第二部分实际应用性实验实验三十二大肠杆菌生长曲线的测定一、实验目的和内容目的：了解大肠杆菌的生长曲线特征和繁殖规律，并学会绘制生长曲线，复习光电比浊法测量细菌数量的方法。内容：1.复习分光光度计。2.光电比浊法测量细菌数量二、实验材料和用具培养10~12小时的大肠杆菌（E.coli）培养液。LB液体培养基70ml、分装2支大试管（5ml/支）、剩余60ml装入250ml的三角瓶。722型分光光度计、恒温振荡摇床、无菌试管、无菌吸管等。三、操作步骤1.标记取11支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h。2.接种分别用5ml无菌吸管吸取2.5ml大肠杆菌过夜培养液（培养10~12h）转入盛有50m1LB液的三角瓶内，混合均匀后分别取5ml混合液放入上述标记的11支无菌大试管中。3.培养将已接种的11支试管置于自控水浴振荡器或摇床上37℃振荡培养（振荡频率250r/min），分别培养0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，将标有相应时间的试管取出，立即放冰箱中贮存，最后一同比浊测定其光密度值。4.比浊测定用未接种的LB液体培养基作空白对照，选用600nm波长进行光电比浊测定。从最稀浓度（最早取出）的菌悬液开始依次进行测定，对浓度大的菌悬液用LB液体培养基适当稀释后测定，使其光密度值在0.1~0.65以内（测定OD值前，将待测定的培养液振荡，使细胞均匀分布）。本操作步骤也可用简便的方法代替：1.用1ml无菌吸管吸取0.25ml大肠杆菌过夜培养液转入盛有3~5mlLB液的试管中、混匀后将试管直接插入分光光度计的比色槽中，比色槽上方用自制的暗盒将试管及比色暗83
83 第二部分 实际应用性实验 实验三十二 大肠杆菌生长曲线的测定 一、实验目的和内容 目的：了解大肠杆菌的生长曲线特征和繁殖规律，并学会绘制生长曲线，复习光电比 浊法测量细菌数量的方法。 内容：1．复习分光光度计。 2．光电比浊法测量细菌数量 二、实验材料和用具 培养 10~12 小时的大肠杆菌（E.coli）培养液。 LB 液体培养基 70ml、分装 2 支大试管(5ml／支)、剩余 60ml 装入 250ml 的三角瓶。 722 型分光光度计、恒温振荡摇床、无菌试管、无菌吸管等。 三、操作步骤 1．标记 取 11 支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即 0、1.5、3、4、6、8、 10、12、14、16 和 20h。 2．接种 分别用 5ml 无菌吸管吸取 2.5ml 大肠杆菌过夜培养液（培养 10~12h）转入盛 有 50mlLB 液的三角瓶内，混合均匀后分别取 5ml 混合液放入上述标记的 11 支无菌大试管 中。 3．培养 将已接种的 11 支试管置于自控水浴振荡器或摇床上 37℃振荡培养（振荡频 率 250r/min），分别培养 0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16 和 20h，将标有相应时间 的试管取出，立即放冰箱中贮存，最后一同比浊测定其光密度值。 4．比浊测定 用未接种的 LB 液体培养基作空白对照,选用 600nm 波长进行光电比浊测 定。从最稀浓度（最早取出）的菌悬液开始依次进行测定，对浓度大的菌悬液用 LB 液体培 养基适当稀释后测定，使其光密度值在 0.1~0.65 以内（测定 OD 值前，将待测定的培养液 振荡，使细胞均匀分布）。 本操作步骤也可用简便的方法代替： 1．用 1ml 无菌吸管吸取 0.25ml 大肠杆菌过夜培养液转入盛有 3~5mlLB 液的试管中、 混匀后将试管直接插入分光光度计的比色槽中，比色槽上方用自制的暗盒将试管及比色暗
室全部罩上，形成一个大的暗环境，另以1支盛有LB液但没有接种的试管调零点，测定样品中培养Oh的OD值。测定完毕后，取出试管置37℃继续振荡培养。2.分别培养0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，取出培养物试管按上述方法测定OD值。该方法准确度高、操作简便。但须注意的是使用的2支试管要很于净，其透光程度愈接近，测定的准确度愈高。四、注意事项1.测定OD值时，要求从低浓度到高浓度测定2.严格控制培养时间五、实验报告1.将测定的OD值填入下表：对照01. 534681012141620培养时间（h）光密度值ODeo00m2.绘制大肠杆菌的生长曲线六、问题和思考1.如果用活菌计数法制作生长曲线，你认为会有什么不同？两者各有什么优缺点？2.次生代谢产物的大量积累在哪个时期?根据细菌生长繁殖的规律，采用哪些措施可使次生代谢产物积累更多？84
84 室全部罩上，形成一个大的暗环境，另以 1 支盛有 LB 液但没有接种的试管调零点，测定样 品中培养 0h 的 OD 值。测定完毕后，取出试管置 37℃继续振荡培养。 2．分别培养 0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16 和 20h，取出培养物试管按上述方 法测定 OD 值。该方法准确度高、操作简便。但须注意的是使用的 2 支试管要很干净，其透 光程度愈接近，测定的准确度愈高。 四、注意事项 1．测定 OD 值时，要求从低浓度到高浓度测定 2．严格控制培养时间 五、实验报告 1．将测定的 OD 值填入下表： 培养时间（h） 对照 0 1.5 3 4 6 8 10 12 14 16 20 光密度值 OD600nm 2．绘制大肠杆菌的生长曲线 六、问题和思考 1．如果用活菌计数法制作生长曲线，你认为会有什么不同?两者各有什么优缺点？ 2．次生代谢产物的大量积累在哪个时期?根据细菌生长繁殖的规律，采用哪些措施可 使次生代谢产物积累更多?