实验三细菌的简单染色法一、实验目的和内容目的：巩固无菌操作技术，掌握细菌的涂片和简单染色技术。内容：学习细菌简单染色操作技术二、实验材料和用具大肠杆菌（E.coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcusaureus）的斜面菌种吕氏碱性美蓝染液（或草酸铵结晶紫染液）、石炭酸复红染色液、香柏油、二甲苯、无菌水。显微镜、擦镜纸、接种环、酒精灯、载玻片、吸水纸。三、操作步骤1.涂片取两块洁净的载玻片，在其中央各滴一小滴无菌水，用接种环以无菌操作的方法从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成薄膜，涂布面积约1~1.5cm（图3-1）载玻片要洁净无油脂，滴无菌水和取菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。图3-1简单染色的制片方法2.干燥将涂片于室温中自然干燥。3.固定手执载玻片一端，使涂菌的一面朝上，将载玻片通过火焰2~3次。在火上固定时，用手摸玻片背面，以不烫手为宜。不能将载玻片在火上烤，否则细菌形态毁坏。此操作过程称热固定，其目的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。4.染色将涂片置于水平位置，滴加染色液覆盖于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜）。吕氏碱性美蓝染色1~2min；石炭酸复红（或草酸铵结晶紫）染色约1min。5.水洗倾去染色液，斜置载玻片，用自来水的细水流由载玻片上端流下，不得直接冲在涂菌处，直至从载玻片上流下的水中无染色液的颜色为止。8
8 实验三 细菌的简单染色法 一、 实验目的和内容 目的：巩固无菌操作技术，掌握细菌的涂片和简单染色技术。 内容：学习细菌简单染色操作技术 二、 实验材料和用具 大肠杆菌（E.coli）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的斜面菌种 吕氏碱性美蓝染液（或草酸铵结晶紫染液）、石炭酸复红染色液、香柏油、二甲苯、无菌水。 显微镜、擦镜纸、接种环、酒精灯、载玻片、吸水纸。 三、 操作步骤 1. 涂片 取两块洁净的载玻片，在其中央各滴一小滴无菌水，用接种环以无菌操作的方法 从菌种斜面挑取少量菌体与水滴充分混匀，涂成薄膜，涂布面积约 1~1.5cm2 （图 3-1） 载玻片要洁净无油脂，滴无菌水和取菌不宜过多；涂片要涂抹均匀，不宜过厚。 图 3-1 简单染色的制片方法 2. 干燥 将涂片于室温中自然干燥。 3. 固定 手执载玻片一端，使涂菌的一面朝上，将载玻片通过火焰 2~3 次。在火上固定时， 用手摸玻片背面，以不烫手为宜。不能将载玻片在火上烤，否则细菌形态毁坏。 此操作过程称热固定，其目的是使细胞质凝固，以固定细胞形态，并使之牢固附着在载玻片上。 4. 染色 将涂片置于水平位置，滴加染色液覆盖于涂片上（染液刚好覆盖涂片薄膜为宜） 。 吕氏碱性美蓝染色 1~2min；石炭酸复红（或草酸铵结晶紫）染色约 1min。 5. 水洗 倾去染色液，斜置载玻片，用自来水的细水流由载玻片上端流下，不得直接冲在 涂菌处，直至从载玻片上流下的水中无染色液的颜色为止
6.干燥自然晾干或用吸水纸轻轻地吸干，注意不要擦掉菌体。7.待标本完全干燥后，先用低倍镜和高倍镜观察，将典型部位移至视野中央，再用油镜观察。四、 注意事项载玻片要洁净无止，否则菌液涂不开。涂片时，滴水不要过多，挑菌量宜少，菌膜宜薄。五、实验报告绘制染色后观察到的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的形态图。六、问题和思考1．涂片在染色前为什么要先进行固定？固定时应注意什么问题？2.制备染色装片时应注意哪些事项，为什么？制片为什么要完全干燥后才能用油镜观察？9
9 6. 干燥 自然晾干或用吸水纸轻轻地吸干，注意不要擦掉菌体。 7. 待标本完全干燥后，先用低倍镜和高倍镜观察，将典型部位移至视野中央，再用油镜观 察。 四、 注意事项 载玻片要洁净无止，否则菌液涂不开。涂片时，滴水不要过多，挑菌量宜少，菌膜宜薄。 五、 实验报告 绘制染色后观察到的大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的形态图。 六、 问题和思考 1. 涂片在染色前为什么要先进行固定？固定时应注意什么问题？ 2. 制备染色装片时应注意哪些事项，为什么？制片为什么要完全干燥后才能用油镜观察？