实验二十八噬菌体效价的测定实验目的和内容目的：学习噬菌体效价测定的基本方法。内容：噬菌体的效价测定。二、实验材料和用具大肠杆菌18小时培养液、大肠杆菌噬菌体10稀释液。0.9ml液体培养基的小试管4支、肉育蛋白陈琼脂平板（10ml培养基，2%琼脂，作底层平板用）5个、含4ml琼脂培养基的试管（0.7%琼脂，作上层培养基用）5管、灭菌小试管5支、灭菌1ml吸管10支、48℃水浴箱等。三、操作步骤（一）稀释噬菌体1.将4管含0.9ml液体培养基的试管分别标写10，10，10″，和10。2.用1ml无菌吸管吸0.1ml10大肠杆菌噬菌体，注入10的试管中，旋摇试管，使混匀。3.用另一支无菌吸管从10″管中吸0.1ml加入10管中，混勾，余类推，稀释至10管，如图28-1所示。唯菌体希释液A.精齐唯童体大肠扦留培养液0.1ml0.1m0.1mlU12U10-10-410-3B.加入大服杆fo.Iml10.1ml0.9.1mgigml0.9ml苗和唯菌体0.9mlm10t10-410-对照C.将混合液加入落化的上层培养基内UDH10~对照10~10-t10~11D.将已换种了的上层培养基例入底层平板，37C墙养E.现察并计数啦脂死图28-1噬菌体效价测定图解74
74 实验二十八 噬菌体效价的测定 一、 实验目的和内容 目的：学习噬菌体效价测定的基本方法。 内容：噬菌体的效价测定。 二、 实验材料和用具 大肠杆菌 18 小时培养液、大肠杆菌噬菌体 10-2稀释液。 0.9ml 液体培养基的小试管 4 支、肉膏蛋白胨琼脂平板（10ml 培养基，2%琼脂，作底层平板 用）5 个、含 4ml 琼脂培养基的试管（0.7%琼脂，作上层培养基用）5 管、灭菌小试管 5 支、灭 菌 1ml 吸管 10 支、48℃水浴箱等。 三、 操作步骤 （一）稀释噬菌体 1. 将 4 管含 0．9ml 液体培养基的试管分别标写 10-3，10-4，10-5，和 10-6 。 2. 用 1ml 无菌吸管吸 0.1ml10-2大肠杆菌噬菌体，注入 10-3的试管中，旋摇试管，使混匀。 3. 用另一支无菌吸管从 10-3管中吸 0.1ml 加入 10-4管中，混匀，余类推，稀释至 10-6管， 如图 28-1 所示。 图 28-1 噬菌体效价测定图解
（二）噬菌体与菌液混合1.将5支灭菌空试管分别标写10，10″，10°，10和对照。2.用吸管从10噬菌体稀释管吸0.1m1加入10的空试管内，用另一支吸管从10稀释管内吸0.1ml加入10空试管内，如图28-1直至10㎡管。3.将大肠杆菌培养液摇匀，用吸管取菌液0.9ml加入对照试管内，再吸0.9ml加入10°试管，如此从最后一管加起，直至10管，各管均加0.9ml大肠杆菌培养液。4.将以上试管旋摇混匀。（三）混合液加入上层培养基内1.将5管上层培养基溶化，标写10、10、10、10和对照。使冷却至48℃，并放入48℃水浴箱内。2.分别将4管混合液和对照管对号加入上层培养基试管内。每一管加入混合液后，立即旋摇混匀。（四）接种了的上层培养基倒入底层平板上1．将旋摇均匀的上层培养基迅速对号倒入底层平板上，放在台面上摇匀，使上层培养基铺满平板。2.凝固后，置37℃培养。（五）观察平板中的噬菌斑，将每一稀释度的噬菌斑形成单位（pfu）记录于实验报告表格内，并选取30~300个pfu数的平板计算每毫升未稀释的原液的噬菌体效价。噬菌体效价=pfu数×稀释倍数×10四、实验报告1.记录平板中每一稀释度的噬菌斑数于下表中。10-510-610-7对照10-4噬菌体稀释度噬苗斑数2．你测得的噬菌体效价是多少？五、问题和思考1.什么因素决定噬菌斑的大小？2.测定噬菌体的效价，操作时要注意些什么才能测定准确？75
75 （二）噬菌体与菌液混合 1. 将 5 支灭菌空试管分别标写 10-4，10-5，10-6，10-7和对照。 2. 用吸管从 10-3噬菌体稀释管吸 0.1ml 加入 10-4的空试管内，用另一支吸管从 10-4稀释管 内吸 0.1ml 加入 10-5空试管内，如图 28-1 直至 10-7管。 3. 将大肠杆菌培养液摇匀，用吸管取菌液 0．9ml 加入对照试管内，再吸 0．9ml 加入 10-7 试管，如此从最后一管加起，直至 10-4管，各管均加 0．9ml 大肠杆菌培养液。 4. 将以上试管旋摇混匀。 （三）混合液加入上层培养基内 1. 将 5 管上层培养基溶化，标写 10-4、10-5、10-6、10-7和对照。使冷却至 48℃，并放入 48 ℃水浴箱内。 2. 分别将 4 管混合液和对照管对号加入上层培养基试管内。每一管加入混合液后，立即旋 摇混匀。 （四）接种了的上层培养基倒入底层平板上 1. 将旋摇均匀的上层培养基迅速对号倒入底层平板上，放在台面上摇匀，使上层培养基铺 满平板。 2. 凝固后，置 37℃培养。 （五）观察平板中的噬菌斑，将每一稀释度的噬菌斑形成单位（pfu）记录于实验报告表格 内，并选取 30~300 个 pfu 数的平板计算每毫升未稀释的原液的噬菌体效价。 噬菌体效价=pfu 数×稀释倍数×10 四、 实验报告 1. 记录平板中每一稀释度的噬菌斑数于下表中。 2. 你测得的噬菌体效价是多少？ 五、 问题和思考 1. 什么因素决定噬菌斑的大小？ 2. 测定噬菌体的效价，操作时要注意些什么才能测定准确？