《结构免疫学》课程教学资源（实验室SOP）6 附录

6.附录6附录6.1试剂配方类6.1.1常用抗生素配方6.1.2常用母液配方6.1.3缓冲液(pH6-10)的pKa及缓冲范围6.1.4磷酸缓冲液配方6.2资源信息类6.2.1常用网站6.2.2通用测序引物6.2.3密码子及其偏好性表格6.2.4空间群表格6.2.5线站新衍射仪BL17U16.2.6实验室载体6.2.7实验室细胞株及菌株6.2.8结晶试剂盒6.1试剂配方类6.1.1常用抗生素配方工作浓度工作浓度母液浓度(μg/mL)(μg/mL)抗生素处理方式forfor(mg/mL)严紧型质粒松驰型质粒Ampicillin，氨芒青霉素20100（溶于水）60过滤除菌(Amp)105050（溶于水）过滤除菌/高压Kanamycin，卡那霉素(Kan)Chloramphenicol，氯霉素34(溶于乙醇)25170无需灭菌(Chl/Cm/CAP)Carbenicillin，羧芒青霉素50 (溶于水)2060过滤除菌(Cab)5010过滤除菌Streptomycin，链霉素(Sm)10(溶于水）1050Tetracyline，四环素(Tet)5(溶于甲醇)无需灭菌1保存条件：建议-20℃保存。mycin，霉素，在不严格的缩写中作为"XX霉素"的后缀缩写为m。2.氯霉素（ChlorAmPhenicol），氯氨苯醇，标准缩写CAP，有时也写做Cm。3.4过滤灭菌：用0.22um一次性滤膜过滤除菌，于超净台内。母液配制方法举例，如100mg/mL氨苄青霉素：溶解1g氨芒青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10mL。分装成小份5.于-20C贮存。常以25μg/mL~50μg/mL的终浓度添加于生长培养基6.1.2常用母液配方1.50×TAE(1L):Tris242 g57.1mLGlacialAceticAcid（冰醋酸）0.5MEDTA100mL2.10×TBE (1L):Tris108.8g55.0gBoric Acid0.5MEDTA40mL

抗生素 母液浓度 （mg/mL） 工作浓度 （μg/mL） for 严紧型质粒 工作浓度 （μg/mL） for 松驰型质粒 处理方式 Ampicillin，氨苄青霉素 (Amp) 100（溶于水） 20 60 过滤除菌 Kanamycin，卡那霉素(Kan) 50 （溶于水） 10 50 过滤除菌／高压 Chloramphenicol，氯霉素 (Chl/Cm/CAP) 34 （溶于乙醇） 25 170 无需灭菌 Carbenicillin，羧苄青霉素 (Cab) 50 （溶于水） 20 60 过滤除菌 Streptomycin，链霉素(Sm) 10 （溶于水） 10 50 过滤除菌 Tetracyyline，四环素(Tet) 5 （溶于甲醇） 10 50 无需灭菌 6. 附录 6 附录 6.1试剂配方类 6.1.1常用抗生素配方 6.1.2常用母液配方 6.1.3缓冲液(pH 6-10)的pKa及缓冲范围 6.1.4磷酸缓冲液配方 6.2资源信息类 6.2.1常用网站 6.2.2通用测序引物 6.2.3密码子及其偏好性表格 6.2.4空间群表格 6.2.5线站新衍射仪BL17U1 6.2.6实验室载体 6.2.7实验室细胞株及菌株 6.2.8结晶试剂盒 6.1 试剂配方类 6.1.1 常用抗生素配方 1. 保 存 条 件：建议 -20 °C保存。 2. mycin，霉素，在不严格的缩写中作为“XX霉素”的后缀缩写为m。 3. 氯霉素（Chlor Am Phenicol），氯氨苯醇，标准缩写CAP，有时也写做Cm。 4. 过滤灭菌：用0.22 μm一次性滤膜过滤除菌，于超净台内。 5. 母液配制方法举例，如100 mg/mL氨苄青霉素：溶解1 g氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10 mL。分装成小份 于-20 °C贮存。常以25 μg/mL～50 μg/mL的终浓度添加于生长培养基 6.1.2 常用母液配方 1. 50× TAE（1 L）： Tris 242 g Glacial Acetic Acid (冰醋酸) 57.1 mL 0.5 M EDTA 100 mL 2. 10× TBE（1 L）： Tris 108.8 g Boric Acid 55.0 g 0.5 M EDTA 40 mL

