《分子生物学实验》教学大纲2019.12课程名称：分子生物学课程代码：107032319C课程性质：必修总学时：27学分：1.5适用专业：生物科学专业先修课程：生物分析化学、生物化学、微生物学、遗传学一、课程的性质、目的与任务分子生物学实验课程的设立为系统培养学生在分子生物学领域基本技术和技能，通过学生的独立实验操作和实践，培养学生的创新思维和独立分析问题、解决问题的能力。二、教学内容与教学基本要求实验时实验名称课程内容教学要求序数类号型1.熟悉离心机掌握真核生物RNA的酵母RNA的的使用存在形式及分离和提取基粗提取及组分鉴51方式以及鉴定核糖、磷础性2.磷酸、戊糖定酸和戊糖的方法和碱基的鉴定
《分子生物学实验》教学大纲 2019.12 课程名称：分子生物学 课程代码：107032319C 课程性质：必修 总学时：27 学 分：1.5 适用专业：生物科学专业 先修课程：生物分析化学、生物化学、微生物学、遗传学 一、课程的性质、目的与任务 分子生物学实验课程的设立为系统培养学生在分子生物学领域基本技术和技能，通过学生的独 立实验操作和实践，培养学生的创新思维和独立分析问题、解决问题的能力。 二、教学内容与教学基本要求 序 号 实验名称 时 数 实 验 类 型 课程内容 教学要求 1 酵 母 RNA 的 粗提取及组分鉴 定 5 基 础性 1.熟悉离心机 的使用 2.磷酸、戊糖 和碱基的鉴定 掌握真核生物RNA的 存在形式及分离和提取 方式以及鉴定核糖、磷 酸和戊糖的方法
实验时实验名称课程内容教学要求序数类号型1.聚丙烯酰胺掌握浓缩胶和分离分离胶和浓缩胶的胶的组分及配置方式，制备掌握灌胶方法及垂直板电泳槽的安装，学习冷聚丙烯酰胺2.垂直板电泳冻离心机的设置及使凝胶电泳分离小综槽的安装及使用27用，掌握电泳仪和电泳合性麦过氧化物同工槽的连接及设置方式。3、电泳仪的连酶接和使用4、冷冻离心机的使用CTAB溶液的配掌握植物DNA的提取1.置综CTAB法提取方式，熟悉微量移液器35合性小麦基因的使用，掌握DNA的保存2．植物DNA的提取方式1．样品的制备了解PCR的反应原综PCR扩增小理，学习PCR反应体系的44PCR仪的设置及2.麦基因合性制备，掌握PCR仪的程序使用设定及使用琼脂糖凝胶的掌握琼脂糖凝胶的1.制备制备及电泳过程，掌握紫外检测仪、凝胶成像琼脂糖凝胶综2.水平电泳槽的系统的使用以及判定DNA电泳分离小麦持53合性连接和使用分子大小的方法家基因紫外检测仪的3.使用
序 号 实验名称 时 数 实 验 类 型 课程内容 教学要求 2 聚丙烯酰胺 凝胶电泳分离小 麦过氧化物同工 酶 7 综 合性 1.聚丙烯酰胺 分离胶和浓缩胶的 制备 2.垂直板电泳 槽的安装及使用 3、电泳仪的连 接和使用 4、冷冻离心机 的使用 掌握浓缩胶和分离 胶的组分及配置方式， 掌握灌胶方法及垂直板 电泳槽的安装，学习冷 冻 离 心 机 的 设 置 及 使 用，掌握电泳仪和电泳 槽的连接及设置方式。 3 CTAB法提取 小麦基因 5 综 合性 1. CTAB溶液的配 置 2. 植物DNA的提取 掌握植物DNA的提取 方式，熟悉微量移液器 的使用，掌握DNA的保存 方式 4 PCR 扩 增 小 麦基因 4 综 合性 1. 样品的制备 2. PCR仪的设置及 使用 了 解 PCR 的 反 应 原 理，学习PCR反应体系的 制备，掌握PCR仪的程序 设定及使用 5 琼脂糖凝胶 电泳分离小麦持 家基因 3 综 合性 1. 琼脂糖凝胶的 制备 2. 水平电泳槽的 连接和使用 3. 紫外检测仪的 使用 掌握琼脂糖凝胶的 制备及电泳过程，掌握 紫外检测仪、凝胶成像 系统的使用以及判定DNA 分子大小的方法
实验时实验名称课程内容教学要求序数类号型超净工作台、掌握感受态细胞的1.恒温摇床的使制备过程，熟悉无菌操综大肠杆菌感用作流程63合性受态细胞的制备2.无菌操作的规范操作三、成绩评定1.通过学生的平时成绩进行考核。平时成绩包括实验态度、实验室常识、实验技能的掌握，同时结合实验报告等方面。2.考核学生的独立实验设计和实践过程，注重学生的创新性思维及独立分析问题解决问题能力的提高。3.总成绩=实验报告成绩（100%）四、教学参考书1.梁宋平主编．生物化学与分子生物学实验教程.高等教育出版社2.张维铭主编.现代分子生物学实验手册.科学出版社3.雷东锋主编.现代生物化学与分子生物学仪器与设备：科学出版社五、说明本教学大纲针拟在生物科学专业教学中实行，在实践教学中将根据教学指导思想逐步修订完善。实际开设实验个数根据具体情况实施
