实验三十八实验室环境和人体表面微生物的检查一、实验目的和内容1．通过实验确证在实验室内的空气、器、物和人体体表上存在着微生物2.比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型，观察不同类群微生物的菌落形态特征。3．体会无菌操作的重要性。二、实验材料和用具1.培养基肉膏蛋白陈琼脂平板2.溶液和试剂无菌水3.仪器和其他用品火菌湿棉签，试管架，酒精灯，记号笔，镊子，废物缸等。三、基本原理进入空气中的微生物菌体和霉菌的孢子，或“漂浮”在空气中，或附在空气中细小的尘埃上，或沉落在桌面、地面、人体体表的皮肤、手指上；实验室的门把手、钱币经多人的触摸也会沾染微生物，有时甚全会污染病原微生物。如何知道我们周围存在看不见的微生物呢？也就是说如何使“看不见”变得“看得见”呢？显微镜技术是其中一种方法，这是通过放大微生物个体，使我们能够看到它们；另一种方法是通过“放大”成子细胞群体（菌落），使我们看到它们的存在，即通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万个菌聚集在一起的肉眼可见的菌落（colony）。本实验将采取后一种方法检查实验室环境和人体表面的微生物，从而使学生牢固树立“无菌概念”。平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在37℃温度下培养，1~2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及质地疏松或紧密等。霉菌和放线菌在培养基上形成紧密或疏松的菌丝，菌丝体上生成不同颜色和不同形状的孢子，其菌落也有絮状、蛛网状、绒状和放射状等明显的特征。因此，通过营养琼脂平板上生长出的微生物菌落，可以确证微生物在自然环境中的存在，根据菌落的形态特征可以初103
103 实验三十八 实验室环境和人体表面微生物的检查 一、实验目的和内容 1. 通过实验确证在实验室内的空气、器、物和人体体表上存在着微生物。 2. 比较来自不同场所与不同条件下细菌的数量和类型，观察不同类群微生物的菌落形态特 征。 3. 体会无菌操作的重要性。 二、实验材料和用具 1. 培养基 肉膏蛋白胨琼脂平板 2. 溶液和试剂 无菌水 3. 仪器和其他用品 灭菌湿棉签，试管架，酒精灯，记号笔，镊子，废物缸等。 三、基本原理 进入空气中的微生物菌体和霉菌的孢子，或“漂浮”在空气中，或附在空气中细小的尘埃上， 或沉落在桌面、地面、人体体表的皮肤、手指上；实验室的门把手、钱币经多人的触摸也会沾染 微生物，有时甚至会污染病原微生物。如何知道我们周围存在看不见的微生物呢?也就是说如何 使“看不见”变得“看得见”呢?显微镜技术是其中一种方法，这是通过放大微生物个体，使我 们能够看到它们；另一种方法是通过“放大”成子细胞群体(菌落)，使我们看到它们的存在，即 通过培养的方法使肉眼看不见的单个菌体在固体培养基上，经过生长繁殖形成几百万个菌聚集在 一起的肉眼可见的菌落(colony)。本实验将采取后一种方法检查实验室环境和人体表面的微生 物，从而使学生牢固树立“无菌概念”。 平板培养基含有细菌生长所需要的营养成分，当取自不同来源的样品接种于培养基上，在37 ℃温度下培养，1~2天内每一菌体即能通过很多次细胞分裂而进行繁殖，形成一个可见的细胞群 体的集落，称为菌落。每一种细菌所形成的菌落都有它自己的特点，例如菌落的大小，表面干燥 或湿润、隆起或扁平、粗糙或光滑，边缘整齐或不整齐，菌落透明或半透明或不透明，颜色以及 质地疏松或紧密等。霉菌和放线菌在培养基上形成紧密或疏松的菌丝，菌丝体上生成不同颜色和 不同形状的孢子，其菌落也有絮状、蛛网状、绒状和放射状等明显的特征。因此，通过营养琼脂 平板上生长出的微生物菌落，可以确证微生物在自然环境中的存在，根据菌落的形态特征可以初