3.6xDNALoadingBuffer（100mL）:10 mL1 M Tris-HCI pH7.4100% Glycerol60 mL0.5MEDTA12 mLBromophenol Blue0.01g4.0.5MEDTApH8.0(500mL):93.05gEDTADisodium SaltDihydrateDissolve with about 700 mLddH20, stir, then adjust pH to 8.0 (1 M NaOH)Adjust the volumeto1 L.Filtered with 0.22μmmembrane or autoclave.**EDTAdoes notdissolve until nearlypH8.05.X-Gal（40mg/mL），1000x(5mL)X-Gal0.200g5mLDimethyl Foramide(use glass pipette!)Make~500 μL aliquots.Store in brown glass vials at-20C.6.SOCmedium(250mL)5gTryptone Peptone1.25 gYeast extractNaCI0.15 gKCI (10 mM)0.05g0.51 gMgCl2 (10 mM)4mL50%glucoseadd sterileand MgCl2and glucose after autoclaving7.SolutionsforPlasmidPreparationsQiagenBufferP1:50mMTris-HCIpH8.0,10mMEDTA,100μg/mLRNaseA1&：forresuspensionofcells inDNAplasmidpreparation.和生工PI通用。5 mL1MTrispH8.02 mL0.5MEDTApH8.0addddH20 to100mL,Autoclave.RnaseA(addafterautoclaving)10.0mg.Storeat4C2)QiagenBufferP2:200mMNaOH,1%SDS&：forlysisofcellsinDNAplasmidpreparation.和生工P2通用。NaOH0.8gSDS1.0 gadd ddH20 to100mL3)QiagenBufferP3:3.0MpotassiumacetatepH5.5,&:notorspincolumns,butorQiatip,midi,maxigigakitsPotassiumAcetate25.03g~11.5 mLAceticAcid,GalacialAdjustpHto5.5,addddH20to100mL4)QiagenBufferN3:4.2MGu-HCI,0.9MpotassiumacetatepH4.8&：asnutrealizationbuffertoprecipitateproteinsandgenomicmaterials，和生工小抽试剂盒P3通用。5)Qiagen Buffer PB (5 M Gu-HCI, 30% isopropanol) =PBI (I for pH indicator)6)Qiagen BufferQG(5.5Mguanidine thiocyanate (GuSCN)20mMTrisHCIpH6.6)7)QiagenBufferPE(10mMTris-HCIpH7.5，80%ethanol)&：forspincolumnsaltwashinminiprep（blue）orpinkcolumns.用于质粒小抽和核酸提取离心柱清洗除盐。8)QiagenBufferQX1:7MNaPO410mMNaAcpH5.3&：forsolutionandbindingofagarosegels，用在用琼脂糖珠子DNA纯化试剂盒。9)QiagenBufferQXB:5MGuHCI

3. 6×DNA Loading Buffer（100 mL）： 1 M Tris-HCl pH 7.4 10 mL 100% Glycerol 60 mL 0.5 M EDTA 12 mL Bromophenol Blue 0.01 g 4. 0.5 M EDTA pH 8.0（500 mL）： EDTA Disodium Salt Dihydrate 93.05 g Dissolve with about 700 mL ddH2O, stir, then adjust pH to 8.0 (1 M NaOH) Adjust the volume to 1 L. Filtered with 0.22 μm membrane or autoclave. **EDTA does not dissolve until nearly pH 8.0 5. X-Gal （40 mg/mL）, 1000×（5 mL） X-Gal 0.200 g Dimethyl Foramide 5 mL （use glass pipette!） Make ~500 μL aliquots. Store in brown glass vials at -20 °C. 6. SOC medium（250 mL） Tryptone Peptone 5 g Yeast extract 1.25 g NaCl 0.15 g KCl（10 mM） 0.05 g MgCl2（10 mM） 0.51 g 50% glucose 4 mL add sterile and MgCl2 and glucose after autoclaving 7. Solutions for Plasmid Preparations 1) Qiagen Buffer P1：50 mM Tris-HCl pH 8.0，10 mM EDTA，100 μg/mL RNaseA &：for resuspension of cells in DNA plasmid preparation. 