实验一培养基的配制一、实验目的掌握MS培养基母液及MS培养基的配制与灭菌方法，并为后续实验配制培养基。二、实验内容1.实验室设置与基本设备简介2.MS培养基母液的配制3.MS基本培养基及愈伤组织诱导培养基的配制与灭菌三、实验分组分4组：1、MS培养基母液的配制：每组各配一种母液。2、MS基本培养基的配制与灭菌：1+2组、3+4组各配500ml。四、实验用品1、仪器与器血：天平、高压灭菌锅、电炉；药匙、称量纸、烧杯、量筒、玻棒、试剂瓶（500、1000ml）、pH计与pH试纸（4~8）、三角瓶（100ml，70个）、封口膜、记号笔等。2、试剂与药品：见表1。3、激素母液：6-BA0.5mg/mL，1AA0.5mg/mL。）4、0.5mol/L的NaOH和HCl。五、实验方法1.MS培养基母液的配制（称量见表1）1
1 实验一 培养基的配制 一、实验目的 掌握 MS 培养基母液及 MS 培养基的配制与灭菌方法，并为后续 实验配制培养基。 二、实验内容 1. 实验室设置与基本设备简介 2. MS 培养基母液的配制 3. MS 基本培养基及愈伤组织诱导培养基的配制与灭菌 三、实验分组 分 4 组： 1、MS 培养基母液的配制：每组各配一种母液。 2、MS 基本培养基的配制与灭菌：1+2 组、3+4 组各配 500ml。 四、实验用品 1、仪器与器皿：天平、高压灭菌锅、电炉；药匙、称量纸、烧杯、 量筒、玻棒、试剂瓶（500、1000 ml）、pH 计与 pH 试纸（4~8）、三 角瓶（100 ml,70 个）、封口膜、记号笔等。 2、试剂与药品：见表 1。 3、激素母液： 6-BA 0.5 mg/mL, IAA 0.5mg/mL。） 4、0.5mol/L 的 NaOH 和 HCl。 五、实验方法 1. MS 培养基母液的配制（称量见表 1）
1.1大量元素母液（10倍液）浓度大于0.5mM或100mg/L。分别称取10倍用量的各种大量无机盐，溶解于大约600ml略加热的蒸留水中（注意：前3种成分可在一起溶解，KH,PO。和CaCl2：2H20须单独溶解后再混合），冷却后定容至1000ml，装入试剂瓶中。1.2微量元素母液（100倍液）浓度低于0.5mM或100mg/L，一般10-7~10M。分别称取100倍用量的微量无机盐，溶解于500800ml蒸馏水中，定容至1000ml，装入试剂瓶中。1.3铁盐母液（100倍液）分别称取50倍用量的Na2-EDTA·2H20（乙二胺四乙酸二钠）和FeS0：7H20，各自加热（约50℃）溶解于约200m/蒸馏水中，混合、冷却、定容至500ml（75~80℃螯合1h），装入棕色试剂瓶中，用力振荡1~2min，以防沉淀。1.4有机物质母液（100倍液）分别称取50倍用量的各种有机物质，溶解于400ml蒸馏水中，定容到500ml，装入棕色试剂瓶中。注意：所有母液均需标明名称、浓缩倍数和配制日期，储存在4℃冰箱，一般可存放3周左右。如果沉淀或长菌，原则上丢弃。2.MS基本培养基的配制与灭菌（用于实验2无菌苗的培养，1+2组、3+4组各配500ml）1）取1000ml烧杯一只，加入蒸馏水400ml，然后加入大量元素10倍母液50ml，微量元素、铁盐、有机物质100倍母液各5ml，蔗糖2
