附录丨染色液的配制一、吕氏（Loeffler）碱性美蓝染液0. 6gA液：美蓝(methyleneblue)95%乙醇30ml0.01gB液：KOH蒸馏水100ml分别配制A液和B液，配好后混合即可。二、齐氏(Zieh1)石炭酸复红染色液A液：碱性复红（basicfuchsin）0. 3g95%乙醇10mlB液：石炭酸5. 0g蒸馏水95ml将碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入95%乙醇，继续研磨使其溶解，配成A液。将石炭酸溶解于水中，配成B液。混合A液及B液即成。通常可将此混合液稀释5~10倍使用，稀释液易变质失效，一次不宜多配。三、革兰氏(Gram)染色液1.草酸铵结晶紫染液2gA液：结晶紫(crystalviolet)95%乙醇20mlB液：草酸铵（ammonium oxalate）0. 8g蒸馏水80ml混合A、B二液，静置48小时后使用。2.卢戈氏(Lugol)碘液碘片1. 0g2.0g碘化钾蒸馏水300ml先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分即成。3.95%的乙醇溶液。140
140 附录 I 染色液的配制 一、吕氏(Loeffler)碱性美蓝染液 A 液：美蓝(methylene blue) 0.6g 95%乙醇 30ml B 液：KOH 0.01g 蒸馏水 100ml 分别配制 A 液和 B 液，配好后混合即可。 二、齐氏(Ziehl)石炭酸复红染色液 A 液：碱性复红(basic fuchsin) 0.3g 95%乙醇 10ml B 液：石炭酸 5.0g 蒸馏水 95ml 将碱性复红在研钵中研磨后，逐渐加入 95%乙醇，继续研磨使其溶解，配成 A 液。 将石炭酸溶解于水中，配成 B 液。 混合 A 液及 B 液即成。通常可将此混合液稀释 5~10 倍使用，稀释液易变质失效，一次不宜 多配。 三、革兰氏(Gram)染色液 1．草酸铵结晶紫染液 A 液：结晶紫(crystal violet) 2g 95%乙醇 20ml B 液：草酸铵(ammonium oxalate) 0.8g 蒸馏水 80ml 混合 A、B 二液，静置 48 小时后使用。 2．卢戈氏(Lugol)碘液 碘片 1.0g 碘化钾 2.0g 蒸馏水 300ml 先将碘化钾溶解在少量水中，再将碘片溶解在碘化钾溶液中，待碘全溶后，加足水分即成。 3．95%的乙醇溶液
4.番红复染液番红（safranine0)2.5g100ml95%乙醇取上述配好的番红乙醇溶液10ml与80ml蒸馏水混匀即成。四、芽孢染色液1.孔雀绿染液孔雀绿(malachitegreen)5g蒸馏水100ml2.番红水溶液番红0.5g蒸馏水100ml3.苯酚品红溶液碱性品红11g无水乙醇100ml取上述溶液10ml与100m15%的苯酚溶液混合，过滤备用。4.黑色素（nigrosin）溶液水溶性黑色素10g蒸馏水100ml称取10g黑色素溶于100ml蒸馏水中，置沸水浴中30min后，滤纸过滤二次，补加水到100ml，加0.5ml甲醛，备用。五、英膜染色液1.黑色素水溶液黑色素5g蒸馏水100ml福尔马林（40%甲醛）0. 5ml将黑色素在蒸馏水中煮沸5min，然后加入福尔马林作防腐剂。2.番红染液与革兰氏染液中番红复染液相同。六、鞭毛染色液1.硝酸银鞭毛染色液141