和生工P1通用。 1 M Tris pH 8.0 5 mL 0.5 M EDTA pH 8.0 2 mL add ddH2O to 100 mL, Autoclave. Rnase A (add after autoclaving) 10.0 mg. Store at 4 °C 2) Qiagen Buffer P2：200 mM NaOH，1% SDS &：for lysis of cells in DNA plasmid preparation. 和生工P2通用。 NaOH 0.8 g SDS 1.0 g add ddH2O to 100 mL 3) Qiagen Buffer P3：3.0 M potassium acetate pH 5.5, &：not for spin columns, but for Qiatips, midi, maxi, giga kits Potassium Acetate 25.03 g Acetic Acid, Galacial ~11.5 mL Adjust pH to 5.5, add ddH2O to 100 mL 4) Qiagen Buffer N3：4.2 M Gu-HCl，0.9 M potassium acetate pH 4.8 &：as nutrealization buffer to precipitate proteins and genomic materials，和生工小抽试剂盒P3通用。 5) Qiagen Buffer PB（5 M Gu-HCl, 30% isopropanol）＝PBI（I for pH indicator） 6) Qiagen Buffer QG（5.5 M guanidine thiocyanate （GuSCN），20 mM Tris HCl pH 6.6） 7) Qiagen Buffer PE（10 mM Tris-HCl pH 7.5，80% ethanol ） &：for spin column salt wash in miniprep （blue）or pink columns. 用于质粒小抽和核酸提取离心柱清洗除盐。 8) Qiagen Buffer QX1：7 M NaPO4，10 mM NaAc pH 5.3 &：for solution and binding of agarose gels，用在用琼脂糖珠子DNA纯化试剂盒。 9) Qiagen Buffer QXB：5 M GuHCl

&:forbindingoflarge>3000bpfragmentstocolumns10)QiagenBufferQBT:750mMNaCl,50mMMOPSpH7.015%isopropanol,0.15%tritonX-100&:Equilibration bufferNacl4.38 g15 mLIsopropanolMOPS1.05 g150 mLTriton X-100Adjust pH to 7.0 (use 1N),add ddH20 to 100mL11)QiagenBufferQC:1.0MNaCl,50mMMOPSpH7.0,15%isopropanol&:Wash bufferNaCl5.84 gMOPS1.05 g15 mLIsopropanolAdjust pH to 7.0, add ddH20 to 100mL,filter sterilize.12)QiagenBufferQF:1.25MNaCl,50mMTris-HCIpH8.5,15%isopropanol&:Elution bufferNaCI7.31 gTris 8.5 1 M5 mL15 mLIsopropanolAdjust pH to8.5,addddH20 to100mL8.BuffersforProteinElectrophoresis1)6xSDSSampleBuffer25 mL1 M Tris-HCI pH 6.810%SDS20 mL50%Glycerol50mL1MDTT2 mL0.01 gBromophenol BlueAdd ddH20 to 100 mL(500mL):2)CoommassieBlueStainingSolution江0.5 gCoommassieBrilliantBlueR250Ethanol200mLAcetic acid:50mLddH20to 500mL (~250mL)(Dissolve