饵料与生态实验指导书动物科学专业用集美大学水产学院2009年2月
饵料与生态实验指导书 动物科学专业用 集美大学水产学院 2009 年 2 月
目录实验操作守则实验报告要求实验一生物饵料培养2实验二鱼虾的食料分析..11实验三水产品中重金属残留的测定12实验四15水产品中农药残留的测定实验五浮游植物种间竞争18实验六盐度对海洋动物存活率的影响19
目 录 实验操作守则. 1 实验报告要求. 1 实验一 生物饵料培养. 2 实验二 鱼虾的食料分析.11 实验三 水产品中重金属残留的测定. 12 实验四 水产品中农药残留的测定. 15 实验五 浮游植物种间竞争. 18 实验六 盐度对海洋动物存活率的影响 . 19
实验操作守则1.实验前必须详细阅读实验指导书，明确实验目的、要求和内容，并写出预习报告。2.实验前要认真听取教师讲解，不要乱动仪器设备、药品。3.注意安全操作，特别小心使用电炉、烘箱、酒精灯等仪器及乙醚、丙酮等易燃药品。4.爱护仪器设备，节约水电、试剂。对精密仪器如电子天平、分光光度计等应先熟悉使用方法。5.实验室内应保持安静、清洁、整齐、严禁吸烟。6.实验结束后，应检查水电是否关闭。所用试剂、仪器物品妥当收放好，并整理干净。7.按时完成实验操作和实验报告。8.因操作不慎损坏仪器者，按学校规定处理赔偿。9.每位同学需按排位就座。实验报告要求每位同学要准备一本笔记薄。在做好每一个操作步骤的同时，随时把观察的情况及实验数据记录下来：记录数据不能随便涂改，实验后即整理记录，计算结果，写成书面报告，好的实验报告应是写得十分详尽和具科学性，文字端正而通顺。实验报告格式：一、预习报告要求：1.实验题目和日期2.实验的目地和意义：清楚抛要地叙述本次实验所要说明的问题：3.实验仪器和材料：点出本实验所用的仪器和材料：4.实验步骤：理出整个实验的操作步骤及顺序。二、实验报告要求：1.实际操作步骤或过程：详尽叙述实验的操作过程及观察到的一切情况：2.实验结果：详尽记录所得数据，并将计算结果列表或绘成曲线：3.讨论与总结：应简要总结与概括所得结论及体会。1
1 实验操作守则 1. 实验前必须详细阅读实验指导书，明确实验目的、要求和内容，并写出预习报告。 2. 实验前要认真听取教师讲解，不要乱动仪器设备、药品。 3. 注意安全操作，特别小心使用电炉、烘箱、酒精灯等仪器及乙醚、丙酮等易燃药品。 4. 爱护仪器设备，节约水电、试剂。对精密仪器如电子天平、分光光度计等应先熟悉使用 方法。 5. 实验室内应保持安静、清洁、整齐、严禁吸烟。 6. 实验结束后，应检查水电是否关闭。所用试剂、仪器物品妥当收放好，并整理干净。 7. 按时完成实验操作和实验报告。 8. 因操作不慎损坏仪器者，按学校规定处理赔偿。 9. 每位同学需按排位就座。 实验报告要求 每位同学要准备一本笔记簿。在做好每一个操作步骤的同时，随时把观察的情况及实 验数据记录下来；记录数据不能随便涂改，实验后即整理记录，计算结果，写成书面报告， 好的实验报告应是写得十分详尽和具科学性，文字端正而通顺。 实验报告格式： 一、预习报告要求： 1.实验题目和日期 2.实验的目地和意义：清楚扼要地叙述本次实验所要说明的问题； 3.实验仪器和材料：点出本实验所用的仪器和材料； 4.实验步骤：理出整个实验的操作步骤及顺序。 二、实验报告要求： 1.实际操作步骤或过程：详尽叙述实验的操作过程及观察到的一切情况； 2.实验结果：详尽记录所得数据，并将计算结果列表或绘成曲线； 3.讨论与总结：应简要总结与概括所得结论及体会