2 1.1大量元素母液（10 倍液） 浓度大于 0.5mM 或 100mg/L。 分别称取 10 倍用量的各种大量无机盐，溶解于大约 600ml 略加 热的蒸馏水中（注意：前 3 种成分可在一起溶解，KH2PO4 和 CaCl2·2H20 须单独溶解后再混合），冷却后定容至 1000ml，装入试 剂瓶中。 1.2 微量元素母液（100 倍液） 浓度低于 0.5 mM 或 100 mg/L, 一般 10-7 ~10-5 M。 分别称取 100 倍用量的微量无机盐，溶解于 500~800ml 蒸馏水 中，定容至 1000 ml，装入试剂瓶中。 1.3 铁盐母液（100 倍液） 分别称取 50 倍用量的 Na2-EDTA·2H2O（乙二胺四乙酸二钠） 和 FeSO4·7H2O，各自加热（约 50℃）溶解于约 200ml 蒸馏水中，混 合、冷却、定容至 500ml（75~80℃螯合 1h），装入棕色试剂瓶中， 用力振荡 1~2min, 以防沉淀。 1.4 有机物质母液（100 倍液） 分别称取 50 倍用量的各种有机物质，溶解于 400ml 蒸馏水中， 定容到 500ml，装入棕色试剂瓶中。 注意：所有母液均需标明名称、浓缩倍数和配制日期，储存在 4℃ 冰箱，一般可存放 3 周左右。如果沉淀或长菌，原则上丢弃。 2. MS 基本培养基的配制与灭菌（用于实验 2 无菌苗的培养，1+2 组、3+4 组各配 500ml） 1） 取 1000ml 烧杯一只，加入蒸馏水 400ml，然后加入大量元素 10 倍母液 50ml，微量元素、铁盐、有机物质 100 倍母液各 5ml，蔗糖
15g，用磁力搅拌器使其完全溶解。2）用0.5mol/L的NaOH或HCI（通常MS培养基pH在4.2左右，用Na0H调）调pH为5.8，加蒸馏水定容至500ml。3）加入琼脂粉3.5g，在电炉上加热溶解。4）将溶解好的培养基分装到100ml三角瓶中，每瓶装30~35ml，用封口膜封口，进行高压高温蒸气灭菌。5）灭菌方法：将分装好培养基的三角瓶放入金属框中，装入已加入适量蒸留水的灭菌锅内：盖好锅盖，打开放汽阀，关闭安全阀，接通电源：待水烧开排净冷空气后，关闭放汽阀，使温度升至121℃（1.06kg/cm或0.105Mpa）并持续15~20min切断电源，待压力表指针回零时，打开放汽阀排出剩余蒸汽，开锅取物。注意：锅内加水不足易造成干烧而损坏灭菌锅：锅内残存冷空气会使升温减慢甚至达不到预期温度；灭菌温度过高会使糖类焦化，可能有毒；灭菌时间过长会使有机物分解、盐沉淀、培养基难凝固；过早开阀会使培养基外溢。6）在三角瓶壁上标好培养基名称、小组名和日期，存放于阴凉洁净处。3、愈伤组织诱导培养基的配制与灭菌（用于实验3愈伤组织诱导）1）取1000ml烧杯一只，加入蒸馏水400ml，然后加入大量元素10倍母液50ml，微量元素、铁盐、有机物质100倍母液各5ml，蔗糖15g，用磁力搅拌器使其完全溶解。2）第3组：1AA：0.4mg/L，6-BA：1mg/L（终浓度）；加IAA母液1.3ml（终浓度1.3mg/L），加6-BA母液0.5mL（终浓度3
3 15g，用磁力搅拌器使其完全溶解。 2）用 0.5mol/L 的 NaOH 或 HCl(通常 MS 培养基 pH 在 4.2 左右，用 NaOH 调)调 pH 为 5.8，加蒸馏水定容至 500ml。 3）加入琼脂粉 3.5g，在电炉上加热溶解。 4） 将溶解好的培养基分装到 100ml 三角瓶中，每瓶装 30~35ml， 用封口膜封口，进行高压高温蒸气灭菌。 5）灭菌方法：将分装好培养基的三角瓶放入金属框中，装入已加入 适量蒸馏水的灭菌锅内；盖好锅盖，打开放汽阀，关闭安全阀，接 通电源；待水烧开排净冷空气后，关闭放汽阀，使温度升至 121℃ （1.06kg/cm2或 0.105Mpa)并持续 15~20min；切断电源，待压力表 指针回零时，打开放汽阀排出剩余蒸汽，开锅取物。 注意： 锅内加水不足易造成干烧而损坏灭菌锅；锅内残存冷空气会使 升温减慢甚至达不到预期温度；灭菌温度过高会使糖类焦化，可能 有毒；灭菌时间过长会使有机物分解、盐沉淀、培养基难凝固；过 早开阀会使培养基外溢。 