步识别各种不同类群的微生物。四、操作步骤1.标记任何一个实验，在动手操作前均需首先将器血用记号笔做上记号，培养皿的记号一般写在皿底上。如果写在皿盖上，同时观察两个以上培养皿的结果，打开血盖时，容易混淆。用记号笔写上班级、姓名、日期，本次实验还要写上样品来源（如实验室空气或无菌室空气或头发等），为了不影响观察，可用符号或数字代表（图38-1）。姓名营免E25℃ABFDGCH图38-1平板底部标记A.洗前手指：B.洗后手指：C.头发；D.鼻腔：E.实验台：F.门旋钮：G.灰尘；H.无菌水2.人体表面微生物的检查1)手指表面：在火焰旁，半开Ⅲ盖，用洗前的手指在平板的A区轻轻按一下，迅速盖上血盖。然后用肥皂清洗手2次，自然干燥后，在B区轻轻按一下，迅速盖上皿盖。(2)头发：将你的1-2根头发轻轻放在平板的C区，迅速盖上皿盖。(3)皮肤：酒精灯火焰旁取出灭菌的湿棉签在自已的任意皮肤上擦拭数次后，立即在平板的D区轻轻摩擦2-3次，盖上血盖，将用过的棉签扔到废物缸中。3.实验室环境的检查（取样的来源可以延伸·.··）（1)以组为单位开展本实验，每组准备一个平板，标记为“实验室空气”，在实验室打开皿盖，使琼脂培养基表面完全暴露在空气中；另全班准备一个平板标记“无菌操作”的平板直接放在培养箱中培养，作为大家的对照。(2)酒精灯火焰旁取出灭菌湿棉签，在实验台面擦拭约2cm的范围，然后将棉签从平板的开启处伸进平板表面，在图I-1标示的E区滚动一下，立即闭合皿盖，放回棉签。(3)用同样的方法将擦拭了门旋钮的棉签在图I-1标示的F区进行滚动接种，将沾有灰尘的棉签在G区接种。将灭菌棉签在H区接种。4.培养104
104 步识别各种不同类群的微生物。 四、操作步骤 1. 标记 任何一个实验，在动手操作前均需首先将器皿用记号笔做上记号，培养皿的记号一般写在皿 底上。如果写在皿盖上，同时观察两个以上培养皿的结果，打开皿盖时，容易混淆。用记号笔写 上班级、姓名、日期，本次实验还要写上样品来源（如实验室空气或无菌室空气或头发等），为 了不影响观察，可用符号或数字代表(图38-1)。 图38-1 平板底部标记 A.洗前手指；B. 洗后手指；C.头发；D.鼻腔；E.实验台；F.门旋钮；G.灰尘；H.无菌水 2. 人体表面微生物的检查 (1)手指表面：在火焰旁，半开皿盖，用洗前的手指在平板的A区轻轻按一下，迅速盖上皿盖。 然后用肥皂清洗手2次，自然干燥后，在B区轻轻按一下，迅速盖上皿盖。 (2)头发：将你的1-2根头发轻轻放在平板的C区，迅速盖上皿盖。 (3)皮肤：酒精灯火焰旁取出灭菌的湿棉签在自己的任意皮肤上擦拭数次后，立即在平板的D 区轻轻摩擦2-3次，盖上皿盖，将用过的棉签扔到废物缸中。 3. 实验室环境的检查（取样的来源可以延伸••••••） (1)以组为单位开展本实验，每组准备一个平板，标记为“实验室空气”，在实验室打开皿 盖，使琼脂培养基表面完全暴露在空气中；另全班准备一个平板标记“无菌操作”的平板直接放 在培养箱中培养，作为大家的对照。 (2)酒精灯火焰旁取出灭菌湿棉签，在实验台面擦拭约2cm2 的范围，然后将棉签从平板的开 启处伸进平板表面，在图I-1标示的E区滚动一下，立即闭合皿盖，放回棉签。 (3)用同样的方法将擦拭了门旋钮的棉签在图I-1标示的F区进行滚动接种，将沾有灰尘的棉 签在G区接种。将灭菌棉签在H区接种。 4. 培养