序 号 实验名称 时 数 实 验 类 型 课程内容 教学要求 6 大肠杆菌感 受态细胞的制备 3 综 合性 1. 超净工作台、 恒 温 摇 床 的 使 用 2. 无菌操作的规 范操作 掌握感受态细胞的 制备过程，熟悉无菌操 作流程 三、成绩评定 1.通过学生的平时成绩进行考核。平时成绩包括实验态度、实验室常识、实验技能的掌握，同时 结合实验报告等方面。 2.考核学生的独立实验设计和实践过程，注重学生的创新性思维及独立分析问题解决问题能力的提 高。 3.总成绩= 实验报告成绩（100%） 四、教学参考书 1．梁宋平主编. 生物化学与分子生物学实验教程.高等教育出版社 2. 张维铭主编. 现代分子生物学实验手册. 科学出版社 3. 雷东锋主编. 现代生物化学与分子生物学仪器与设备. 科学出版社 五、说明 本教学大纲针拟在生物科学专业教学中实行，在实践教学中将根据教学指导思想逐步修订完善。 实际开设实验个数根据具体情况实施
实验一酵母核糖核酸的分离及组分鉴定一、实验目的：1、了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法2、学习稀碱法提取RNA的基本原理和具体方法二、实验原理：酵母核酸中RNA含量较多，而DNA含量较少，RNA溶于稀碱溶液，不溶于一般的有机溶剂如乙醇、乙醚等，可用此法沉淀核酸。在碱提取液中加酸性乙醇可使解聚的核糖核酸沉淀（RNA的PI=2.5~3.5之间），从而得到RNA的粗制品。RNA在浓酸条件下水解得到磷酸、戊糖和碱基。戊糖遇苔黑酚呈绿色；嘌呤遇AgNO3产生白色嘌呤银化合物沉淀：磷酸遇定磷试剂呈现蓝色。三、试剂与器材：试剂：10.04mol/L2、3%3、95%乙醇4、乙醚AgN03NaOH65、浓氨水7、酸性乙醇：0.3mL浓盐酸加入到30mL乙醇中10%H2S048、Fecl3-浓Hcl：2mL10%Fecl,加到400mL浓盐酸中9、苔黑酚乙醇溶液：6g苔黑酚溶于100mL95%乙醇中10、市售安琪酵母11、定磷试剂一一1、17%硫酸：17mL浓硫酸缓缓倒入83mL水中2、2.5%钼酸铵：2.5g钼酸铵溶于100mL水中3、10%抗坏血酸：10g抗坏血酸溶于100mL水中1：2：3：水=1：1：1：2（体积比），使用时现用现配。器材：离心机，水浴锅四、实验步骤：（一）、RNA的提取
实验一 酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 一、实验目的： 1、了解核酸的组分，并掌握鉴定核酸组分的方法 2、学习稀碱法提取RNA的基本原理和具体方法 二、实验原理： 酵母核酸中RNA含量较多，而DNA含量较少，RNA溶于稀碱溶液，不溶于一般的有机溶剂如乙 醇、乙醚等，可用此法沉淀核酸。在碱提取液中加酸性乙醇可使解聚的核糖核酸沉淀（RNA的 PI=2.5~3.5之间），从而得到RNA的粗制品。RNA在浓酸条件下水解得到磷酸、戊糖和碱基。戊糖遇 苔黑酚呈绿色；嘌呤遇AgNO3产生白色嘌呤银化合物沉淀；磷酸遇定磷试剂呈现蓝色。 三、试剂与器材： 试剂： 1 、 0.04mol/L NaOH 2、3% AgNO3 3、95%乙醇 4、乙醚 5、浓氨水 6 、 10%H2SO4 7、酸性乙醇：0.3mL浓盐酸加入到30mL乙醇中 8、Fecl3 -浓Hcl：2mL10% Fecl3加到400mL浓盐酸中 9、苔黑酚乙醇溶液：6g苔黑酚溶于100mL95%乙醇中 10、市售安琪酵母 11、定磷试剂——1、17%硫酸：17mL浓硫酸缓缓倒入83mL水中 2、2.5%钼酸铵：2.5g钼酸铵溶于100mL水中 3、10%抗坏血酸：10g抗坏血酸溶于100mL水中 1：2：3：水=1：1：1：2（体积比），使用时现用现配。 器材：离心机，水浴锅 四、实验步骤： （一）、RNA的提取