141 4．番红复染液 番红(safranine O) 2.5g 95%乙醇 100ml 取上述配好的番红乙醇溶液 10ml 与 80ml 蒸馏水混匀即成。 四、芽孢染色液 1．孔雀绿染液 孔雀绿(malachite green) 5g 蒸馏水 100ml 2．番红水溶液 番红 0.5g 蒸馏水 100ml 3．苯酚品红溶液 碱性品红 11g 无水乙醇 100ml 取上述溶液 10ml 与 100ml5%的苯酚溶液混合，过滤备用。 4．黑色素(nigrosin)溶液 水溶性黑色素 10g 蒸馏水 100ml 称取 10g 黑色素溶于 100ml 蒸馏水中，置沸水浴中 30min 后，滤纸过滤二次，补加水到 100ml， 加 0.5ml 甲醛，备用。 五、荚膜染色液 1．黑色素水溶液 黑色素 5g 蒸馏水 100ml 福尔马林(40%甲醛) 0.5ml 将黑色素在蒸馏水中煮沸 5min，然后加入福尔马林作防腐剂。 2．番红染液 与革兰氏染液中番红复染液相同。 六、鞭毛染色液 1. 硝酸银鞭毛染色液
5gA液：单宁酸FeCls1. 5g100ml蒸馏水2. 0ml福尔马林(15%）1. 0ml NaOH(1%)冰箱内可保存3~7d，延长保存期会产生沉淀，但用滤纸除去沉淀后，仍能使用。2gB液：AgNOs蒸馏水100ml待AgNO溶解后，取出10ml备用，向其余的90m1AgNO中滴入浓NH,ON，使之成为很浓厚的悬浮液，再继续滴加NHaOH，直到新形成的沉淀又重新刚刚溶解为止。再将备用的10m1AgNOs慢慢滴入，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状沉淀又消失，再滴入AgNO3，直到摇动后仍呈现轻微而稳定的薄雾状沉淀为止。冰箱内保存通常10d内仍可使用。如雾重，则银盐沉淀出，不宜使用。2.Leifson氏鞭毛染色液1.2gA液：碱性复红95%乙醇100ml3gB液：单宁酸蒸馏水100mlC液：NaC11. 5g100ml蒸馏水临用前将A、B、C液等量混合均匀使用。三种溶液分别于室温保存可保存几周，若分别置冰箱保存，可保存数月。混合液装密封瓶内置冰箱几周仍可使用。七、富尔根氏核染色液1.席夫氏(Schiff)试剂将1g碱性复红加入200ml煮沸的蒸馏水中，振荡5min，冷至50℃左右过滤，再加入1mo1/LHC120ml，摇匀。等冷至25℃时，加Na2S20s（偏重亚硫酸钠）3g，摇匀后装在棕色瓶中，用黑纸包好，放置暗处过夜，此时试剂应为淡黄色（如为粉红色则不能用），再加中性活性炭过滤，滤液振荡1min后，再过滤，将此滤液置冷暗处备用(注意：过滤需在避光条件下进行)。在整个操作过程中所用的一切器皿都需十分洁净、干燥，以消除还原性物质。2.Schandium固定液142
142 A 液：单宁酸 5g FeCl3 1.5g 蒸馏水 100ml 福尔马林(15%) 2.0ml NaOH(1%) 1.0ml 冰箱内可保存 3~7d，延长保存期会产生沉淀，但用滤纸除去沉淀后，仍能使用。 B 液：AgNO3 2g 蒸馏水 100ml 待 AgNO3溶解后，取出 10ml 备用，向其余的 90mlAgNO3中滴入浓 NH4ON，使之成为很浓厚的 悬浮液，再继续滴加 NH4OH，直到新形成的沉淀又重新刚刚溶解为止。再将备用的 10mlAgNO3慢 慢滴入，则出现薄雾，但轻轻摇动后，薄雾状沉淀又消失，再滴入 AgNO3，直到摇动后仍呈现轻 微而稳定的薄雾状沉淀为止。冰箱内保存通常 10d 内仍可使用。如雾重，则银盐沉淀出，不宜使 用。 2. Leifson 氏鞭毛染色液 A 液：碱性复红 1.2g 95%乙醇 100ml B 液：单宁酸 3g 蒸馏水 100ml C 液：NaCl 1.5g 蒸馏水 100ml 临用前将 A、B、C 液等量混合均匀使用。三种溶液分别于室温保存可保存几周，若分别置冰 箱保存，可保存数月。混合液装密封瓶内置冰箱几周仍可使用。 七、富尔根氏核染色液 1．席夫氏(Schiff)试剂 将 1g 碱性复红加入 200ml 煮沸的蒸馏水中，振荡 5min，冷至 50℃左右过滤，再加入 1mol/LHC120ml，摇匀。等冷至 25℃时，加 Na2S2O5(偏重亚硫酸钠)3g，摇匀后装在棕色瓶中，用 黑纸包好，放置暗处过夜，此时试剂应为淡黄色(如为粉红色则不能用)，再加中性活性炭过滤， 滤液振荡 1min 后，再过滤，将此滤液置冷暗处备用(注意：过滤需在避光条件下进行)。 在整个操作过程中所用的一切器皿都需十分洁净、干燥，以消除还原性物质。 2．Schandium 固定液