将所有的琼脂平板翻转，使皿底朝上，置37℃培养1~2d。五、实验报告1.微生物检查结果将平板培养结果记录于下表38-1中，并作简要说明：表38-1结果记录表实验室无菌操cDEFGHB作空气菌落数量菌落类型（大小、形状、透明程度、颜色等）简要说明菌落数量可用+和-符号表示，从多到少依次为：++++，+++，++，根据菌落大小、形状、高度、于湿等特征观察不同的菌落类型。但要注意，如果细菌数量太多，会使很多菌落生长在一起，或者限制了菌落生长而变得很小，因而外观不典型，故观察菌落的特点时，要选择分离得很开的单个菌落。菌落特征描写方法如下：（a）大小：大、中、小、针尖状。可先将整个平板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、小的标准，或由教师指出一个大小范围。105
105 将所有的琼脂平板翻转，使皿底朝上，置37℃培养1~2d。 五、实验报告 1. 微生物检查结果 将平板培养结果记录于下表38-1中，并作简要说明： 表38-1结果记录表 A B C D E F G H 实 验 室 空气 无 菌 操 作 菌落数量 菌落类型(大 小、形状、 透明程度、 颜色等) 简要说明 菌落数量可用+和-符号表示，从多到少依次为：++++，+++，++，+，-。 根据菌落大小、形状、高度、干湿等特征观察不同的菌落类型。但要注意，如果细菌数量太 多，会使很多菌落生长在一起，或者限制了菌落生长而变得很小，因而外观不典型，故观察菌落 的特点时，要选择分离得很开的单个菌落。 菌落特征描写方法如下： （a）大小：大、中、小、针尖状。可先将整个平板上的菌落粗略观察一下，再决定大、中、 小的标准，或由教师指出一个大小范围
（b）颜色：黄色、金黄色、灰色、乳白色、红色、粉红色等。（c）干湿情况：干燥、湿润、粘稠。（d）形态：圆形、不规则等。（e）高度扁平、隆起、凹下。（f）透明程度：透明、半透明、不透明。（g）边缘：整齐、不整齐。2．以科技论文形式提交报告。六、问题与思考1.本实验为什么用肉膏蛋白陈琼脂培养基和37℃温度？2.列举2一3类微生物，说明它们在本实验条件下（牛肉膏蛋白陈琼脂平板，37℃)不能生长。3.比较各种来源的样品，哪一种菌落数和菌落类型最多?为什么？4．比较洗手前后菌落数的变化，谈谈你的体会。洗手后仍有少量细菌生长，你认为是什么原因?为什么接种完毕后，接种环还必须灼烧后再放回原处，吸管也必须放进废物筒中？5.完成本实验后，你是否已体会到我们生活在微生物的包围中？你如何体会“微生物既是我们的朋友又是我们的敌人”？106
106 （b）颜色：黄色、金黄色、灰色、乳白色、红色、粉红色等。 （c）干湿情况：干燥、湿润、粘稠。 （d）形态：圆形、不规则等。 （e）高度扁平、隆起、凹下。 （f）透明程度：透明、半透明、不透明。 （g）边缘：整齐、不整齐。 2. 以科技论文形式提交报告。 六、问题与思考 1. 本实验为什么用肉膏蛋白胨琼脂培养基和37℃温度? 2. 列举2－3类微生物，说明它们在本实验条件下(牛肉膏蛋白胨琼脂平板，37℃)不能生长。 3. 比较各种来源的样品，哪一种菌落数和菌落类型最多?为什么? 4. 比较洗手前后菌落数的变化，谈谈你的体会。洗手后仍有少量细菌生长，你认为是什么 原因?为什么接种完毕后，接种环还必须灼烧后再放回原处，吸管也必须放进废物筒中? 5. 完成本实验后，你是否已体会到我们生活在微生物的包围中?你如何体会“微生物既是我 们的朋友又是我们的敌人”?