肠侵袭性大肠杆菌（Enteroinvasive E. coli， EIEC) ➢EIEC的多数菌株无动力，生化反应和抗 原结构均类似痢疾杆菌。 ➢EIEC可引起豚鼠角结合膜炎，临床上可 借此协助鉴定EIEC
肠侵袭性大肠杆菌（Enteroinvasive E. coli， EIEC) ➢EIEC的多数菌株无动力，生化反应和抗 原结构均类似痢疾杆菌。 ➢EIEC可引起豚鼠角结合膜炎，临床上可 借此协助鉴定EIEC
➢ 肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic E. coli， EHEC)可引起散发性或爆发性出血性结肠炎。主 要菌型是O157：H7，还可有O26、O111、O103、 O145等。 ➢ 1996年O157：H7在日本引起万人的食物中毒，此 外，美国、加拿大、瑞典、澳大利亚、英国等国 家和地区相继报道了EHEC O157：H7的散发性感 染和爆发流行。 ➢ 我国于1999年在苏、皖、鲁、豫发生爆发流行。 肠出血性大肠杆菌
➢ 肠出血性大肠杆菌（Enterohemorrhagic E. coli， EHEC)可引起散发性或爆发性出血性结肠炎。主 要菌型是O157：H7，还可有O26、O111、O103、 O145等。 ➢ 1996年O157：H7在日本引起万人的食物中毒，此 外，美国、加拿大、瑞典、澳大利亚、英国等国 家和地区相继报道了EHEC O157：H7的散发性感 染和爆发流行。 ➢ 我国于1999年在苏、皖、鲁、豫发生爆发流行。 肠出血性大肠杆菌
肠出血性大肠杆菌O157: H7的检验方法： 1、培养基制备 • 改良EC新生霉素增菌肉汤（mEC）： EC肉汤灭菌后添 加20mg/mL过滤除菌的新生霉素，使终浓度为20μg/mL。 • 改良山梨醇麦康凯琼脂（TC-SMAC）：山梨醇麦康凯琼 脂加入过滤除菌的1%亚碲酸钾溶液，使终浓度2.5mg/L， 头孢克污，使终浓度为0.05mg/L。 • MUG-LST肉汤：LST肉汤中添加4-甲基伞形酮-β-D-葡萄 糖醛酸苷（MUG），使终浓度为0.1g/L。 2、增菌培养 • 称取25克样品放入225mL mEC中，均质。于41±1℃培养 18-24小时
肠出血性大肠杆菌O157: H7的检验方法： 1、培养基制备 • 改良EC新生霉素增菌肉汤（mEC）： EC肉汤灭菌后添 加20mg/mL过滤除菌的新生霉素，使终浓度为20μg/mL。 • 改良山梨醇麦康凯琼脂（TC-SMAC）：山梨醇麦康凯琼 脂加入过滤除菌的1%亚碲酸钾溶液，使终浓度2.5mg/L， 头孢克污，使终浓度为0.05mg/L。 • MUG-LST肉汤：LST肉汤中添加4-甲基伞形酮-β-D-葡萄 糖醛酸苷（MUG），使终浓度为0.1g/L。 2、增菌培养 • 称取25克样品放入225mL mEC中，均质。于41±1℃培养 18-24小时
3、分离 • 将mEC肉汤培养物10倍递增稀释。从10-4 ，10-5 ，10-6稀释度，各取 0.1mL涂布于TC-SMAC平板。于36±1℃培养18~24小时。 • 可疑 EHEC O157:H7菌落扁平，透明或半透明，边缘光滑，呈淡褐色中 心，直径约2mm。 4、鉴定 • 挑取TC-SMAC上的可疑菌落，接种MUG-LST，于36±1℃培养18~24小 时，出现产气，且无荧光者，分离到普通营养琼脂。 • 对纯菌落用EHEC O157:H7标准血清或胶乳凝集试剂作凝集试验，必要时 进行生化试验。 • 在检测过程中，也可以在选择性增菌后，取出5mL增菌液，经100℃水 浴15分钟灭活后，供自动酶联荧光免疫测试（VIDAS），迅速获得初步 结果，阳性反应者需作进一步证实
3、分离 • 将mEC肉汤培养物10倍递增稀释。从10-4 ，10-5 ，10-6稀释度，各取 0.1mL涂布于TC-SMAC平板。于36±1℃培养18~24小时。 • 可疑 EHEC O157:H7菌落扁平，透明或半透明，边缘光滑，呈淡褐色中 心，直径约2mm。 4、鉴定 • 挑取TC-SMAC上的可疑菌落，接种MUG-LST，于36±1℃培养18~24小 时，出现产气，且无荧光者，分离到普通营养琼脂。 • 对纯菌落用EHEC O157:H7标准血清或胶乳凝集试剂作凝集试验，必要时 进行生化试验。 • 在检测过程中，也可以在选择性增菌后，取出5mL增菌液，经100℃水 浴15分钟灭活后，供自动酶联荧光免疫测试（VIDAS），迅速获得初步 结果，阳性反应者需作进一步证实
EHEC O157:H7检验程序图解 检样25g ↓ mEC225mL →酶联荧光免疫测试VIDAS快速筛选 ↓41±1℃，18-24h 10-4 ，10-5 ，10-6稀释度涂布TC-SMAC ↓36±1℃，18-24h 挑取5-10个可疑菌落接种MUG-LST ↓36±1℃，18-24h MUG阴性培养物转种普通营养琼脂 ↓ ↓ 生化反应鉴定 血清凝集鉴定或胶乳凝集试验
EHEC O157:H7检验程序图解 检样25g ↓ mEC225mL →酶联荧光免疫测试VIDAS快速筛选 ↓41±1℃，18-24h 10-4 ，10-5 ，10-6稀释度涂布TC-SMAC ↓36±1℃，18-24h 挑取5-10个可疑菌落接种MUG-LST ↓36±1℃，18-24h MUG阴性培养物转种普通营养琼脂 ↓ ↓ 生化反应鉴定 血清凝集鉴定或胶乳凝集试验