实验七放线菌形态观察一、实验目的和内容目的：辨认放线菌的营养菌丝、气生菌丝、孢子丝、孢子的形态：学习放线菌的观察方法。内容：用水封片法、玻璃纸法、印片法观察放线菌的形态特征。二、实验材料和用具细黄链霉菌（Streptomycesmicuoflavus）又称5406的培养平血，棘孢小单孢菌（Micromonosporaechinospora）的玻璃纸培养平皿。0.1%美蓝染色液，石碳酸复红染色液。盖玻片、载玻片、镊子、接种环、显微镜、涂布器、玻璃纸、打孔器。三、操作步骤（一）观察自然生长状态的放线菌用镊子小心取出用插片法培养的5406菌培养血中的一张盖玻片，将其背面附着的菌丝体擦净。然后将长有菌的一面向上放在洁净的载玻片上，用低倍镜、高倍镜观察。找出3类菌丝及其分生孢子，并绘图。注意放线菌的基内菌丝、气生菌丝的粗细和色泽差异。观察时，宜用略暗的光线。（二）水封片观察取一滴美蓝染色液置于载玻片中央，将用搭片法培养的棘孢小单孢菌培养皿中的盖玻片取出，并将有菌面朝下，放在载玻片上，浸在染色液中，制成水封片，用高倍镜观察其单个分生孢子及其基内菌丝，并绘图。（三）玻璃纸法的镜检观察1.直接玻璃纸观察分别用5406和棘孢小单孢菌的玻璃纸制片观察。制片时，于载玻片上放一小滴蒸馏水，将含菌玻璃纸片小心剪下一块，移至载玻片上，并使有菌面向上。在玻璃纸与载玻片间不能有气泡，以免影响观察。将制片于显微镜下观察，先用低倍镜观察菌的立体生长状况，再用高倍镜仔细观察。注意区分5406菌的基内菌丝、气生菌丝和弯曲状或螺旋状的孢子丝。观察棘孢小单孢菌时注意把视野调暗，其基内菌丝纤细发亮，其单个分生孢子发暗，直接生长在基内菌丝长出的小梗上。2.印片染色法观察用镊子取洁净载玻片并微微加热，然后用这微热载玻片盖在长有5406或棘抱小单抱菌的平血上，轻轻压一下，注意将载玻片垂直放下和取出，以防止载玻片水平移动18
18 实验七 放线菌形态观察 一、 实验目的和内容 目的：辨认放线菌的营养菌丝、气生菌丝、孢子丝、孢子的形态；学习放线菌的观察方法。 内容：用水封片法、玻璃纸法、印片法观察放线菌的形态特征。 二、 实验材料和用具 细黄链霉菌（Streptomyces micuoflavus）又称5406的培养平皿，棘孢小单孢菌（Micromonospora echinospora）的玻璃纸培养平皿。 0.1%美蓝染色液，石碳酸复红染色液。 盖玻片、载玻片、镊子、接种环、显微镜、涂布器、玻璃纸、打孔器。 三、 操作步骤 （一）观察自然生长状态的放线菌 用镊子小心取出用插片法培养的 5406 菌培养皿中的一张盖玻片，将其背面附着的菌丝体擦 净。然后将长有菌的一面向上放在洁净的载玻片上，用低倍镜、高倍镜观察。找出 3 类菌丝及其 分生孢子，并绘图。注意放线菌的基内菌丝、气生菌丝的粗细和色泽差异。 观察时，宜用略暗的光线。 （二）水封片观察 取一滴美蓝染色液置于载玻片中央，将用搭片法培养的棘孢小单孢菌培养皿中的盖玻片取 出，并将有菌面朝下，放在载玻片上，浸在染色液中，制成水封片，用高倍镜观察其单个分生孢 子及其基内菌丝，并绘图。 （三）玻璃纸法的镜检观察 1. 直接玻璃纸观察 分别用 5406 和棘孢小单孢菌的玻璃纸制片观察。制片时，于载玻片上 放一小滴蒸馏水，将含菌玻璃纸片小心剪下一块，移至载玻片上，并使有菌面向上。在玻璃纸与 载玻片间不能有气泡，以免影响观察。将制片于显微镜下观察，先用低倍镜观察菌的立体生长状 况，再用高倍镜仔细观察。注意区分 5406 菌的基内菌丝、气生菌丝和弯曲状或螺旋状的孢子丝。 观察棘孢小单孢菌时注意把视野调暗，其基内菌丝纤细发亮，其单个分生孢子发暗，直接生长在 基内菌丝长出的小梗上。 2. 印片染色法观察 用镊子取洁净载玻片并微微加热，然后用这微热载玻片盖在长有 5406 或棘孢小单孢菌的平皿上，轻轻压一下，注意将载玻片垂直放下和取出，以防止载玻片水平移动
而破坏放线菌的自然形态。反转有印痕的载玻片微微加热固定，用石炭酸复红染色1min，水洗，晾干。用油镜观察。绘图。注意比较两种菌的形态特征有何不同。四、注意事项1.培养放线菌中要注意，放线菌的生长速度较慢，培养期较长，在操作中应特别注意无菌操作，严防杂菌污染。2.玻璃纸法培养接种时注意玻璃纸与平板琼脂培养基间不宜有气泡，以免影响其表面放线菌的生长。3.不同观察方法中严格按要求进行，注意菌体的上下位置。五、实验报告1．绘图玻璃纸法、水封片法、印片法及自然生长状态下观察的放线菌形态。2.试比较5406菌与棘孢小单孢菌特征的异同。六、问题与思考1．在高倍镜或油镜下如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？2.用插片法和搭片法如何制备放线菌标本，其主要优点是什么？可否用此法观察其他微生物？为什么？3．以玻璃纸覆盖法培养和观察放线菌有何优点？试用此法设计一个观察青霉菌形态的实验。19
19 而破坏放线菌的自然形态。反转有印痕的载玻片微微加热固定，用石炭酸复红染色 1min，水洗， 晾干。用油镜观察。绘图。注意比较两种菌的形态特征有何不同。 四、 注意事项 1. 培养放线菌中要注意，放线菌的生长速度较慢，培养期较长，在操作中应特别注意无菌 操作，严防杂菌污染。 2. 玻璃纸法培养接种时注意玻璃纸与平板琼脂培养基间不宜有气泡，以免影响其表面放线 菌的生长。 3. 不同观察方法中严格按要求进行，注意菌体的上下位置。 五、 实验报告 1. 绘图 玻璃纸法、水封片法、印片法及自然生长状态下观察的放线菌形态。 2. 试比较 5406 菌与棘孢小单孢菌特征的异同。 六、 问题与思考 1. 在高倍镜或油镜下如何区分放线菌的基内菌丝和气生菌丝？ 2. 用插片法和搭片法如何制备放线菌标本，其主要优点是什么？可否用此法观察其他微生 物？为什么？ 3. 以玻璃纸覆盖法培养和观察放线菌有何优点？试用此法设计一个观察青霉菌形态的实 验