实验二无菌苗的培养一、实验目的学习外植体的灭菌与接种方法，熟悉无菌操作技术，为下一次实验培养无菌苗。二、实验内容外植体的灭菌与接种：分4组，合做1份，每人接种1瓶。三、实验用品1.仪器与器血：超净工作台4台，光照培养箱；灭菌的100ml烧杯或三角瓶10个、长镊子10把、培养血10套、吸水纸条4份、牙签若干、无菌1.5ml离心管若干；酒精灯6-8个、废液缸6-8个。2.材料与试剂：去皮甜瓜籽仁250粒，或烟草种子若干，75%乙醇，1%氯化汞溶液300ml，MS基本培养基32瓶，灭菌蒸馏水8-10份（每份200ml），75%乙醇。四、实验方法1、实验前的准备：将酒精灯、废液缸和镊子等用具置于超净工作台中，打开风机，再开紫外灯照射25min，然后关闭紫外灯，开大风机。2、实验操作：在自来水管下将手洗净，再用酒精棉（75%乙醇浸泡）擦拭双手，然后进入超净台进行如下操作；1）点燃酒精灯；2）将甜瓜籽或烟草种子置于小烧杯中，加入0.1or1%氯化汞（或次氯酸钠）溶液20~25ml，不时摇动灭菌约10/8min；（如为烟草，则所有操作均在1.5ml离心管内完成，所加试剂量0.5~1ml）1
1 实验二 无菌苗的培养 一、实验目的 学习外植体的灭菌与接种方法，熟悉无菌操作技术，为下一次实验培养无菌 苗。 二、实验内容 外植体的灭菌与接种：分 4 组，合做 1 份，每人接种 1 瓶。 三、实验用品 1. 仪器与器皿：超净工作台 4 台，光照培养箱；灭菌的 100ml 烧杯或三角瓶 10 个、长镊子 10 把、培养皿 10 套、吸水纸条 4 份、牙签若干、无菌 1.5ml 离心管 若干；酒精灯 6-8 个、废液缸 6-8 个。 2. 材料与试剂：去皮甜瓜籽仁 250 粒，或烟草种子若干，75%乙醇，1%氯化汞溶 液 300ml，MS 基本培养基 32 瓶，灭菌蒸馏水 8-10 份（每份 200ml），75%乙醇。 四、实验方法 1、实验前的准备： 将酒精灯、废液缸和镊子等用具置于超净工作台中，打开风机，再开紫外灯照射 25min，然后关闭紫外灯，开大风机。 2、实验操作： 在自来水管下将手洗净，再用酒精棉（75%乙醇浸泡）擦拭双手，然后进入超净 台进行如下操作； 1）点燃酒精灯； 2）将甜瓜籽或烟草种子置于小烧杯中，加入 0.1or1%氯化汞（或次氯酸钠）溶 液 20~25ml，不时摇动灭菌约 10/8min；（如为烟草，则所有操作均在 1.5ml 离 心管内完成，所加试剂量 0.5~1ml）
3)用灭菌水漂洗5次，最后用吸水纸吸干水分，用镊子夹取接种在MS培养基上，每瓶接种5-10粒；（如为烟草，则用牙签沾取种子接种在培养基上。）4）用封口膜封口，在三角瓶壁上标好姓名和日期，置于25℃、光照条件下培养。以上所有操作尽量在酒精灯前进行。五、观察记录2~3天后开始观察培养物的萌发与污染情况六、实验报告：每人一份。1.实验目的2.实验方法3.实验结果与分析3.1用流程图表示甜瓜（或烟草）无菌苗的培养过程。3.2统计成苗率与污染率，分析引起污染的原因。2
2 3） 用灭菌水漂洗 5 次，最后用吸水纸吸干水分，用镊子夹取接种在 MS 培养基 上，每瓶接种 5-10 粒；（如为烟草，则用牙签沾取种子接种在培养基上。） 4） 用封口膜封口，在三角瓶壁上标好姓名和日期，置于 25℃、光照条件下培 养。 以上所有操作尽量在酒精灯前进行。 五、观察记录 2~3 天后开始观察培养物的萌发与污染情况。 六、实验报告：每人一份。 1. 实验目的 2. 实验方法 3. 实验结果与分析 3.1 用流程图表示甜瓜（或烟草）无菌苗的培养过程。 3.2 统计成苗率与污染率，分析引起污染的原因