6）在三角瓶壁上标好培养基名称、小组名和日期，存放于阴凉洁净 处。 3、愈伤组织诱导培养基的配制与灭菌（用于实验3愈伤组织诱导） 1） 取 1000ml 烧杯一只，加入蒸馏水 400ml，然后加入大量元素 10 倍母液 50ml，微量元素、铁盐、有机物质 100 倍母液各 5ml，蔗糖 15g，用磁力搅拌器使其完全溶解。 2） 第 3 组：IAA：0.4mg/L，6-BA：1mg/L（终浓度）； 加 IAA 母液 1.3ml (终浓度 1.3mg/L)，加 6-BA 母液 0.5mL (终浓度
0.5mg/L），第4组：加1AA母液0.7mL（终浓度0.7mg/L），加6-BA母液0.5mL（终浓度0.5mg/L）。3）用0.5mol/L的NaOH或HCl（通常MS培养基pH在4.2左右，用Na0H调）调pH为5.8，加蒸馏水定容至500ml。4）加入琼脂粉3.5g，在电炉上加热溶解。5）将溶解好的培养基分装到100ml三角瓶中，每瓶装30~35ml，用封口膜封口，进行高压高温蒸气灭菌。6灭菌方法：将分装好培养基的三角瓶放入金属框中，装入已加入适量蒸馏水的灭菌锅内；盖好锅盖，打开放汽阀，关闭安全阀，接通电源；待水烧开排净冷空气后，关闭放汽阀，使温度升至121℃（1.06kg/cm或0.105Mpa）并持续15~20min；切断电源，待压力表指针回零时，打开放汽阀排出剩余蒸汽，开锅取物。注意：锅内加水不足易造成干烧而损坏灭菌锅：锅内残存冷空气会使升温减慢甚至达不到预期温度；灭菌温度过高会使糖类焦化，可能有毒；灭菌时间过长会使有机物分解、盐沉淀、培养基难凝固；过早开阀会使培养基外溢。7）在三角瓶壁上标好培养基名称、小组名和日期，存放于阴凉黑暗处（IAA见光分解）。六、实验报告：每人一份。1.实验目的2.实验方法：按你所在小组所做的内容写，可用流程图表示。2.1MS培养基母液的配制：种类与数量。4
4 0.5mg/L)，第 4 组：加 IAA 母液 0.7mL（终浓度 0.7mg/L)，加 6-BA 母液 0.5mL (终浓度 0.5mg/L)。 3） 用 0.5mol/L 的 NaOH 或 HCl (通常 MS 培养基 pH 在 4.2 左右， 用 NaOH 调)调 pH 为 5.8，加蒸馏水定容至 500ml。 4）加入琼脂粉 3.5g，在电炉上加热溶解。 5）将溶解好的培养基分装到 100ml 三角瓶中，每瓶装 30~35ml，用 封口膜封口，进行高压高温蒸气灭菌。 6）灭菌方法：将分装好培养基的三角瓶放入金属框中，装入已加入 适量蒸馏水的灭菌锅内；盖好锅盖，打开放汽阀，关闭安全阀，接 通电源；待水烧开排净冷空气后，关闭放汽阀，使温度升至 121℃ （1.06kg/cm2或 0.105Mpa)并持续 15~20min；切断电源，待压力表 指针回零时，打开放汽阀排出剩余蒸汽，开锅取物。 注意： 锅内加水不足易造成干烧而损坏灭菌锅；锅内残存冷空气会使 升温减慢甚至达不到预期温度；灭菌温度过高会使糖类焦化，可能 有毒；灭菌时间过长会使有机物分解、盐沉淀、培养基难凝固；过 早开阀会使培养基外溢。 7）在三角瓶壁上标好培养基名称、小组名和日期，存放于阴凉黑暗 处（IAA见光分解）。 六、实验报告：每人一份。 1. 实验目的 2. 实验方法：按你所在小组所做的内容写，可用流程图表示。 2.1 MS 培养基母液的配制：种类与数量
2.2MS基本培养基的配制与灭菌，2.3愈伤组织诱导培养基的配制与灭菌3.实验现象与问题。5
5 2.2 MS 基本培养基的配制与灭菌。 2.3 愈伤组织诱导培养基的配制与灭菌。 3. 实验现象与问题