实验三十七水中细菌总数的测定一、实验目的和内容目的：学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法，了解水源水的平板菌落计数的原则。内容：应用平板计数技术测定水中细菌总数。二、实验材料和用具肉膏蛋白陈琼脂培养基、灭菌水。灭菌三角烧瓶、灭菌的带玻璃塞瓶、灭菌培养皿、灭菌吸管、灭菌试管等。三、操作步骤（一）水样的采取1.自来水先将自来水龙头用火焰烧灼3分钟灭菌，再开放水龙头使水流5分钟后，以灭菌三角烧瓶接取水样，以待分析。2.池水、河水或湖水应取距水面10~15cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。（二）细菌总数测定1.自来水（1）用灭菌吸管吸取1ml水样，注入灭菌培养皿中。共做两个平皿。（2）分别倾注约15ml已溶化并冷却到45℃左右的肉膏蛋白陈琼脂培养基，并立即在桌上作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。（3）另取一空的灭菌培养皿，倾注肉育蛋白陈琼脂培养基15ml，作空白对照。（4）培养基凝固后，倒置于37℃温箱中，培养24小时，进行菌落计数两个平板的平均菌落数即为1ml水样的细菌总数。2.池水、河水或湖水等（1）稀释水样取3个灭菌空试管，分别加入9ml灭菌水。取1ml水样注入第一管9ml灭菌水内，摇匀，再自第一管取1ml至下一管灭菌水内，如此稀释到第三管，稀释度分别为10"、10与10″。稀释倍数看水样污浊程度而定，以培养后平板的菌落数在30~300个之间的稀释度最为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。一般中等污秒水样，取10、10、10三个连续稀释度，污移严重的取10、10″、10三个连续100
100 实验三十七 水中细菌总数的测定 一、 实验目的和内容 目的：学习水样的采取方法和水样细菌总数测定的方法，了解水源水的平板菌落计数的原则。 内容：应用平板计数技术测定水中细菌总数。 二、 实验材料和用具 肉膏蛋白胨琼脂培养基、灭菌水。 灭菌三角烧瓶、灭菌的带玻璃塞瓶、灭菌培养皿、灭菌吸管、灭菌试管等。 三、 操作步骤 （一）水样的采取 1. 自来水 先将自来水龙头用火焰烧灼 3 分钟灭菌，再开放水龙头使水流 5 分钟后，以灭 菌三角烧瓶接取水样，以待分析。 2. 池水、河水或湖水 应取距水面 10~15cm 的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向 下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出， 最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。 （二）细菌总数测定 1. 自来水 （1）用灭菌吸管吸取 1ml 水样，注入灭菌培养皿中。共做两个平皿。 （2）分别倾注约 15ml 已溶化并冷却到 45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，并立即在桌上 作平面旋摇，使水样与培养基充分混匀。 （3）另取一空的灭菌培养皿，倾注肉膏蛋白胨琼脂培养基 15ml，作空白对照。 （4）培养基凝固后，倒置于 37℃温箱中，培养 24 小时，进行菌落计数。 两个平板的平均菌落数即为 1ml 水样的细菌总数。 2. 池水、河水或湖水等 （1）稀释水样取 3 个灭菌空试管，分别加入 9ml 灭菌水。取 1ml 水样注入第一管 9ml 灭 菌水内，摇匀，再自第一管取 1ml 至下一管灭菌水内，如此稀释到第三管，稀释度分别为 10-1、 10-2与 10-3。稀释倍数看水样污浊程度而定，以培养后平板的菌落数在 30~300 个之间的稀释度最 为合适，若三个稀释度的菌数均多到无法计数或少到无法计数，则需继续稀释或减小稀释倍数。 一般中等污秽水样，取 10-1、10-2、10-3三个连续稀释度，污秽严重的取 10-2、10-3、10-4三个连续
稀释度。（2）自最后三个稀释度的试管中各取1Ⅲ1稀释水加入空的灭菌培养Ⅲ中，每一稀释度做两个培养皿。（3）各倾注15ml已溶化并冷却至45℃左右的肉膏蛋白陈琼脂培养基，立即放在桌上摇匀。（4）凝固后倒置于37℃培养箱中培养24小时。（三）菌落计数方法1.先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个平板有较大片状菌苔生长时，则不应采用，而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到平板的一半，而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘2以代表全平板的菌落数，然后再计算该稀释度的平均菌落数。2.首先选择平均菌落数在30~300之间的，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数（见表37-1，例1）。3.若有两个稀释度的平均菌落数均在30~300之间，则按两者菌落总数之比值来决定。若其比值小于2，应采取两者的平均数：若大于2，则取其中较小的菌落总数（见表37-1，例2及例3)。4.若所有稀释度的平均菌落数均大于300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数（见表37-1，例4)。5.若所有稀释度的平均菌落数均小于30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数（见表37-1，例5）6.若所有稀释度的平均菌落数均不在30~300之间，则以最近300或30的平均菌落数乘以稀释倍数（见表37-1，例6）。表37-1计算菌落总数方法举例不同稀释度的平均菌落数两个稀释度菌落总数例次备注10-110-210-3菌落数之比（个ml)16420-1136516400或1.6×10两位以后295461.637750或3.8×10422760的数字采27100 或 2.7 × 10427.1603289022取四舍五-513000或5.1×1054无法计数1650513入的方法27115270或2.7×1025-去掉6无法计数30512-30500或3.1 ×104四、实验报告101
101 稀释度。 （2）自最后三个稀释度的试管中各取 1ml 稀释水加入空的灭菌培养皿中，每一稀释度做两 个培养皿。 （3）各倾注 15ml 已溶化并冷却至 45℃左右的肉膏蛋白胨琼脂培养基，立即放在桌上摇匀。 （4）凝固后倒置于 37℃培养箱中培养 24 小时。 （三）菌落计数方法 1. 先计算相同稀释度的平均菌落数。若其中一个平板有较大片状菌苔生长时，则不应采用， 而应以无片状菌苔生长的平板作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌苔的大小不到平板的一半， 而其余的一半菌落分布又很均匀时，则可将此一半的菌落数乘 2 以代表全平板的菌落数，然后再 计算该稀释度的平均菌落数。 2. 首先选择平均菌落数在 30~300 之间的，当只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时， 则以该平均菌落数乘其稀释倍数即为该水样的细菌总数（见表 37-1，例 1）。 3. 若有两个稀释度的平均菌落数均在 30~300 之间，则按两者菌落总数之比值来决定。若其 比值小于 2，应采取两者的平均数；若大于 2，则取其中较小的菌落总数（见表 37-1，例 2 及例 3）。 4. 若所有稀释度的平均菌落数均大于 300，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数 （见表 37-1，例 4）。 5. 若所有稀释度的平均菌落数均小于 30，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数 （见表 37-1，例 5） 6. 若所有稀释度的平均菌落数均不在 30~300 之间，则以最近 300 或 30 的平均菌落数乘以 稀释倍数（见表 37-1，例 6）。 表 37-1 计算菌落总数方法举例 四、 实验报告
1.自来水平板苗落数1ml自来水中细菌总数122.池水、河水或湖水等10-110-210-3稀释度平板211221苗蓓数平均菌落数计算方法田菌总数/rml五、问题和思考1.从自来水的细菌总数结果来看，是否合乎饮用水的标准？2.你所测的水源水的污移程度如何？102
102 1. 自来水 2. 池水、河水或湖水等 五、 问题和思考 1. 从自来水的细菌总数结果来看，是否合乎饮用水的标准？ 2. 你所测的水源水的污秽程度如何？