实验二十五抗药性突变株的分离一、实验目的和内容目的：学习用梯度平板法分离抗药性突变株。内容：用梯度平板法分离大肠杆菌抗链霉素突变株。二、实验材料和用具大肠杆菌：Str。LB液体培养基、10mlLB琼脂培养基试管2支、链霉素、1ml无菌吸管、盛有70%乙醇的烧杯、玻璃涂棒、水浴锅等。三、操作步骤1.接种大肠杆菌于盛有5mlLB液的试管中，37℃振荡培养24小时。2．在热水浴中溶化LB琼脂培养基。3.倒10ml已溶化的不含药物的LB琼脂培养基于一套无菌培养皿中，立即将培养血一端垫起，使琼脂培养基覆盖整个底部并使培养基表面在垫起的一端刚好达到培养皿的底与边的交界处，让培养基在这一倾斜的位置凝固。（图25-1，A）4.在已凝固的平板底部高琼脂这一边标上“低”，并放回水平位置，然后再在底层培养基上加入每毫升含有100μg链霉素的LB琼脂培养基10ml，凝固后，便制得一个链霉素浓度从一端的0μg/ml到另一端的100μg/ml的梯度平板。（图25-1，B）底E区底层不含链事素上层含链毒责A图25-1链霉素浓度梯度平板5.用1ml无菌吸管吸取0.2ml大肠杆菌培养液加到梯度平板上。用无菌玻璃涂棒将菌液涂布到整个平板表面。如果用有乙醇并经火焰灭菌的玻璃涂棒，可在火焰旁或伸进平板，在板盖上稍事冷却，以免烫死细胞。6.把平板倒置于37℃培养48小时。7.选择1~2个生长在梯度平板中部的单个菌落，用无菌接种环接触单个菌落朝高药物浓度的方向划线。65
65 实验二十五 抗药性突变株的分离 一、 实验目的和内容 目的：学习用梯度平板法分离抗药性突变株。 内容：用梯度平板法分离大肠杆菌抗链霉素突变株。 二、 实验材料和用具 大肠杆菌：Strs 。 LB 液体培养基、10ml LB 琼脂培养基试管 2 支、链霉素、1ml 无菌吸管、盛有 70%乙醇的烧 杯、玻璃涂棒、水浴锅等。 三、 操作步骤 1. 接种大肠杆菌于盛有 5ml LB 液的试管中，37℃振荡培养 24 小时。 2. 在热水浴中溶化 LB 琼脂培养基。 3. 倒 10ml 已溶化的不含药物的 LB 琼脂培养基于一套无菌培养皿中，立即将培养皿一端垫 起，使琼脂培养基覆盖整个底部并使培养基表面在垫起的一端刚好达到培养皿的底与边的交界 处，让培养基在这一倾斜的位置凝固。（图 25-1，A） 4. 在已凝固的平板底部高琼脂这一边标上“低”，并放回水平位置，然后再在底层培养基上 加入每毫升含有 100μg 链霉素的 LB 琼脂培养基 10ml，凝固后，便制得一个链霉素浓度从一端 的 0μg/ml 到另一端的 100μg/ml 的梯度平板。（图 25-1，B） 图 25-1 链霉素浓度梯度平板 5. 用 1ml 无菌吸管吸取 0.2ml 大肠杆菌培养液加到梯度平板上。用无菌玻璃涂棒将菌液涂 布到整个平板表面。 如果用蘸有乙醇并经火焰灭菌的玻璃涂棒，可在火焰旁或伸进平板，在板盖上稍事冷却，以免烫死细胞。 6. 把平板倒置于 37℃培养 48 小时。 7. 选择 1~2 个生长在梯度平板中部的单个菌落，用无菌接种环接触单个菌落朝高药物浓度 的方向划线
8.把平板倒置于37℃培养48小时。四、实验报告图示经一次培养和经二次培养的梯度平板上大肠杆菌的生长情况。五、问题和思考1.梯度平板中部的单个菌落被划线朝高药物浓度方向拉开是为了测试这些菌株的抗性水平。你能设计几种不同的方法来测试这些菌株的抗性水平吗？2．培养基中的链霉素引起了抗性突变吗？请设计一个实验加以说明。3.梯度平板法除用于分离抗药性突变以外，还有什么其他用途？66
66 8. 把平板倒置于 37℃培养 48 小时。 四、 实验报告 图示经一次培养和经二次培养的梯度平板上大肠杆菌的生长情况。 五、 问题和思考 1. 梯度平板中部的单个菌落被划线朝高药物浓度方向拉开是为了测试这些菌株的抗性水 平。你能设计几种不同的方法来测试这些菌株的抗性水平吗？ 2. 培养基中的链霉素引起了抗性突变吗？请设计一个实验加以说明。 3. 梯度平板法除用于分离抗药性突变以外，还有什么其他用途？