实验二十九凝集反应实验目的和内容目的：了解血清学反应的基本原则，学习玻片凝集与试管凝集的操作与观察结果的方法。内容：1.玻片凝集试验。2.试管凝集试验。二、实验材料和用具大肠杆菌琼脂斜面培养物、大肠杆菌悬液（每毫升含10亿个大肠杆菌的生理盐水悬液，并经60℃加温半小时）、大肠杆菌免疫血清、生理盐水稀释的1:10大肠杆菌免疫血清装于小滴瓶中。生理盐水、玻片、小试管、吸管、试管架、接种环、水溶箱等。三、 操作步骤（一）玻片凝集法1.在玻片的一端用滴瓶中的小滴管加一滴1：10大肠杆菌免疫血清，另一端加一滴生理盐水。2.用接种环自大肠杆菌琼脂斜面上挑取少许细菌混入生理盐水内，并搅匀：同法挑取少许细菌混入血清内，搅勺匀。3.将玻片略为摆动后静置室温中，1~3分钟后即可观察到一端有凝集反应出现（图29-1)，另一端为生理盐水对照，仍为均匀混浊。图29-1玻片凝集实验A.稀释抗血清+大肠杆菌（阳性反应）B.阴性反应（二）试管凝集试验1.抗血清的稀释抗血清稀释采取对倍稀释法。取于净小试管10支，排列在试管架上，76
76 实验二十九 凝集反应 一、 实验目的和内容 目的：了解血清学反应的基本原则，学习玻片凝集与试管凝集的操作与观察结果的方法。 内容：1. 玻片凝集试验。 2. 试管凝集试验。 二、 实验材料和用具 大肠杆菌琼脂斜面培养物、大肠杆菌悬液（每毫升含 10 亿个大肠杆菌的生理盐水悬液，并 经 60℃加温半小时）、大肠杆菌免疫血清、生理盐水稀释的 1:10 大肠杆菌免疫血清装于小滴瓶 中。 生理盐水、玻片、小试管、吸管、试管架、接种环、水溶箱等。 三、 操作步骤 （一）玻片凝集法 1. 在玻片的一端用滴瓶中的小滴管加一滴 1：10 大肠杆菌免疫血清，另一端加一滴生理盐 水。 2. 用接种环自大肠杆菌琼脂斜面上挑取少许细菌混入生理盐水内，并搅匀；同法挑取少许 细菌混入血清内，搅匀。 3. 将玻片略为摆动后静置室温中，1~3 分钟后即可观察到一端有凝集反应出现（图 29-1）， 另一端为生理盐水对照，仍为均匀混浊。 图 29-1 玻片凝集实验 A.稀释抗血清+大肠杆菌（阳性反应）B.阴性反应 （二）试管凝集试验 1. 抗血清的稀释 抗血清稀释采取对倍稀释法。取干净小试管 10 支，排列在试管架上
依次注明号码，每支试管用移液管加入0.5ml生理盐水.用移液管吸取1：10稀释的大肠杆菌抗血清0.5ml加入第1管，在管内连续吹吸3次，使血清与生理盐水充分混合，然后吸取0.5ml加入第2管，同样混勾后吸取0.5ml加入第3管，依次类推，直至第9管，混匀后从第9管中吸取0.5ml弃去。第10管不加血清作为对照。此时从第1管到第9管的血清稀释倍数分别为1:20，1:40，1:80，1:160，1:320，1:640，1:1280，1:2560，1:5120。2.加入抗原从第10支管开始，由后向前每支管依次加入0.5ml大肠杆菌菌悬液。此时血清稀释倍数相应加大一倍。3.抗原抗体反应把各管混合液震摇混匀，将试管置37℃水浴箱中水浴4小时或在室温下过夜，观察结果。4.结果观察与效价判断（1）生理盐水对照管中的抗原（细菌）应分散无凝集块沉淀而呈混浊菌悬液。（2）试验管如有凝集，管底可见到凝集块。液体上部澄清、半澄清或浑浊度降低，管底凝集块轻摇即浮起，呈片块状。（3）凝集强弱的判断（以“+”表示）“++++”：很强，表示细菌完全凝集，凝集块完全沉于管底，菌液澄清。“+++”：很强，表示细菌绝大部分凝集，凝集块小沉于管底，菌液有轻微混浊。“++"：中等强度，表示细菌部分凝集沉于管底，凝集块呈颗粒状，菌液半澄清。“+”：弱，表示细菌少数凝集，菌液混浊。“一”：不凝集，菌液混浊与生理盐水对照管同。血清的效价就是呈现50%凝集（即++"反应）的最高血清稀释倍数。四、实验报告1.记录玻片凝集实验结果，试比较血清端与生理盐水端结果的不同，并解释其原因。2.抗血清效价测定结果。（1）抗血清效价测定结果：106710试管123489最后血清稀释倍数凝集强弱（2）确定抗血清的效价为77
77 依次注明号码，每支试管用移液管加入 0.5ml 生理盐水. 用移液管吸取 1:10 稀释的大肠杆菌抗血清 0.5ml 加入第 1 管，在管内连续吹吸 3 次，使血 清与生理盐水充分混合，然后吸取 0.5ml 加入第 2 管，同样混匀后吸取 0.5ml 加入第 3 管，依次 类推，直至第 9 管，混匀后从第 9 管中吸取 0.5ml 弃去。第 10 管不加血清作为对照。此时从第 1 管到第 9 管的血清稀释倍数分别为 1:20，1:40，1:80，1:160，1:320，1:640，1:1280，1:2560， 1:5120。 2. 加入抗原 从第 10 支管开始，由后向前每支管依次加入 0.5ml 大肠杆菌菌悬液。此时 血清稀释倍数相应加大一倍。 3. 抗原抗体反应 把各管混合液震摇混匀，将试管置 37℃水浴箱中水浴 4 小时或在室温 下过夜，观察结果。 4. 结果观察与效价判断 （1）生理盐水对照管中的抗原（细菌）应分散无凝集块沉淀而呈混浊菌悬液。 （2）试验管如有凝集，管底可见到凝集块。液体上部澄清、半澄清或浑浊度降低，管底凝 集块轻摇即浮起，呈片块状。 （3）凝集强弱的判断（以“+”表示） “++++”：很强，表示细菌完全凝集，凝集块完全沉于管底，菌液澄清。 “+++”：很强，表示细菌绝大部分凝集，凝集块小沉于管底，菌液有轻微混浊。 “++”：中等强度，表示细菌部分凝集沉于管底，凝集块呈颗粒状，菌液半澄清。 “+”：弱，表示细菌少数凝集，菌液混浊。 “－”：不凝集，菌液混浊与生理盐水对照管同。 血清的效价就是呈现 50%凝集（即“++”反应）的最高血清稀释倍数。 四、 实验报告 1. 记录玻片凝集实验结果，试比较血清端与生理盐水端结果的不同，并解释其原因。 2. 抗血清效价测定结果。 （1）抗血清效价测定结果： 试 管 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 最后血清 稀释倍数 凝集强弱 （2）确定抗血清的效价为
五、问题和思考1.为什么取“++”的抗血清最高稀释倍数作为抗血清的效价？2.在试管凝集实验中，有否出现不正常现象？并分析其原因。3.稀释血清时要注意些什么？4.加抗原时，为什么要从最后一管加起？78
78 五、 问题和思考 1. 为什么取“++”的抗血清最高稀释倍数作为抗血清的效价？ 2. 在试管凝集实验中，有否出现不正常现象？并分析其原因。 3. 稀释血清时要注意些什么？ 4. 加抗原时，为什么要从最后一管加起？