Coommassie in Ethanol beforeadding water and acetic acid will require stirring 1~2 hours)3)CoommassieBlueDestainingSolution(500mL):Ethanol200 mL50mLAcetic AcidddH20250 mL（1L）：MES：2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物4)20xMES-SDSrunningbuffer&:Forhigh-resolution separation of small size proteins.MES195.2 gTris121.2 gSDS20gEDTA6g9Molecular Biology Buffers:1)A1:1xNEBuffer1(yellow):10mMBis TrisPropane-HCl,10mMMgCl2,1mMDTT pH7.0 @25C。Supplied as a10xconcentratedstock

&：for binding of large >3000 bp fragments to columns 10) Qiagen Buffer QBT：750 mM NaCl，50 mM MOPS pH 7.0，15% isopropanol，0.15% triton X-100 &：Equilibration buffer NaCl 4.38 g Isopropanol 15 mL MOPS 1.05 g Triton X-100 150 mL Adjust pH to 7.0（use 1N）, add ddH2O to 100 mL 11) Qiagen Buffer QC：1.0 M NaCl，50 mM MOPS pH 7.0，15% isopropanol &：Wash buffer NaCl 5.84 g MOPS 1.05 g Isopropanol 15 mL Adjust pH to 7.0, add ddH2O to 100 mL ,filter sterilize. 12) Qiagen Buffer QF：1.25 M NaCl， 50 mM Tris-HCl pH 8.5，15% isopropanol &：Elution buffer NaCl 7.31 g Tris 8.5 1 M 5 mL Isopropanol 15 mL Adjust pH to 8.5, add ddH2O to 100 mL 8. Buffers for Protein Electrophoresis 1) 6×SDS Sample Buffer 1 M Tris-HCl pH 6.8 25 mL 10% SDS 20 mL 50% Glycerol 50 mL 1 M DTT 2 mL Bromophenol Blue 0.01 g Add ddH2O to 100 mL 2) Coommassie Blue Staining Solution（500 mL）： Coommassie Brilliant Blue R250 0.5 g Ethanol 200 mL Acetic acid: 50 mL ddH2O to 500 mL（~250 mL） （Dissolve Coommassie in Ethanol before adding water and acetic acid will require stirring 1~2 hours） 3) Coommassie Blue Destaining Solution （500 mL）： Ethanol 200 mL Acetic Acid 50 mL ddH2O 250 mL 4) 20×MES-SDS running buffer （1 L）：MES：2-(N-吗啉)乙磺酸一水合物 &：For high-resolution separation of small size proteins. MES 195.2 g Tris 121.2 g SDS 20 g EDTA 6 g 9. Molecular Biology Buffers: 1) A1：1×NEBuffer 1（yellow）：10 mM Bis Tris Propane-HCl，10 mM MgCl2，1 mM DTT pH 7.0 @ 25 °C。Supplied as a 10×concentrated stock

