实验四十抗生素抗菌谱及抗生菌的抗药性测定一、实验目的和内容目的：学习抗生素抗菌谱的测定方法，了解常见抗生素的抗菌谱。内容：1.供试菌的培养与制备。2.抗生素抗菌谱的测定。二、实验材料和用具金黄色葡萄球菌(Staphylocuccusaureus）、大肠杆菌（E.coli)斜面菌种（野生株及不同抗药程度的抗链霉素菌株3株)。牛肉膏蛋白陈培养基斜面。供试抗生素：氨芋青霉素、氯霉素、卡那霉素、链霉素和四环素。恒温培养箱、镊子、圆滤纸片（直径为8.5mm)或牛律杯、培养Ⅲ（直径12cm）。三、操作步骤（一）供试菌的培养基制备金黄色葡萄球菌（代表革兰氏阳性菌）和大肠杆菌（代表革兰氏阴性菌）接种在牛肉膏蛋白陈琼脂斜面上，置37℃下培养18一24h，取出后用5mL无菌水洗下，使成菌悬液备用。（二）配制所需浓度的抗生素各抗生素分别配制成以下浓度：氨青霉素100ug／mL（溶于水），氯霉素200ug/mL（溶于乙醇），卡那霉素100ug/mL（溶于水），链霉素100卡那霉素ug/mL（溶于水），四环素100卡那霉素（溶于乙醇），配制好的溶液经0.45um的滤膜无菌过滤后备用。(三)抗生素抗菌谱的测定采用液体扩散法，分别吸取供试菌悬液0.5mL加在牛肉膏、蛋白陈琼脂平板上，用无菌涂布器涂布均匀（每个学生两只平板，一只涂布大肠杆菌，另一只涂布金黄色葡萄球菌），待平板表面液体渗干后，在血底用蜡笔分成6等份，每一等份标明一种抗生素，设一无菌水作对照，用滤纸片法或杯碟法测定。具体方法是：用无菌镊子将滤纸片浸入上述抗生素溶液中，取出，并在瓶内壁除去多余的药液，以无菌操作将纸片对号转放到接好供试菌的平板的小区内，或将牛律杯置于供试菌的平板上，加入一定量的抗生素溶液置37℃.培养18一24h，测定抑菌圈的直径，用抑菌圈的大小来表示抗生素的抗菌谱。（四）抗生素的抗药性测定1.制备链霉素药物平板取4套无菌培养血，皿底标记编号，从链霉素溶液（100ug/mL)中，分别吸出0.2、0.4、0.6和0.8mL.加至以上培养Ⅲ皿中，倒人冷却至50℃的融化牛肉育蛋白陈培养基中，迅速混匀，制成药物平板，待凝后在每个平皿的皿底划分成4份，并注明1一4号，备用。2.抗药性测定在以上1一3号空格上分别接上不同抗药程度的抗链霉素菌株3株，在4号接入野生型菌株作对照，37℃培养24h后观察菌生长情况，并记录。以“+”表示生长，以“一”表示不生长。四、注意事项1.供试菌液涂布于平板后，待菌液稍干再加入滤纸片或牛律杯。2.制备药物平板时，注意把药物与培养基充分混匀。五、实验报告1.将抗生素的抗菌结果填入表格。2.根据以上结果说明供试抗生素的抗菌谱。3.记录不同大肠杆菌的抗药性测定结果。109
109 实验四十 抗生素抗菌谱及抗生菌的抗药性测定 一、实验目的和内容 目的：学习抗生素抗菌谱的测定方法，了解常见抗生素的抗菌谱。 内容： 1．供试菌的培养与制备。 2．抗生素抗菌谱的测定。 二、实验材料和用具 金黄色葡萄球菌(Staphylocuccus aureus)、大肠杆菌(E．coli)斜面菌种(野生株及不同抗药程 度的抗链霉素菌株3株)。 牛肉膏蛋白胨培养基斜面。 供试抗生素：氨苄青霉素、氯霉素、卡那霉素、链霉素和四环素。 恒温培养箱、镊子、圆滤纸片(直径为8．5mm)或牛律杯、培养皿(直径12cm) 。 三、操作步骤 (一) 供试菌的培养基制备 金黄色葡萄球菌(代表革兰氏阳性菌)和大肠杆菌(代表革兰氏阴性菌)接种在牛肉膏蛋白胨 琼脂斜面上，置37℃下培养18—24h，取出后用5mL无菌水洗下，使成菌悬液备用。 (二) 配制所需浓度的抗生素 各抗生素分别配制成以下浓度：氨苄青霉素100ug／mL(溶于水)，氯霉素200 ug／mL (溶于 乙醇)，卡那霉素100 ug／mL (溶于水)，链霉素100卡那霉素ug／mL (溶于水)，四环素100卡那 霉素(溶于乙醇)，配制好的溶液经0．45um的滤膜无菌过滤后备用。 (三)抗生素抗菌谱的测定 采用液体扩散法，分别吸取供试菌悬液 0.5 mL 加在牛肉膏、蛋白胨琼脂平板上，用无菌涂 布器涂布均匀(每个学生两只平板，一只涂布大肠杆菌，另一只涂布金黄色葡萄球菌)，待平板表 面液体渗干后，在皿底用蜡笔分成 6 等份，每一等份标明一种抗生素，设一无菌水作对照，用滤 纸片法或杯碟法测定。具体方法是：用无菌镊子将滤纸片浸入上述抗生素溶液中，取出，并在瓶 内壁除去多余的药液，以无菌操作将纸片对号转放到接好供试菌的平板的小区内，或将牛律杯置 于供试菌的平板上，加入一定量的抗生素溶液．置 37℃．培养 18—24h，测定抑菌圈的直径，用 抑菌圈的大小来表示抗生素的抗菌谱。 (四) 抗生素的抗药性测定 1．制备链霉素药物平板 取4套无菌培养皿，皿底标记编号，从链霉素溶液(100 ug／mL)中， 分别吸出0.2、0.4、0.6和0.8mL．加至以上培养皿中，倒人冷却至50℃的融化牛肉育蛋白胨培养 基中，迅速混匀，制成药物平板，待凝后在每个平皿的皿底划分成4份，并注明1—4号，备用。 2．抗药性测定 在以上1—3号空格上分别接上不同抗药程度的抗链霉素菌株3株，在4号接入 野生型菌株作对照，37℃培养24h后观察菌生长情况，并记录。以“+”表示生长，以“一”表示 不生长。 四、注意事项 1. 供试菌液涂布于平板后，待菌液稍干再加入滤纸片或牛律杯。 2. 制备药物平板时，注意把药物与培养基充分混匀。 五、实验报告 1. 将抗生素的抗菌结果填入表格。 2．根据以上结果说明供试抗生素的抗菌谱。 3．记录不同大肠杆菌的抗药性测定结果
六、问题和思考抗生素对微个物的作用机制有几种?举例说明之。1.2．如供试菌为酵母菌、放线菌或霉菌，应如何测定抗生素的抗菌谱？110
110 六、问题和思考 1．抗生素对微个物的作用机制有几种?举例说明之。 2．如供试菌为酵母菌、放线菌或霉菌，应如何测定抗生素的抗菌谱?