1、称10g干酵母粉置研钵中，加30mL0.04mol/LNaOH研磨，并全部转移至100mL三角瓶中，沸水浴30分钟（期间不断搅拌）。2、冷却后，3000转/分离心15分钟，留上清液。3、将上清液倒入10mL酸性乙醇溶液中，边倒边搅拌，用PH试纸调PH=2.5~3.5。静置几分钟，使RNA完全沉淀。4、将上述溶液置于离心管中，3000转/分离心3分钟，弃上清液。5、用95%乙醇洗涤沉淀两次，在原离心管中进行，搅拌并3000转/分离心1分钟，弃上清液。6、用乙醚洗涤沉淀两次，操作同上步。7、将沉淀倒在滤纸上干燥，即为RNA粗品。（二）、组分鉴定1、称0.2gRNA粗品置于刻度试管中，加10%H2SO410mL，沸水浴10分钟，得到RNA水解液。2、鉴定嘌呤碱：2mL水解液+2mL浓氨水+1mL3%AgNO3，静止片刻，观察现象。3、鉴定核糖：1mL水解液+2mLFecl3-浓Hcl+0.2mL苔黑酚乙醇溶液，沸水浴3分钟，观察现象。4：鉴定磷酸：1mL水解液+1mL定磷试剂，沸水浴1-2分钟，观察现象。五、结果与分析：实验二聚丙烯酰胺凝胶电泳分离小麦幼苗过氧化物酶同工酶一、实验目的掌握电泳技术的原理、方法和凝胶配制等知识，熟悉主要的操作过程。二、实验原理同工酶是指能催化同一种化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构、组成却有所不同的一组酶。植物在发育过程中，所含同工酶的种类和比例都不相同。作为基因表达的产物，测定同工酶谱是认识基因存在和表达的一种工具，在植物的种群、发育和杂交遗传的研究中有重要的意义。利用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定同工酶，方法简便、灵敏度高、重现性强、测定结果便于观察、记录和保存。本实验通过聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳技术分离小麦幼苗的过氧化物同工酶，根据酶催化的反应，通过染色方法显示
1、称10g干酵母粉置硏钵中，加30mL0.04mol/L NaOH研磨，并全部转移至100 mL三角瓶中，沸 水浴30分钟（期间不断搅拌）。 2、冷却后，3000转/分离心15分钟，留上清液。 3、将上清液倒入10 mL酸性乙醇溶液中，边倒边搅拌，用PH试纸调PH=2.5~3.5。 静置几分钟， 使RNA完全沉淀。 4、将上述溶液置于离心管中，3000转/分离心3分钟，弃上清液。 5、用95%乙醇洗涤沉淀两次，在原离心管中进行，搅拌并3000转/分离心1分钟，弃上清液。 6、用乙醚洗涤沉淀两次，操作同上步。 7、将沉淀倒在滤纸上干燥，即为 RNA粗品。 （二）、组分鉴定 1、称0.2gRNA粗品置于刻度试管中，加10%H2SO410mL，沸水浴10分钟，得到RNA水解液。 2、鉴定嘌呤碱：2mL水解液+2mL浓氨水+1mL3% AgNO3，静止片刻，观察现象。 3、鉴定核糖：1mL水解液+2mLFecl3 -浓Hcl+0.2mL苔黑酚乙醇溶液，沸水浴3分钟，观察现象。 4：鉴定磷酸：1mL水解液+1mL定磷试剂，沸水浴1-2分钟，观察现象。 五、结果与分析： 实验二 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离小麦幼苗过氧化物酶同工酶 一、实验目的 掌握电泳技术的原理、方法和凝胶配制等知识，熟悉主要的操作过程。 二、实验原理 同工酶是指能催化同一种化学反应，但其酶蛋白本身的分子结构、组成却有所不同的一组酶。植物在发育过程 中，所含同工酶的种类和比例都不相同。作为基因表达的产物，测定同工酶谱是认识基因存在和表达的一种工具， 在植物的种群、发育和杂交遗传的研究中有重要的意义。 利用聚丙烯酰胺凝胶电泳测定同工酶，方法简便、灵敏度高、重现性强、测定结果便于观察、记录和保存。本 实验通过聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳技术分离小麦幼苗的过氧化物同工酶，根据酶催化的反应，通过染色方法显示