A液：饱和升汞水溶液50ml升汞水溶液加95%酒精25ml混合即得。B液：冰醋酸取A液9毫升+B液1毫升，混匀后加热至60℃。3.亚硫酸水溶液10%偏重亚硫酸钠水溶液5ml，1mo1/LHC15ml，加蒸馏水100ml混合即得。八、Bouin氏固定液75ml苦味酸饱和水溶液25ml福尔马林（40%甲醛）冰醋酸5ml1g苦味酸可制成75ml饱和水溶液。先将苦味酸溶解成水溶液，然后再加入福尔马林和冰醋酸摇匀即成。九、乳酸石炭酸棉蓝染色液石炭酸10g乳酸（比重1.21)10ml甘油20ml蒸馏水10ml棉蓝（cottonblue)0. 02g将石炭酸加在蒸馏水中加热溶解，然后加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，使其溶解即成。十、瑞氏（Wright）染色液0.3g瑞氏染料粉末甘油3ml 甲醇97ml将染料粉末置于干燥的乳内研磨，先加甘油，后加甲醇，放玻璃瓶中过夜，过滤即可。十一、美蓝（Levowitz-Weber）染液在52ml95%乙醇和44ml四氯乙烷的三角烧瓶中，慢慢加入0.6g氯化美蓝（methylenebluechloride），旋摇三角烧瓶，使其溶解。放5~10℃下，12~24h，然后加入4ml冰醋酸。用质量好的滤纸如WhatmanNo.42或与之同质量的滤纸过滤。贮存于清洁的密闭容器内。十二、姬姆萨（Giemsa）染液姬姆萨染料0. 5g143
143 A 液：饱和升汞水溶液 50ml 升汞水溶液加 95%酒精 25ml 混合即得。 B 液：冰醋酸 取 A 液 9 毫升+B 液 1 毫升，混匀后加热至 60℃。 3．亚硫酸水溶液 10%偏重亚硫酸钠水溶液 5ml，1mol/LHCl5ml，加蒸馏水 100ml 混合即得。 八、Bouin 氏固定液 苦味酸饱和水溶液 75ml 福尔马林(40%甲醛) 25ml 冰醋酸 5ml 1g 苦味酸可制成 75ml 饱和水溶液。 先将苦味酸溶解成水溶液，然后再加入福尔马林和冰醋酸摇匀即成。 九、乳酸石炭酸棉蓝染色液 石炭酸 10g 乳酸(比重 1.21) 10ml 甘油 20ml 蒸馏水 10ml 棉蓝(cottonblue) 0.02g 将石炭酸加在蒸馏水中加热溶解，然后加入乳酸和甘油，最后加入棉蓝，使其溶解即成。 十、瑞氏(Wright)染色液 瑞氏染料粉末 0.3g 甘油 3ml 甲醇 97ml 将染料粉末置于干燥的乳缽内研磨，先加甘油，后加甲醇，放玻璃瓶中过夜，过滤即可。 十一、美蓝(Levowitz-Weber)染液 在 52ml95%乙醇和 44ml 四氯乙烷的三角烧瓶中，慢慢加入 0.6g 氯化美蓝(methylene blue chloride)，旋摇三角烧瓶，使其溶解。放 5~10℃下，12~24h，然后加入 4ml 冰醋酸。用质量好 的滤纸如 What manNo.42 或与之同质量的滤纸过滤。贮存于清洁的密闭容器内。 十二、姬姆萨（Giemsa）染液 姬姆萨染料 0.5g
甘油33ml甲醇33ml将姬姆萨染料研细，然后边加入甘油边继续研磨，最后加入甲醇混匀，放56℃1~24h后，即为姬姆萨贮存液。临用前在1ml姬姆萨贮存液中加入pH7.2磷酸缓冲液20ml，配成使用液。十三、Jenner(May-Grunwald）染液0.25ggenner染料经研细后加甲醇100ml。144
144 甘油 33ml 甲醇 33ml 将姬姆萨染料研细，然后边加入甘油边继续研磨，最后加入甲醇混匀，放 56℃1~24h 后，即 为姬姆萨贮存液。临用前在 1ml 姬姆萨贮存液中加入 pH7.2 磷酸缓冲液 20ml，配成使用液。 十三、Jenner(May-Grunwald)染液 0.25g genner 染料经研细后加甲醇 100ml