生化试验： 将斜面培养物移种到下列培养基中进行生化试验。 1 色氨酸肉汤：在36±1℃培养24±2h后,加Kovacs氏试剂0.2～0.3mL,上层 出现红色为靛基质阳性反应。 2 MR-VP培养基：在36±1℃培养48±2h。以无菌操作移取培养物1 mL 至13mm×100mm试管中,加5％α-萘酚乙醇溶液0.6mL,40％氢氧化钾溶 液0.2mL和少许肌酸结晶,振摇试管后静置2h,如出现伊红色,为VP试验 阳性。 将MR-VP培养物的剩余部分再培养48h滴加5 滴甲基红溶液。如培养 物变红色,为甲基红试验阳性,若变黄色则为阴性反应。 3 Koser氏枸椽酸盐肉汤：于36±1℃培养96h记录有无生长。 4 LST肉汤：于36±1℃培养48±2h,观察试管中是否产气。 5 革兰氏染色：取18h营养琼脂斜面培养物作革兰氏染色。大肠杆菌为革 兰氏阴性
生化试验： 将斜面培养物移种到下列培养基中进行生化试验。 1 色氨酸肉汤：在36±1℃培养24±2h后,加Kovacs氏试剂0.2～0.3mL,上层 出现红色为靛基质阳性反应。 2 MR-VP培养基：在36±1℃培养48±2h。以无菌操作移取培养物1 mL 至13mm×100mm试管中,加5％α-萘酚乙醇溶液0.6mL,40％氢氧化钾溶 液0.2mL和少许肌酸结晶,振摇试管后静置2h,如出现伊红色,为VP试验 阳性。 将MR-VP培养物的剩余部分再培养48h滴加5 滴甲基红溶液。如培养 物变红色,为甲基红试验阳性,若变黄色则为阴性反应。 3 Koser氏枸椽酸盐肉汤：于36±1℃培养96h记录有无生长。 4 LST肉汤：于36±1℃培养48±2h,观察试管中是否产气。 5 革兰氏染色：取18h营养琼脂斜面培养物作革兰氏染色。大肠杆菌为革 兰氏阴性
靛基质（Indole）试验： • 某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。 吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二 甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合 物。 • 试验方法：将待试纯培养物小量接种于试验培养 基管，于36±1C培养24h时后，取约2ml培养液， 加入Kovacs氏试剂2~3滴，轻摇试管，呈红色为 阳性，或先加少量乙醚或二甲苯，摇动试管以提 取和浓缩靛基质，待其浮于培养液表面后，再沿 试管壁徐缓加入Kovacs氏试剂数滴，在接触面呈 红色，即为阳性
靛基质（Indole）试验： • 某些细菌能分解蛋白胨中的色氨酸，生成吲哚。 吲哚的存在可用显色反应表现出来。吲哚与对二 甲基氨基苯醛结合，形成玫瑰吲哚，为红色化合 物。 • 试验方法：将待试纯培养物小量接种于试验培养 基管，于36±1C培养24h时后，取约2ml培养液， 加入Kovacs氏试剂2~3滴，轻摇试管，呈红色为 阳性，或先加少量乙醚或二甲苯，摇动试管以提 取和浓缩靛基质，待其浮于培养液表面后，再沿 试管壁徐缓加入Kovacs氏试剂数滴，在接触面呈 红色，即为阳性
甲基红（Methyl Red）试验 • 肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程 中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不 同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产 物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指 示剂变红。 V-P试验 • 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产 生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者 在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与 蛋白胨中的胍基生成红色化合物， 称V－P（+）反应。 • 大肠杆菌：MR + /VP -
甲基红（Methyl Red）试验 • 肠杆菌科各菌属都能发酵葡萄糖，在分解葡萄糖过程 中产生丙酮酸，进一步分解中，由于糖代谢的途径不 同，可产生乳酸，琥珀酸、醋酸和甲酸等大量酸性产 物，可使培养基PH值下降至pH4.5以下，使甲基红指 示剂变红。 V-P试验 • 某些细菌在葡萄糖蛋白胨水培养基中能分解葡萄糖产 生丙酮酸，丙酮酸缩合，脱羧成乙酰甲基甲醇，后者 在强碱环境下，被空气中氧氧化为二乙酰，二乙酰与 蛋白胨中的胍基生成红色化合物， 称V－P（+）反应。 • 大肠杆菌：MR + /VP -
枸椽酸盐试验： • 某些细菌能利用枸椽酸盐作为碳源，及磷酸铵 作为氮源，将枸椽酸盐分解为二氧化碳，培养 基反应后成碱性，由于指示剂的作用，培养基 变为兰色
枸椽酸盐试验： • 某些细菌能利用枸椽酸盐作为碳源，及磷酸铵 作为氮源，将枸椽酸盐分解为二氧化碳，培养 基反应后成碱性，由于指示剂的作用，培养基 变为兰色
• 用上述方法在样品中分离获得的纯菌落， 经抗E.coli O157:H7标准血清或EHEC O157:H7胶乳凝集测试为阳性者，报告检出 肠出血性大肠杆菌O157:H7。 • 如需要进一步检测Vero毒素基因的存在， 可通过接种Vero细胞或Hela细胞，观察细 胞病变进行判定，或可使用基因探针检测 和聚合酶链反应（PCR）检测法
• 用上述方法在样品中分离获得的纯菌落， 经抗E.coli O157:H7标准血清或EHEC O157:H7胶乳凝集测试为阳性者，报告检出 肠出血性大肠杆菌O157:H7。 • 如需要进一步检测Vero毒素基因的存在， 可通过接种Vero细胞或Hela细胞，观察细 胞病变进行判定，或可使用基因探针检测 和聚合酶链反应（PCR）检测法