下列公式即可分别计算出在不同放大倍数下，目镜测微尺每小格所代表的实际长度。两重合线间镜台测微尺格数×10目镜测微尺每小格长度（μm）=两重合线间目镜测微尺格数例如，目镜测微尺20个小格等于镜台测微尺3小格，已知镜台测微尺每格为10μm，则3小格的长度为3×10=30μm，那么相应地在目镜测微尺上每小格长度为3×1020=1.5μm。用以上计算方法分别校正低倍镜、高倍镜和油镜下目镜测微尺每个实际长度。3.菌体大小测定目镜测微尺校正完毕后，移去镜台测微尺，换上细菌染色玻片标本。现在低倍镜和高倍镜找到标本后，换油镜测定金黄色葡萄球菌的直径和大肠杆菌的宽度和长度。测定时，通过转动目镜测微尺和移动染色标本，测出细菌直径或长和宽所占目镜测微尺的格数。最后将所测得的格数乘以目镜测微尺（用油镜时）每小格所代表的长度，即为该菌体的实际大小。测定酵母菌时，先将酵母培养物制成水浸片，然后用高倍镜测出宽和长各占目镜测微尺的格数，最后，将测得的格数乘上目镜测微尺（用高倍镜时）每个所代表的长度，即为酵母菌的实际大小。25
25 镜台测微尺（图 11-1）是中央部分刻有精确等分线的载玻片，一般将 lmm 等分为 100 格， 每格长 l0μm（即 0.0lmm），是专门用来校正目镜测微尺的。 2. 装目镜测微尺 取出接目镜，把目镜上的透镜旋下，将目镜测微尺刻度朝下放在目镜镜筒内的隔板上，然后 旋上目镜透镜，再将目镜插入镜筒内。 3. 校正目镜测微尺 （1）放镜台测微尺 将镜台测微尺刻度面朝上放在显微镜载物台上。 （2）校正 先用低倍镜观察，将镜台测微尺有刻度的部分移至视野中央，调节焦距，当清 晰地看到镜台测微尺的刻度后，转动目镜，使目镜测微尺的刻度与镜台测微尺的刻度平行，移动 推动器，使两尺在某一区域内两线完全重合，然后分别数出两重合线之间镜台测微尺和目镜测微 尺所占的格数。(图 11-2) 用同样的方法换成高倍镜和油镜进行校正，分别测出在高倍镜和油镜下，两重合线之间镜台 测微尺和目镜测微尺分别所占的格数。 观察时光线不宜过强，否则难以找到镜台测微尺的刻度；换高倍镜和油镜校正时，务必十分细心，防止接 物镜压坏镜台测微尺和损坏镜头。 （3）计算 由于已知镜台测微尺每格长 l0μm，根据下列公式即可分别计算出在不同放大 倍数下，目镜测微尺每小格所代表的实际长度。 两重合线间镜台测微尺格数×10 目镜测微尺每小格长度（μm）= 两重合线间目镜测微尺格数 例如，目镜测微尺 20 个小格等于镜台测微尺 3 小格，已知镜台测微尺每格为 l0μm，则 3 小格的长度为 3×10=30μm，那么相应地在目镜测微尺上每小格长度为 3×10÷20=1.5μm。用以 上计算方法分别校正低倍镜、高倍镜和油镜下目镜测微尺每个实际长度。 3. 菌体大小测定 目镜测微尺校正完毕后，移去镜台测微尺，换上细菌染色玻片标本。现在低倍镜和高倍镜找 到标本后，换油镜测定金黄色葡萄球菌的直径和大肠杆菌的宽度和长度。测定时，通过转动目镜 测微尺和移动染色标本，测出细菌直径或长和宽所占目镜测微尺的格数。最后将所测得的格数乘 以目镜测微尺（用油镜时）每小格所代表的长度，即为该菌体的实际大小。 测定酵母菌时，先将酵母培养物制成水浸片，然后用高倍镜测出宽和长各占目镜测微尺的格 数，最后，将测得的格数乘上目镜测微尺（用高倍镜时）每个所代表的长度，即为酵母菌的实际 大小
通常测定对数生长期菌体来代表该菌的大小：可选择有代表性的3~5个细胞进行测定；细菌的大小需用油镜测定，以减少误差。4.测定完毕取出目镜测微尺，将接目镜放回镜筒，再将目镜测微尺和镜台测微尺分别用擦镜纸擦拭干净，放回盒内保存。四、实验报告1.目镜测微尺校正结果接物镜接物镜倍数目镜测微尺格数镜台测微尺格数目镜测微尺每格代表的长度/um低倍镜高倍镜油镜2.菌体大小测定结果宽长目镜测微尺微生物名称每个代表的菌体大小范围/uμm目镜测微目镜测微宽度/um长度/μm长度/μm尺格数尺格数金黄色葡萄球菌大肠杆菌五、问题和思考1．为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校正?2.在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大小时，其测定结果是否相同？为什么？26
26 通常测定对数生长期菌体来代表该菌的大小；可选择有代表性的 3~5 个细胞进行测定；细菌 的大小需用油镜测定，以减少误差。 4. 测定完毕 取出目镜测微尺，将接目镜放回镜筒，再将目镜测微尺和镜台测微尺分别用 擦镜纸擦拭干净，放回盒内保存。 四、 实验报告 1. 目镜测微尺校正结果 接物镜 接物镜倍数 目镜测微尺格数 镜台测微尺格数 目镜测微尺每格代表的长度/μm 低倍镜 高倍镜 油 镜 2. 菌体大小测定结果 宽 长 微生物名称 目镜测微尺 每个代表的 长度/μm 目镜测微 尺格数 宽度/μm 目镜测微 尺格数 长度/μm 菌体大小范围/μm 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 五、 问题和思考 1. 为什么更换不同放大倍数的目镜或物镜时，必须用镜台测微尺重新对目镜测微尺进行校 正？ 2. 在不改变目镜和目镜测微尺，而改用不同放大倍数的物镜来测定同一细菌的大小时，其 测定结果是否相同？为什么？