水产动物疾病学实验指导书集美大学水产学院2005.9.1
水产动物疾病学实验指导书 集美大学水产学院 2005.9.1
目录实验须知实验一培养基的制备实验二水产动物微生物病原的分离与纯化实验三人工感染试验6实验四细菌的计数L实验五微生物性病原体形态观察11实验六水产动物常见病及病原体观察.13实验七水产动物疾病的常规诊断.16实验八微生物的药物敏感性测定.30.35实验九水产动物的药物毒性试验36实验十水产动物疾病的病理组织观察
目录 实验须知.1 实验一 培养基的制备 .2 实验二 水产动物微生物病原的分离与纯化.5 实验三 人工感染试验 .6 实验四 细菌的计数 .9 实验五 微生物性病原体形态观察 .11 实验六 水产动物常见病及病原体观察.13 实验七 水产动物疾病的常规诊断 .16 实验八 微生物的药物敏感性测定 .30 实验九 水产动物的药物毒性试验 .35 实验十 水产动物疾病的病理组织观察.36
实验须知1.每次实验前必须对实验内容进行充分预习，以了解实验的目的、原理和方法，做到心中有数，思路清楚。2.认真及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实验，则需记下每次观察的现象和结果，以便分析。3.实验室内应保持整洁，勿高声谈话和随便走动，保持室内安静。4.实验时小心仔细，全部操作应严格按操作规程进行，若遇有盛菌试管或瓶不慎打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时、应立即报告指导教师，及时处理，切勿隐满。5.实验过程中，切勿使酒精、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。如遇火险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火。必要时用灭火机。6.使用显微镜或其他贵重仪器时，要求细心操作，特别爱护。对消耗材料和药品等要力求节约，用毕后仍放回原处。7.每次实验完毕后、必须把所用仪器抹净放要，将实验室收拾整齐，擦净桌面，如有菌液污染桌面或其他地方时，应用3%来苏尔液或5%石炭酸液覆盖其上半小时后擦去，如系芽抱杆菌，应适当延长消毒时间。凡带菌之工具(如吸管、玻璃棒等)在洗涤前须浸泡在3%来苏尔液中进行消毒。8．每次实验需进行培养的材料，应标明自已的组别及处理方法，放于教师指定的地点进行培养。实验室中的菌种和物品等，未经教师许可，不得携出室外。9每次实验的结果，应以实事求是的科学态度填入报告表格中，力求简明准确，并连同思考题及时汇交教师批阅。10离实验室前应将手洗净，注意关闭门窗、灯、火、煤气等。-
1 实验须知 1．每次实验前必须对实验内容进行充分预习，以了解实验的目的、原理 和方法，做到心中有数，思路清楚。 2．认真及时做好实验记录，对于当时不能得到结果而需要连续观察的实 验，则需记下每次观察的现象和结果，以便分析。 3．实验室内应保持整洁，勿高声谈话和随便走动，保持室内安静。 4．实验时小心仔细，全部操作应严格按操作规程进行，若遇有盛菌试管 或瓶不慎打破、皮肤破伤或菌液吸入口中等意外情况发生时、应立即报告指导 教师，及时处理，切勿隐瞒。 5．实验过程中，切勿使酒精、乙醚、丙酮等易燃药品接近火焰。如遇火 险，应先关掉火源，再用湿布或沙土掩盖灭火。必要时用灭火机。 6．使用显微镜或其他贵重仪器时，要求细心操作，特别爱护。对消耗材 料和药品等要力求节约，用毕后仍放回原处。 7．每次实验完毕后、必须把所用仪器抹净放妥，将实验室收拾整齐，擦 净桌面，如有菌液污染桌面或其他地方时，应用 3％来苏尔液或 5％石炭酸液 覆盖其上半小时后擦去，如系芽孢杆菌，应适当延长消毒时间。凡带菌之工具 (如吸管、玻璃棒等)在洗涤前须浸泡在 3％来苏尔液中进行消毒。 8．每次实验需进行培养的材料，应标明自己的组别及处理方法，放于教 师指定的地点进行培养。实验室中的菌种和物品等，未经教师许可，不得携出 室外。 9．每次实验的结果，应以实事求是的科学态度填入报告表格中，力求简 明准确，并连同思考题及时汇交教师批阅。 10．离实验室前应将手洗净，注意关闭门窗、灯、火、煤气等