实验一生物饵料培养附：器血的消毒与灭菌（一）目的1.学习器皿的消毒与灭菌知识，并掌握其方法：2.清洗好实验用的器血，为光合细菌和微藻的培养实验做好准备。（二）器材锥形瓶、烧杯、吸管、废报纸、试管刷、肥皂、硫酸、烘箱（三）消毒与灭菌知识1.消毒消毒和灭菌的意义是有区别的，灭菌是指用物理或化学的方法杀死微生物，包括营养体和芽孢，当只杀死营养体而不杀死芽孢时叫消毒。生物饵料培养实验所用的容器、工具需要灭菌，而在一般生产的单种培养只要消毒就可以了。（1）加热消毒法：加热消毒法是利用高温杀死微生物的方法，不能耐高温的塑料、橡胶制品不能用此法消毒。①直接灼烧消毒：接种环、镊子、试管口、瓶口等可直接在酒精灯火焰上短暂灼热消毒。②煮沸消毒：把容器、工具放入锅中，加水煮沸消毒，一般在水中煮沸1020min，以大型的锥形瓶可在瓶内加进少量淡水，在瓶口放上漏斗，再在漏斗口放一称量瓶盖，加热煮沸5～10min，让蒸汽在瓶中熏热消毒。③烘箱消毒：将玻璃容器，金属工具洗涤干净后放入烘箱中，关闭烘箱门，打开通气孔，接通电源，加热，待温度上升至140℃时关闭电源开关，等烘箱温度逐渐下降到60℃以下，方可打开烘箱门，然后把消毒器皿用消毒纸逐一包装待用。（2）化学药品消毒法：在大规模培养光合细菌和微藻类的生产中，大型容器、工具及培养池一般常用化学药品消毒。①漂白粉(CaOCl2）：工业上用的漂白粉一般含有效氯25～35%，消毒时按万分之一到三（100～300ppm）的水溶液，把容器、工具在溶液中浸泡30min，再用消毒水（经过煮沸或沉淀过滤处理的水）冲洗3一4次即成。白瓷砖池、水泥池的消毒可配成高浓度浆糊状的漂白粉溶液淋洒池壁与底部，30min后用消毒水冲洗干净，24h后方可接种微藻类。②酒精（CHsOH）：常用于小、中型容器与工具的消毒，方法是用纱布蘸70%酒精在容器、工具的表面涂抹，5min后用消毒水冲洗2次即可。③高锰酸钾(KMnO4)：把洗净的容器、工具放在万分之三（300ppm）的高锰酸钾溶液浸泡5min，取出后用消毒水冲洗2一3次即成。白瓷砖池、水泥池可用高锰酸钾水溶液向池壁淋洒几遍，15min后，再用消毒水冲洗干净。高锰酸钾必须当天配制当天使用，而且浸泡时间不宜超过1h，否则留下的痕迹很难洗刷于净，④石炭酸（酚）：消毒时按35%的比例配成溶液，把洗涤清洁的容器、工具在溶液中浸泡30min，再用消毒水冲洗2一3次即可。2.灭菌对任何培养基或器材进行灭菌，必须注意做到既要杀死所带的微生物，但又不能破坏它们的基本性质。为此，必须根据不同情况采用不同的灭菌方式。（1）干热灭菌法2
2 实验一 生物饵料培养 附：器皿的消毒与灭菌 （一）目的 1. 学习器皿的消毒与灭菌知识，并掌握其方法； 2. 清洗好实验用的器皿，为光合细菌和微藻的培养实验做好准备。 （二）器材 锥形瓶、烧杯、吸管、废报纸、试管刷、肥皂、硫酸、烘箱 （三）消毒与灭菌知识 1. 消毒 消毒和灭菌的意义是有区别的，灭菌是指用物理或化学的方法杀死微生物，包括营养 体和芽孢，当只杀死营养体而不杀死芽孢时叫消毒。生物饵料培养实验所用的容器、工具 需要灭菌，而在一般生产的单种培养只要消毒就可以了。 （1）加热消毒法：加热消毒法是利用高温杀死微生物的方法，不能耐高温的塑料、 橡胶制品不能用此法消毒。 ①直接灼烧消毒：接种环、镊子、试管口、瓶口等可直接在酒精灯火焰上短暂灼热消 毒。 ②煮沸消毒：把容器、工具放入锅中，加水煮沸消毒，一般在水中煮沸 10～20min， 以大型的锥形瓶可在瓶内加进少量淡水，在瓶口放上漏斗，再在漏斗口放一称量瓶盖，加 热煮沸 5～10min，让蒸汽在瓶中熏热消毒。 ③烘箱消毒：将玻璃容器，金属工具洗涤干净后放入烘箱中，关闭烘箱门，打开通气 孔，接通电源，加热，待温度上升至 140℃时关闭电源开关，等烘箱温度逐渐下降到 60℃ 以下，方可打开烘箱门，然后把消毒器皿用消毒纸逐一包装待用。 （2）化学药品消毒法：在大规模培养光合细菌和微藻类的生产中，大型容器、工具 及培养池一般常用化学药品消毒。 ①漂白粉(CaOCl2) ：工业上用的漂白粉一般含有效氯 25～35%，消毒时按万分之一 到三（100～300ppm）的水溶液，把容器、工具在溶液中浸泡 30min，再用消毒水（经过 煮沸或沉淀过滤处理的水）冲洗 3—4 次即成。白瓷砖池、水泥池的消毒可配成高浓度浆 糊状的漂白粉溶液淋洒池壁与底部，30min 后用消毒水冲洗干净，24h 后方可接种微藻类。 ②酒精(C2H5OH) ：常用于小、中型容器与工具的消毒，方法是用纱布蘸 70%酒精在 容器、工具的表面涂抹，5min 后用消毒水冲洗 2 次即可。 ③高锰酸钾(KMnO4)：把洗净的容器、工具放在万分之三（300ppm）的高锰酸钾溶液 浸泡 5min，取出后用消毒水冲洗 2—3 次即成。白瓷砖池、水泥池可用高锰酸钾水溶液向 池壁淋洒几遍，15min 后，再用消毒水冲洗干净。高锰酸钾必须当天配制当天使用，而且 浸泡时间不宜超过 1h，否则留下的痕迹很难洗刷干净。 ④石炭酸（酚）：消毒时按 3～5%的比例配成溶液，把洗涤清洁的容器、工具在溶液 中浸泡 30min，再用消毒水冲洗 2—3 次即可。 2. 灭菌 对任何培养基或器材进行灭菌，必须注意做到既要杀死所带的微生物，但又不能破坏 它们的基本性质。为此，必须根据不同情况采用不同的灭菌方式。 （1）干热灭菌法
①灼烧：接种环、镊子、试管口等可直接在酒精灯上灼烧，酒精灯燃烧时其周围的气温也随着升高，用于无菌操作。②烘箱：把烘箱的温度调节到160℃，并保持2h后可达到灭菌的目的。但含有水份的物质，如培养基等不能用此法灭菌。（2）温热灭菌法①高压蒸汽灭菌：手提式高压灭菌锅是一个耐压的金属锅，在锅里盛3L的水后，把灭菌的物品（温或干均可）置于消毒桶，并移入锅中的底架上，盖上锅盖并旋紧螺栓，打开放汽阀，在加热至放气阀白烟冒直时，关紧放气阀，待压力表指针指定15磅/英寸，并维持15～30min就可杀死一切微生物的营养体和芽孢。然后关掉电源，让其自然冷却至无压力时，方可打开锅盖取出物品。每次使用都得重新加水至3L。②间歇灭菌：在没有高压灭菌设备或在高温灭菌易破坏营养的情况下，用蒸汽锅（或普通锅）蒸锅至温度不超过100℃，隔24h后再蒸煮，反复三次，能灭菌。③过滤除菌：对于加热会变化的培养基或溶液，可用经灭菌的细胞过滤器。减压抽滤来除去其中含有的微生物。④紫外线灭菌：波长200～300nm的紫外线具有杀菌作用，手术室、接种室和空气中微生物常用此法灭菌。③药物灭菌A.0.1%升汞液用于器皿表面杀菌或实验后的废弃物处理。B.70～75%的酒精，用于烧红冷却后的接种针、操作前或器具的表面杀菌。玻片、盖玻片的浸泡等。C.5%新洁尔灭溶液稀释至万分之一到千分之一，用于工作环境和器血表面的灭菌，D.40%甲醛溶液用于空气熏蒸灭菌，将消毒空间密闭，维持24h。E.5%石炭酸（酚），用于处理器械或作喷雾消毒。（四）步骤1.清洗：把锥形瓶、烧杯等用肥皂水刷洗三遍，倒置架（桌）上凉干；2.