实验四十一多管发酵法测定水中大肠菌群实验目的和内容目的：学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法，了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。内容：用多管发酵法检测大肠菌群。二、实验材料和用具乳糖蛋白陈发酵管（内有倒置小套管）、三倍浓缩乳糖蛋白陈发酵管（瓶）（内有倒置小套管）、伊红美蓝琼脂平板、灭菌水。载玻片、灭菌带玻璃塞空瓶、灭菌吸管、灭菌试管等。三、操作步骤（一）水样的采取同实验37。（二）自来水检查1.初（步）发酵试验在2个含有50ml三倍浓缩的乳糖蛋白陈发酵烧瓶中，各加入100ml水样。在10支含有5ml三倍浓缩乳糖蛋白陈发酵管中，各加入10ml水样（如图41-1）。混匀后，37℃培养24小时，24小时未产气的继续培养至48小时。三倍浓细乳糖亚自陈水各50ml三倍农乳糖蛋白族水各sml1100ml水样100m10mnmO0ml奶发酸37C塔养试验24h肉8h*48h内口产气声气不产气阳性可蒙钢性伊红美蓝平板上划线有核心和带金光泽的深37℃塔养平板分高241用准乳精蛋白涂片，草兰氏染色陈发醇管复发摩（证37C墙养24h实）试验明性阳性乳精发解管不产气乳糖发牌管产气开品车轩管图41-1多管发酵法测定水中大肠菌群的操作步骤和结果解释111
111 实验四十一 多管发酵法测定水中大肠菌群 一、 实验目的和内容 目的：学习测定水中大肠菌群数量的多管发酵法，了解大肠菌群的数量在饮水中的重要性。 内容：用多管发酵法检测大肠菌群。 二、 实验材料和用具 乳糖蛋白胨发酵管（内有倒置小套管）、三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管（瓶）（内有倒置小套管）、 伊红美蓝琼脂平板、灭菌水。 载玻片、灭菌带玻璃塞空瓶、灭菌吸管、灭菌试管等。 三、 操作步骤 （一）水样的采取 同实验 37。 （二）自来水检查 1. 初（步）发酵试验 在 2 个含有 50ml 三倍浓缩的乳糖蛋白胨发酵烧瓶中，各加入 100ml 水样。在 10 支含有 5ml 三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵管中，各加入 10ml 水样（如图 41-1）。混匀后， 37℃培养 24 小时，24 小时未产气的继续培养至 48 小时。 图 41-1 多管发酵法测定水中大肠菌群的操作步骤和结果解释
2.平板分离经24小时培养后，将产酸产气及48小时产酸产气的发酵管（瓶），分别划线接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于37℃下培养18~24小时，将符合下列特征的菌落的一小部分，进行涂片，革兰氏染色，镜检。（1）深紫黑色、有金属光泽。（2）紫黑色、不带或略带金属光泽。（3）淡紫红色、中心颜色较深。3．复发酵试验经涂片、染色、镜检，如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取该菌落的另一部分，重新接种于普通浓度的乳糖蛋白陈发酵管中，每管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落1~3个，37℃培养24小时，结果若产酸又产气，即证实有大肠菌群存在。证实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性管（瓶）数查表41-1，即得大肠菌群数。表41-1大肠菌群检数表接种水样总量300ml（100ml2份，10ml10份）012100rl水量的阳性管数每升水样中每升水样中每升水样中10ml水量的阳性管数大肠苗群数大肠苗群数大肠苗群数0<3411138187213273111838414245251830706223692727431208315116193660230104069> 230（三）池水、河水或湖水等的检查1.将水样稀释成10″与10。2.分别吸取1m110、10的稀释水样和1ml原水样，各注入装有10ml普通浓度乳糖蛋白陈发酵管中。另取10ml和100ml原水样，分别注入装有5ml和50ml三倍浓缩乳糖蛋白陈发酵液的试管（瓶）中。3．以下步骤同上述自来水的平板分离和复发酵试验。4.将100、10、1、0.1（10"）ml水样的发酵管结果查表41-2，将10、1、0.1（10）、0.01112