A2:1xNEBuffer2(blue):50mMNaCl,10mMTris-HCl,10mMMgCl2,1mMDTTpH7.9@25°C。Suppliedas a2)10xconcentrated stock3)A2:1xNEBuffer3(red):100mMNaCl,50mMTris-HCl,10mMMgCl2,1mMDTTpH7.9@25°C。Suppliedasa10xconcentratedstock4)A2:1xNEBuffer4(green,cutsmartbuffer):50mMpotassiumacetate,20mMTrisacetate,10mMmagnesiumacetate,1mMDTT,pH7.9@25C。Suppliedasa10xconcentratedstock5)2xT4DNAquickligase快连接酶buffer:60mMTris-HClpH7.8，20mMMgCl2，2mMDTT，2mMATPand10%PEG60006)10xT4DNA连接酶buffer:500mMTris-HCIpH7.6,100mMMgCl2，100mMDTT,10mMATP7)10xpfubuffer:200mMTris-HCIpH8.6,100mMKCl,160mM(NH4)2SO4,10mMMgCl2,1%TritonX-100,1mg/mLBSA8)5xHFbuffer:32mMHEPES-KOHbuffer pH7.8,100mM KAcO,4mMMg(AcO)2,0.05%BSA (0.5mg/mL)9)5xGCrichbuffer:32mMHEPES-KOHbufferpH7.8,100mMKAcO,7.5mMMg(AcO)2,0.01%BSA(0.1mg/mL)1.0%DMSO10)2xTaqmix:4mL1 M Tris-HCI pH 8.61 M KCI20mL1 MMgCl2600μLSucrose68g40mLdNTP(2mMeach)2 mL1%CresolRed（甲酚红）20 mLTaq polymerase (2U/μL)AddddH20to200mL11)10xTaq buffer:200mMTris-HCI8.4,200mMKC,100mM(NH4)2SO4,30mMMgSO4,1mg/mLBSA6.1.3缓冲液（pH6-10)的pKa及缓冲范围pKa缓冲液分子量缓冲范围中文全称(25°C)MES6.1195.25.5~6.72-吗啉乙磺酸二(2-羟乙基)亚胺基三(羟甲基)甲6.5Bis-Tris5.8~7.2209.2烷N-(氨基甲酰基甲基)亚氨基二乙ADA6.6190.26.0~7.2酸6.8ACES6.1~7.5182.2N-氨基甲酰甲基乙磺酸PIPES6.86.1~7.5302.4哌嗪-N，N-二(2-乙磺酸）6.9225.3MOPSO6.2~7.63-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸Bis-Tris双[三(羟甲基)氨基丙烷]/1,3-二[三6.86.3~9.5282.3Propane(羟甲基)甲氨基)丙烷7.1BES6.4~7.8213.2N-双(2-羟乙基)2-氨基乙璜酸7.2MOPS6.5~7.9209.33-(N-吗啡啉）乙磺酸7.5HEPES6.8~8.2238.3N-2-羟乙基哌嗪-N-2-乙磺酸7.4229.2TES6.8~8.2N-3-(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸3-[N-N-双(2-羟乙基)氨基]-2-羟基7.6DIPSO7.0~8.2243.3丙磺酸N-3-(羟甲基)甲氨基-2-羟基丙烷7.6TAPSO7.0~8.2259.3磺酸Tris8.17.0~9.1121.1三羟甲基氨基甲烷7.87.1~8.5268.3HEPPSO4-(2-羟乙基)哌嗪-1-2-羟基丙磺酸7.8362.4POPSO7.2~8.5哌嗪-1,4-二羟基丙磺酸8.0252.3EPPS7.3~8.74-羟乙基哌嗪丙磺酸7.8三乙醇胺TEA7.3~8.3149.28.1Tricine7.4~8.8179.2N-三-(羟甲基)甲基氨基乙酸

2) A2：1×NEBuffer 2（blue）：50 mM NaCl, 10 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2，1 mM DTT pH 7.9 @ 25 °C。Supplied as a 10×concentrated stock. 3) A2：1×NEBuffer 3（red）：100 mM NaCl, 50 mM Tris-HCl，10 mM MgCl2，1 mM DTT pH 7.9 @ 25 °C。Supplied as a 10×concentrated stock. 4) A2：1×NEBuffer 4（green，cutsmart buffer）：50 mM potassium acetate，20 mM Tris acetate，10 mM magnesium acetate，1 mM DTT, pH 7.9 @ 25 °C。Supplied as a 10×concentrated stock. 