图3-1 酶促反应的速度曲线 该曲线的斜率表示单位时间内产物生成量的变化，因此曲线上任何 一点的斜率就是相应横坐标上时间点的反应速度。从图中的曲线可 以看出在反应开始的一段时间内斜率几乎不变，然而随着反应时间 的延长，曲线逐渐变平坦，相应的斜率也渐渐减小，反应速度逐渐 降低，显然这时测得的反应速度不能代表真实的酶活力
图3-1 酶促反应的速度曲线 该曲线的斜率表示单位时间内产物生成量的变化，因此曲线上任何 一点的斜率就是相应横坐标上时间点的反应速度。从图中的曲线可 以看出在反应开始的一段时间内斜率几乎不变，然而随着反应时间 的延长，曲线逐渐变平坦，相应的斜率也渐渐减小，反应速度逐渐 降低，显然这时测得的反应速度不能代表真实的酶活力
• 引起酶促反应速度随反应时间延长而降低的原因很 多，如底物浓度的降低、产物浓度增加从而加速了 逆反应的进行、产物对酶的抑制或激活作用以及随 着反应时间的延长引起酶本身部分分子失活等等。 因此在测定酶活力时，应测定酶促反应的初速度， 从而避免上述各种复杂因素对反应速度的影响。由 于反应初速度与酶量呈线性关系，因此可以用测定 反应初速度的方法来测定相关制剂中酶的含量
• 引起酶促反应速度随反应时间延长而降低的原因很 多，如底物浓度的降低、产物浓度增加从而加速了 逆反应的进行、产物对酶的抑制或激活作用以及随 着反应时间的延长引起酶本身部分分子失活等等。 因此在测定酶活力时，应测定酶促反应的初速度， 从而避免上述各种复杂因素对反应速度的影响。由 于反应初速度与酶量呈线性关系，因此可以用测定 反应初速度的方法来测定相关制剂中酶的含量
酶活力测定时需注意： 1 选择反应的最适温度，根据不同的底物和 缓冲液选择反应的最适pH。 2 速度要快，取反应的初速度 3 底物浓度要足够大（一般在10Km以上） – 使酶被底物饱和，以充分反应待测酶的活力
酶活力测定时需注意： 1 选择反应的最适温度，根据不同的底物和 缓冲液选择反应的最适pH。 2 速度要快，取反应的初速度 3 底物浓度要足够大（一般在10Km以上） – 使酶被底物饱和，以充分反应待测酶的活力
测定酶活力的基本原理 酶蛋白的含量很低，很难直接测定其蛋白质的含 量，且常与其他各种蛋白质混合存在，将其提 纯耗时费力。故不能直接用重量或体积等指标 来衡量。 • 测定产物增加量 • 测定底物减少量
测定酶活力的基本原理 酶蛋白的含量很低，很难直接测定其蛋白质的含 量，且常与其他各种蛋白质混合存在，将其提 纯耗时费力。故不能直接用重量或体积等指标 来衡量。 • 测定产物增加量 • 测定底物减少量
测定酶活力常用的方法： • 分光光度法（spectrophotometry） • 荧光法（fluorometry） • 同位素法（isotope method） • 电化学方法（electrochemical method） • 其他方法：如旋光法、量气法、量热法 和层析法等
测定酶活力常用的方法： • 分光光度法（spectrophotometry） • 荧光法（fluorometry） • 同位素法（isotope method） • 电化学方法（electrochemical method） • 其他方法：如旋光法、量气法、量热法 和层析法等