实验一培养基的制备I微生物学实验室常用的器血微生物学实验所用的器皿，大多要进行消毒、灭菌和用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包装方法均有一定的要求。玻璃器血一般要求硬质玻璃，才能承受高温和短暂烧灼而不致破裂：玻璃器血的游离碱含量要少，否则会影响培养基的酸碱度：玻璃器皿的形状和包装方法要求能防止污染杂菌为准；洗涤玻璃器皿的方法不当也会影响实验的结果。一、器血的种类、要求与应用（详细内容见《微生物学实验》）1.试管(testtube)2.德汉氏小管（Durhamtube)3.小塑科离心管，又称Eppendor管。4.吸管(pipette)(1）玻璃吸管（glasspipette)和吸气器(aspirator）①玻璃吸管②吸气器(2)微量吸管（micropipette5.培养皿（Petridish)6.三角烧瓶(Erlenmeyerflask)与烧杯(beaker）7.注射器(injector)8.载玻片(slide)与盖玻片(coverslip）9.双层瓶(doublebottle)10.滴瓶(dropperbottle)11.接种工具接种工具有接种环(inoculatingloop)、接种针(inoculatingneedle)、接种钩(inoculatinghook）、接种铲(inoculatingshovel)、玻璃涂布器（glassspreader）等。2
2 实验一 培养基的制备 Ⅰ 微生物学实验室常用的器皿 微生物学实验所用的器皿，大多要进行消毒、灭菌和用来培养微生物，因 此对其质量、洗涤和包装方法均有一定的要求。玻璃器皿一般要求硬质玻璃， 才能承受高温和短暂烧灼而不致破裂；玻璃器皿的游离碱含量要少，否则会影 响培养基的酸碱度；玻璃器皿的形状和包装方法要求能防止污染杂菌为准；洗 涤玻璃器皿的方法不当也会影响实验的结果。 一、器皿的种类、要求与应用 （详细内容见《微生物学实验》） 1．试管( test tube) 2．德汉氏小管(Durham tube) 3．小塑科离心管，又称 Eppendor 管。 4．吸管(pipette) (1) 玻璃吸管(glass pipette)和吸气器(aspirator) ① 玻璃吸管 ②吸气器 (2)微量吸管(micropipette) 5．培养皿(Petri dish) 6．三角烧瓶(Erlenmeyer flask)与烧杯(beaker) 7．注射器(injector) 8．载玻片(slide)与盖玻片(coverslip) 9．双层瓶(double bottle) 10．滴瓶(dropper bottle) 11．接种工具 接种工具有接种环(inoculating loop)、接种针(inoculating needle)、接种钩 (inoculating hook)、接种铲(inoculating shovel)、玻璃涂布器(glass spreader)等
二、玻璃器血的清洗方法（详细内容见《微生物学实验》）一般包括如下内容：1.新玻璃器血的洗涤方法2.使用过的玻璃器皿的洗涤方法包括（1）试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯等洗涤。(2）玻璃吸管的洗涤(3）载玻片与盖玻片的洗涤三、培养血的包装1.培养血的包装2.吸管的包装3.试管和三角烧瓶等的包装I:培养基的制备（（详细内容见《微生物学实验》）牛肉膏蛋白陈培养基的制备一、目的要求明确培养基的配制原理。1.2.通过对牛肉膏蛋白陈培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步骤。二、基本原理牛肉膏蛋白陈培养基的配方如下：牛肉膏3.0g蛋白陈10.0 gNaCl琼脂5g15~20g水1000mlpH7.4~7.6三、器材1溶液或试剂牛肉膏，蛋白陈，KaCl，琼脂，1mol/LNaOH，1mol/L HCl。3
3 二、玻璃器皿的清洗方法 （详细内容见《微生物学实验》） 一般包括如下内容： 1．新玻璃器皿的洗涤方法 2．使用过的玻璃器皿的洗涤方法包括 (1) 试管、培养皿、三角烧瓶、烧杯等洗涤。 (2) 玻璃吸管的洗涤 (3) 载玻片与盖玻片的洗涤 三、培养皿的包装 1．培养皿的包装 2．吸管的包装 3．试管和三角烧瓶等的包装 Ⅱ 培养基的制备 （详细内容见《微生物学实验》） 牛肉膏蛋白胨培养基的制备 一、目的要求 1. 明确培养基的配制原理。 2. 通过对牛肉膏蛋白胨培养基的配制，掌握配制培养基的一般方法和步 骤。 二、基本原理 牛肉膏蛋白陈培养基的配方如下： 牛肉膏 3.0g 蛋白陈 10.0 g NaCl 5g 琼脂 15~20g 水 1000m1 pH 7.4~7.6 三、器材 1. 溶液或试剂 牛肉膏，蛋白胨， KaCl，琼脂，1 mol/L NaOH， 1mol/L HCl