5) 2×T4 DNA quick ligase 快连接酶buffer：60 mM Tris-HCl pH 7.8，20 mM MgCl2，2 mM DTT，2 mM ATP and 10% PEG6000 6) 10×T4 DNA连接酶buffer：500 mM Tris-HCl pH 7.6，100 mM MgCl2，100 mM DTT，10 mM ATP 7) 10×pfu buffer：200 mM Tris-HCl pH 8.6，100 mM KCl，160 mM (NH4)2SO4，10 mM MgCl2，1% Triton X-100，1 mg/mL BSA。 8) 5×HF buffer：32 mM HEPES-KOH buffer pH 7.8，100 mM KAcO, 4 mM Mg (AcO) 2，0.05% BSA（0.5 mg/mL） 9) 5×GC rich buffer：32 mM HEPES-KOH buffer pH 7.8，100 mM KAcO，7.5 mM Mg(AcO)2，0.01% BSA（0.1 mg/mL）， 1.0% DMSO 10) 2×Taq mix: 1 M Tris-HCl pH 8.6 4 mL 1 M KCl 20 mL 1 M MgCl2 600 μL Sucrose 68 g dNTP （2 mM each） 40 mL 1% Cresol Red（甲酚红） 2 mL Taq polymerase （2U/μL） 20 mL Add ddH2O to 200 mL 11) 10×Taq buffer: 200 mM Tris-HCl 8.4，200 mM KC，100 mM (NH4)2SO4，30 mM MgSO4，1 mg/mL BSA 6.1.3 缓冲液(pH 6-10)的pKa及缓冲范围 缓冲液 pKa （25°C） 缓冲范围 分子量 中文全称 MES 6.1 5.5~6.7 195.2 2-吗啉乙磺酸 Bis-Tris 6.5 5.8~7.2 209.2 二(2-羟乙基)亚胺基三(羟甲基)甲 烷 ADA 6.6 6.0~7.2 190.2 N-(氨基甲酰基甲基)亚氨基二乙 酸 ACES 6.8 6.1~7.5 182.2 N-氨基甲酰甲基乙磺酸 PIPES 6.8 6.1~7.5 302.4 哌嗪-N，N'-二(2-乙磺酸) MOPSO 6.9 6.2~7.6 225.3 3-(N-吗啉基)-2-羟基丙磺酸 Bis-Tris Propane 6.8 6.3~9.5 282.3 双[三(羟甲基)氨基丙烷]/1,3-二[三 (羟甲基)甲氨基]丙烷 BES 7.1 6.4~7.8 213.2 N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙璜酸 MOPS 7.2 6.5~7.9 209.3 3-(N-吗啡啉)乙磺酸 HEPES 7.5 6.8~8.2 238.3 N-2-羟乙基哌嗪-N'-2-乙磺酸 TES 7.4 6.8~8.2 229.2 N-3-(羟甲基)甲基-2-氨基乙磺酸 DIPSO 7.6 7.0~8.2 243.3 3-[N-N-双(2-羟乙基)氨基]-2-羟基 丙磺酸 TAPSO 7.6 7.0~8.2 259.3 N-3-(羟甲基)甲氨基-2-羟基丙烷 磺酸 Tris 8.1 7.0~9.1 121.1 三羟甲基氨基甲烷 HEPPSO 7.8 7.1~8.5 268.3 4-(2-羟乙基)哌嗪-1-2-羟基丙磺酸 POPSO 7.8 7.2~8.5 362.4 哌嗪-1,4-二羟基丙磺酸 EPPS 8.0 7.3~8.7 252.3 4-羟乙基哌嗪丙磺酸 TEA 7.8 7.3~8.3 149.2 三乙醇胺 Tricine 8.1 7.4~8.8 179.2 N-三-(羟甲基)甲基氨基乙酸

8.37.6~9.0163.2BicineN,N-双(2-羟乙基)甘氨酸8.4TAPS7.7~9.1243.3三羟甲基甲胺基丙磺酸3-[N-(1，1-二甲基-2-羟乙基)]氨9.08.3~9.7227.3AMPSO基-2-羟丙烷磺酸CHES9.38.6~10.0207.32-(环已胺)-1-乙磺酸CAPSO9.68.9~10.3237.33-(环已胺)-2-羟基-1-丙磺酸AMP9.789.19.0~10.52-氨基-2-甲基-1-丙醇CAPS10.4221.39.7~11.13-(环已胺)-1-丙磺酸6.1.4磷酸缓冲液配方材料（MATERIALS)「试剂(REAGENTS)NaH2PO4-2H2O.Na2HPO4-12H2O配制方法：配制时，常先配制0.2M的NaH2PO4和0.2M的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2M的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。