实验四、愈伤组织的继代与分化培养一、实验目的学习愈伤组织的继代培养方法；巩固无菌操作技术；观察愈伤或培养物的再生情况及其形态特点。二、实验原理愈伤在生长一段时间后，由于营养、水分减少和代谢物等积累，使其生长减缓甚至变褐衰亡，须转接到新鲜培养基上进行继代培养或分化培养。通常，生长素/细胞分裂素比值低利于芽的分化，高则利于根的分化。将外植体或愈伤接种到激素配比适宜的培养基上培养，可以通过器官发生或体胚发生途径获得再生植株。三、实验用品器血与设备同前；用实验三培养的甜瓜/烟草愈伤或子叶外植体，分化培养基（老师准备，同实验三）。四、实验内容及操作方法注意：四人一组，每组2-3瓶培养基；挑选培养物量大或者培养基少的优先转接。1）超净工作台等准备工作：同前。2）将三角瓶用75%酒精喷雾后放入超净工作台中，在酒精灯火焰前取下封口膜，用镊子将培养物夹取、转接到装有新鲜培养基的三角瓶中。如果愈伤或子叶较大，或分化出根，则用镊子或剪刀将根切除，并将愈伤切割成0.5cm见方的小块（在培养血中进行），然后再进行转接。3）封好瓶口，标好姓名和接种日期。4）将接种后的三角瓶置于25℃、每天16h光照和8h黑暗条件下培养。五、观察记载内容与实验报告1、观察记载内容每人接种数，4人小组接种总数；外植体/培养物的变化及其形态特征，再生情况；污染情况等。每隔3天观察一次。2、实验报告1
1 实验四、 愈伤组织的继代与分化培养 一、实验目的 学习愈伤组织的继代培养方法；巩固无菌操作技术；观察愈伤或培养物的再 生情况及其形态特点。 二、实验原理 愈伤在生长一段时间后，由于营养、水分减少和代谢物等积累，使其生长减 缓甚至变褐衰亡，须转接到新鲜培养基上进行继代培养或分化培养。 通常，生长素/细胞分裂素比值低利于芽的分化，高则利于根的分化。将外 植体或愈伤接种到激素配比适宜的培养基上培养，可以通过器官发生或体胚发生 途径获得再生植株。 三、实验用品 器皿与设备同前；用实验三培养的甜瓜/烟草愈伤或子叶外植体，分化培养 基（老师准备，同实验三）。 四、实验内容及操作方法 注意：四人一组，每组 2-3 瓶培养基；挑选培养物量大或者培养基少的优先转接。 1）超净工作台等准备工作：同前。 2）将三角瓶用 75%酒精喷雾后放入超净工作台中，在酒精灯火焰前取下封口膜， 用镊子将培养物夹取、转接到装有新鲜培养基的三角瓶中。如果愈伤或子叶较大， 或分化出根，则用镊子或剪刀将根切除，并将愈伤切割成 0.5 cm 见方的小块（在 培养皿中进行），然后再进行转接。 3）封好瓶口，标好姓名和接种日期。 4）将接种后的三角瓶置于 25℃、每天 16 h 光照和 8 h 黑暗条件下培养。 五、观察记载内容与实验报告 1、观察记载内容 每人接种数，4 人小组接种总数；外植体/培养物的变化及其形态特征，再生情 况；污染情况等。每隔 3 天观察一次。 2、实验报告
1）实验目的2）实验原理里3)实验方法：可用流程图表示4)实验结果与分析A.描述培养物的变化及其形态特征；B.统计再生率与污染率，并对结果进行分析。再生率=分化绿芽（不定根/小植株/胚状体）的愈伤或外植体数/接种总数×100%。说明：实验报告每人一份，实验结果与分析如有抄袭，涉者均按不及格论处2
2 1） 实验目的 2） 实验原理 3） 实验方法：可用流程图表示 4） 实验 结果与分析 A. 描述培养物的变化及其形态特征；B. 统计再生率与污染率，并对结果进行分 析。 再生率=分化绿芽（不定根/小植株/胚状体）的愈伤或外植体数/接种总数×100%。 说明：实验报告每人一份，实验结果与分析如有抄袭，涉者均按不及格论处