酸洗：锥形瓶作为培养微藻类和光合细菌之用，为把旧瓶中的残留有机物破坏，需经一道酸洗工序，即把少许浓硫酸倒入干净瓶，小心倾斜转动，使硫酸遍布流经瓶内壁，然后倒入另瓶或回收，最后经10多遍自来水冲洗去酸，倒置架上凉干。3.消毒：将锥形瓶、烧杯放入烘箱，加热至140℃，隔断电源，待冷却至60℃左右，将锥形瓶用无菌纸（或棉塞）封口，套上橡皮筋，收藏待用。（五）作业1.以每2人为一组，洗涤1大瓶2小瓶。并收藏好消毒和灭菌后的器皿。2.写一份详细的实验报告。注意：洗涤要认真，洗后要检查。一、光合细菌（PhotoSyntheticBacteria）的形态观察与培养（一）目的1.观察光合细菌的形态特征：2.学习光合细菌的室内培养方法。（二）器材电子天平、称量瓶、药匙、显微镜、载玻片、吸管、1000ml和50ml三角烧瓶、蒸馏水（或海水）、光合细菌的培养材料、配方中的药品3
3 ①灼烧：接种环、镊子、试管口等可直接在酒精灯上灼烧，酒精灯燃烧时其周围的气 温也随着升高，用于无菌操作。 ②烘箱：把烘箱的温度调节到 160℃，并保持 2h 后可达到灭菌的目的。但含有水份的 物质，如培养基等不能用此法灭菌。 （2）温热灭菌法 ①高压蒸汽灭菌：手提式高压灭菌锅是一个耐压的金属锅，在锅里盛 3L 的水后，把 灭菌的物品（温或干均可）置于消毒桶，并移入锅中的底架上，盖上锅盖并旋紧螺栓，打 开放汽阀，在加热至放气阀白烟冒直时，关紧放气阀，待压力表指针指定 15 磅/英寸，并 维持 15～30min 就可杀死一切微生物的营养体和芽孢。然后关掉电源，让其自然冷却至无 压力时，方可打开锅盖取出物品。每次使用都得重新加水至 3L。 ②间歇灭菌：在没有高压灭菌设备或在高温灭菌易破坏营养的情况下，用蒸汽锅（或 普通锅）蒸锅至温度不超过 100℃，隔 24h 后再蒸煮，反复三次，能灭菌。 ③过滤除菌：对于加热会变化的培养基或溶液，可用经灭菌的细胞过滤器。减压抽滤 来除去其中含有的微生物。 ④紫外线灭菌：波长 200～300nm 的紫外线具有杀菌作用，手术室、接种室和空气中 微生物常用此法灭菌。 ⑤药物灭菌 A. 0.1%升汞液用于器皿表面杀菌或实验后的废弃物处理。 B. 70～75%的酒精，用于烧红冷却后的接种针、操作前或器具的表面杀菌。玻片、盖 玻片的浸泡等。 C. 5%新洁尔灭溶液稀释至万分之一到千分之一，用于工作环境和器皿表面的灭菌。 D. 40%甲醛溶液用于空气熏蒸灭菌，将消毒空间密闭，维持 24h。 E. 5%石炭酸（酚），用于处理器械或作喷雾消毒。 （四）步骤 1. 清洗：把锥形瓶、烧杯等用肥皂水刷洗三遍，倒置架（桌）上凉干； 2. 酸洗：锥形瓶作为培养微藻类和光合细菌之用，为把旧瓶中的残留有机物破坏，需 经一道酸洗工序，即把少许浓硫酸倒入干净瓶，小心倾斜转动，使硫酸遍布流经瓶内壁， 然后倒入另瓶或回收，最后经 10 多遍自来水冲洗去酸，倒置架上凉干。 3. 消毒：将锥形瓶、烧杯放入烘箱，加热至 140℃，隔断电源，待冷却至 60℃左右， 将锥形瓶用无菌纸（或棉塞）封口，套上橡皮筋，收藏待用。 （五）作业 1. 以每 2 人为一组，洗涤 1 大瓶 2 小瓶。并收藏好消毒和灭菌后的器皿。 2. 写一份详细的实验报告。 注意： 洗涤要认真，洗后要检查。 一、光合细菌（Photo Synthetic Bacteria）的形态观察与培养 （一）目的 1. 观察光合细菌的形态特征； 2. 学习光合细菌的室内培养方法。 （二）器材 电子天平、称量瓶、药匙、显微镜、载玻片、吸管、1000ml 和 50ml 三角烧 瓶、蒸馏水（或海水）、光合细菌的培养材料、配方中的药品