1.0.2M的NaH2PO4：称取NaH2PO4.2H2O31.21g（或NaH2PO4·H2O27.6g）加重蒸水至1000mL溶解。2.0.2M的Na2HPO4:称取Na2HPO412H2O71.64g（或Na2HPO4:7H2053.6g或Na2HPO4-2H2035.61g）加重蒸水至1000mL溶解。3.0.2MpH7.4的PB的配制：取19mL0.2M的NaH2PO4和81mL0.2MNa2HPO4，充分混合即为0.2M的PB（pH约为7.4~7.5）。若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。25℃C下0.2M磷酸钠缓冲液的配制pH值0.2 M Na2HPO4(mL)0.2 M NaH2PO4(mL)5.88.092.05.910.090.012.387.76.06.115.085.06.218.581.56.322.577.56.426.573.56.531.568.56.637.562.56.743.556.549.051.06.86.955.045.07.061.039.07.167.033.07.272.028.07.377.023.07.481.019.07.584.016.07.687.013.07.789.510.57.891.58.57.993.56.508.094.75.325°℃下0.1M磷酸钾缓冲液的配制pH值1 M K2HPO4(mL)1 M KH2PO4(mL)5.88.591.513.26.086.86.219.280.86.472.227.86.638.161.96.849.750.37.061.538.57.271.728.37.480.219.87.686.613.4

Bicine 8.3 7.6~9.0 163.2 N,N-双(2-羟乙基)甘氨酸 TAPS 8.4 7.7~9.1 243.3 三羟甲基甲胺基丙磺酸 AMPSO 9.0 8.3~9.7 227.3 3-[N-(1，1-二甲基-2-羟乙基)]氨 基-2-羟丙烷磺酸 CHES 9.3 8.6~10.0 207.3 2-(环已胺)-1-乙磺酸 CAPSO 9.6 8.9~10.3 237.3 3-(环已胺)-2-羟基-1-丙磺酸 AMP 9.7 9.0~10.5 89.1 2-氨基-2-甲基-1-丙醇 CAPS 10.4 9.7~11.1 221.3 3-(环已胺)-1-丙磺酸 6.1.4 磷酸缓冲液配方 材料（MATERIALS） r 试剂（REAGENTS） NaH2PO4·2H2O、Na2HPO4·12H2O 配制方法： 配制时，常先配制0.2 M的NaH2PO4和0.2 M的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2 M的磷酸盐缓冲液（PB），根据 需要可配制不同浓度的PB和PBS。 1. 0.2 M的 NaH2PO4：称取NaH2PO4.2H2O 31.21 g（或 NaH2PO4·H2O 27.6 g）加重蒸水至1000 mL溶解。 2. 0.2 M的 Na2HPO4：称取Na2HPO4·12H2O 71.64 g（或 Na2HPO4·7H2O 53.6 g或 Na2HPO4·2H2O 35.61 g）加重蒸水至 1000 mL溶解。 3. 0.2 M pH 7.4的PB的配制：取19 mL 0.2 M的NaH2PO4和81 mL 0.2 M Na2HPO4，充分混合即为0.2 M的PB（pH约为7.4～ 7.5）。若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。 ► 25 °C下0.2 M磷酸钠缓冲液的配制 pH值 0.2 M Na2HPO4(mL) 0.2 M NaH2PO4(mL) 5.8 8.0 92.0 5.9 10.0 90.0 6.0 12.3 87.7 6.1 15.0 85.0 6.2 18.5 81.5 6.3 22.5 77.5 6.4 26.5 73.5 6.5 31.5 68.5 6.6 37.5 62.5 6.7 43.5 56.5 6.8 49.0 51.0 6.9 55.0 45.0 7.0 61.0 39.0 7.1 67.0 33.0 7.2 72.0 28.0 7.3 77.0 23.0 7.4 81.0 19.0 7.5 84.0 16.0 7.6 87.0 13.0 7.7 89.5 10.5 7.8 91.5 8.5 7.9 93.5 6.50 8.0 94.7 5.3 ► 25 °C下0.1 M磷酸钾缓冲液的配制 pH值 1 M K2HPO4(mL) 1 M KH2PO4(mL) 5.8 8.5 91.5 6.0 13.2 86.8 6.2 19.2 80.8 6.4 27.8 72.2 6.6 38.1 61.9 6.8 49.7 50.3 7.0 61.5 38.5 7.2 71.7 28.3 7.4 80.2 19.8 7.6 86.6 13.4