112 2. 平板分离 经 24 小时培养后，将产酸产气及 48 小时产酸产气的发酵管（瓶），分别划线 接种于伊红美蓝琼脂平板上，再于 37℃下培养 18~24 小时，将符合下列特征的菌落的一小部分， 进行涂片，革兰氏染色，镜检。 （1）深紫黑色、有金属光泽。 （2）紫黑色、不带或略带金属光泽。 （3）淡紫红色、中心颜色较深。 3. 复发酵试验 经涂片、染色、镜检，如为革兰氏阴性无芽孢杆菌，则挑取该菌落的另一 部分，重新接种于普通浓度的乳糖蛋白胨发酵管中，每管可接种来自同一初发酵管的同类型菌落 1~3 个， 37℃培养 24 小时，结果若产酸又产气，即证实有大肠菌群存在。 证实有大肠菌群存在后，再根据初发酵试验的阳性管（瓶）数查表 41-1，即得大肠菌群数。 表 41-1 大肠菌群检数表 （三）池水、河水或湖水等的检查 1. 将水样稀释成 10-1与 10-2 。 2. 分别吸取 1ml10-2、10-1的稀释水样和 1ml 原水样，各注入装有 10ml 普通浓度乳糖蛋白胨 发酵管中。另取 10ml 和 100ml 原水样，分别注入装有 5 ml 和 50ml 三倍浓缩乳糖蛋白胨发酵液 的试管（瓶）中。 3. 以下步骤同上述自来水的平板分离和复发酵试验。 4. 将 100、10、1、0.1（10-1）ml 水样的发酵管结果查表 41-2，将 10、1、0.1（10-1）、0.01
（10）㎡l水样的发酵管结果查表41-3，即得每升水样中的大肠菌群数。表41-2大肠菌群检数表10rl-1rrl.接种水样总量111,1l（100l0.1l客1份）接种水样量（ml）每升水样中110大肠苗群数1000.1一一--<9一一-+9--+-9--+-9.5-一++18--++19-一++22-+一-23+1++28+！-+921+-+94一+++180++--230-+++960++一+2380++++>2380“+”大肠茵群发酵阳性：6大肠菌群发酵阴性。表41-3大肠菌群检数表10-1-0.1 ~接种水样总量11.11lC0.01ml客1份）ml)接种水样量（每升水样中10.1大肠苗群数100.01----<90一-一+90---+90一-+-95-一++180-+-+190一-++220+1一一230+++-280+一一+920+--+9.40+1++1800+一+一2300++-+9600+-++23800++++23800“+发酵阳性：发酵阴性。113
113 （10-2）ml 水样的发酵管结果查表 41-3，即得每升水样中的大肠菌群数。 表 41-2 大肠菌群检数表 表 41-3 大肠菌群检数表
四、实验报告1.自来水100ml水样的阳性管数是多少？10ml水样的阳性管数是多少？查表41-1得每升水样中大肠菌群数是多少？2.池水、河水或湖水阳性结果记“+”；阴性结果记“_”。查表41-2得每升水样中大肠菌群数是多少？查表41-3得每升水样中大肠菌群数是多少？水样管/ml发酵结果1001010. 10. 01五、问题和思考1.大肠菌群的定义是什么？2.EMB培养基含有哪几种主要成分？在检查大肠菌群时，各起什么作用？3.经检查，水样是否合乎饮用标准？4.为什么要选择大肠菌群作为水源被肠道病原菌污染的指示菌？114
114 四、 实验报告 1. 自来水 100ml 水样的阳性管数是多少？ 10ml 水样的阳性管数是多少？ 查表 41-1 得每升水样中大肠菌群数是多少？ 2. 池水、河水或湖水 阳性结果记“+”；阴性结果记“-”。 查表 41-2 得每升水样中大肠菌群数是多少？ 查表 41-3 得每升水样中大肠菌群数是多少？ 水样管/ml 发 酵 结 果 100 10 1 0.1 0.01 五、 问题和思考 1. 大肠菌群的定义是什么？ 2. EMB 培养基含有哪几种主要成分？在检查大肠菌群时，各起什么作用？ 3. 经检查，水样是否合乎饮用标准？ 4. 为什么要选择大肠菌群作为水源被肠道病原菌污染的指示菌？