基础生物学技术实验指导书集美大学水产学院2008年4月
基础生物学技术 实验指导书 集美大学水产学院 2008 年 4 月
目录绪论一实验室规则二实验室安全及防护知识三实验记录与实验报告第一章生物化学试验技术实验一蛋白质的显色反应实验二蛋白质的水解和氨基酸的纸层析法分离11实验三蛋白质的粗提及含量测定（考马斯亮蓝G-250法）.14实验四... 17还原糖和总糖含量的测定（3，5-二硝基水杨酸比色法）实验五过氧化氢酶活性的测定一-碘量法..20实验六维生素C的定量测定.27实验七葡聚糖凝胶柱层析法基本训练.29.31第二章组织学与胚胎学实验技术.31实验一动物组织切片技术实验二动物组织的鉴别和胚胎发育的比较44第三章生理学实验技术。57实验一坐骨神经-腓肠肌标本的制备57实验二水产动物血液常规检测61实验三血液免疫学实验70实验四水产动物消化酶的测定.73实验五水产动物耗氧率的测定76
目 录 绪 论. 1 一 实验室规则. 1 二 实验室安全及防护知识. 2 三 实验记录与实验报告. 4 第一章 生物化学试验技术. 7 实验一 蛋白质的显色反应. 7 实验二 蛋白质的水解和氨基酸的纸层析法分离. 11 实验三 蛋白质的粗提及含量测定（考马斯亮蓝 G-250 法）. 14 实验四 还原糖和总糖含量的测定（3，5-二硝基水杨酸比色法）. 17 实验五 过氧化氢酶活性的测定——碘量法. 20 实验六 维生素 C 的定量测定 . 27 实验七 葡聚糖凝胶柱层析法基本训练. 29 第二章 组织学与胚胎学实验技术. 31 实验一 动物组织切片技术. 31 实验二 动物组织的鉴别和胚胎发育的比较. 44 第三章 生理学实验技术. 57 实验一 坐骨神经-腓肠肌标本的制备. 57 实验二 水产动物血液常规检测. 61 实验三 血液免疫学实验. 70 实验四 水产动物消化酶的测定. 73 实验五 水产动物耗氧率的测定. 76
80实验六水产动物应激状态生理学指标的测定实验七植物呼吸作用和光合作用强度的测定.89第四章遗传育种学实验技术..95..95实验一鱼类肾细胞的染色体制作技术...98实验二染色体核型分析方法.102实验三鱼类肝脏酯酶同工酶的电泳分析..105实验四鱼类DNA的简易提取法实验五DNA浓度测定与纯度鉴定107109实验六聚合酶链式反应（PolymeraseChainReaction，PCR）实验七DNA的琼脂糖凝胶电泳113
实验六 水产动物应激状态生理学指标的测定. 80 实验七 植物呼吸作用和光合作用强度的测定. 89 第四章 遗传育种学实验技术. 95 实验一 鱼类肾细胞的染色体制作技术. 95 实验二 染色体核型分析方法. 98 实验三 鱼类肝脏酯酶同工酶的电泳分析. 102 实验四 鱼类 DNA 的简易提取法 . 105 实验五 DNA 浓度测定与纯度鉴定 . 107 实验六 聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR） . 109 实验七 DNA 的琼脂糖凝胶电泳 . 113
绪论一实验室规则1.实验前必须认真预习实验内容，明确本次实验的目的和要求，掌握实验原理，写好实验预习报告，否则不能进行实验。2.实验时自觉遵守实验室纪律，保持室内安静，不大声说笑和喧哗。3.实验过程中要听从教师指导，认真按照实验步骤和操作规程进行实验。若想改进和设计新的实验方法，必须取得教师的同意。实验时认真进行实验记录，实验完毕及时整理数据，按时上交实验报告。4：实验台面、称量台、药品架、水池以及各种实验仪器内外都必须保持清洁整齐，药品称完后立即盖好瓶盖放回药品架，严禁瓶盖及药勺混杂，切勿使药品（尤其是NaOH）酒落在天平和实验台面上，毛刷用后必须立即挂好，各种器皿不得丢弃在水池内。5.配制试剂和用无离子水要注意节省，按实验实际使用量配制，多余的重要试剂和各种有机试剂要按教师要求进行回收，不得丢弃。6配制的试剂和实验过程中的样品，尤其是保存在冰箱和冷室中的样品，必须贴上标签、写上品名、浓度、姓名和日期等，放在冰箱中的易挥发溶液和酸性溶液，必须严密封口。7.配制和使用洗液必须极为小心，强酸强碱必须倒入废液缸或冲稀后排放。8：使用贵重精密仪器应严格遵守操作规程。使用分光光度计时不得将溶液洒在仪器内外和地面上。仪器发生故障应立即报告教师，未经许可不得自己随意检修。9.实验室内严禁吸烟、饮水和进食，严禁用嘴吸移液管和虹吸管。易燃液体不得接近明火和电炉，凡产生烟雾、有害气体和不良气味的实验，均应在通风条件下进行。10.实验完毕必须及时洗净并放好各种玻璃仪器，保持实验台面和实验柜内的整洁。11.严禁抄拿他组仪器，不得将器皿遗弃在分光光度计内和其他实验台面上，打破了玻璃仪器要及时向教师报告，并自觉登记，按规定进行处理。12.每位学生要熟悉实验室内电闸的位置，烘箱和电炉用毕必须立即断电，不得1
1 绪 论 一 实验室规则 1．实验前必须认真预习实验内容，明确本次实验的目的和要求，掌握实验原理， 写好实验预习报告，否则不能进行实验。 2．实验时自觉遵守实验室纪律，保持室内安静，不大声说笑和喧哗。 3．实验过程中要听从教师指导，认真按照实验步骤和操作规程进行实验。若想 改进和设计新的实验方法，必须取得教师的同意。实验时认真进行实验记录，实验完 毕及时整理数据，按时上交实验报告。 4．实验台面、称量台、药品架、水池以及各种实验仪器内外都必须保持清洁整 齐，药品称完后立即盖好瓶盖放回药品架，严禁瓶盖及药勺混杂，切勿使药品（尤其 是 NaOH）洒落在天平和实验台面上，毛刷用后必须立即挂好，各种器皿不得丢弃在 水池内。 5．配制试剂和用无离子水要注意节省，按实验实际使用量配制，多余的重要试 剂和各种有机试剂要按教师要求进行回收，不得丢弃。 6．配制的试剂和实验过程中的样品，尤其是保存在冰箱和冷室中的样品，必须 贴上标签、写上品名、浓度、姓名和日期等，放在冰箱中的易挥发溶液和酸性溶液， 必须严密封口。 7．配制和使用洗液必须极为小心，强酸强碱必须倒入废液缸或冲稀后排放。 8．使用贵重精密仪器应严格遵守操作规程。使用分光光度计时不得将溶液洒在 仪器内外和地面上。仪器发生故障应立即报告教师，未经许可不得自己随意检修。 9．实验室内严禁吸烟、饮水和进食，严禁用嘴吸移液管和虹吸管。易燃液体不 得接近明火和电炉，凡产生烟雾、有害气体和不良气味的实验，均应在通风条件下进 行。 10．实验完毕必须及时洗净并放好各种玻璃仪器，保持实验台面和实验柜内的整 洁。 11．严禁抄拿他组仪器，不得将器皿遗弃在分光光度计内和其他实验台面上，打 破了玻璃仪器要及时向教师报告，并自觉登记，按规定进行处理。 12．每位学生要熟悉实验室内电闸的位置，烘箱和电炉用毕必须立即断电，不得
过夜使用，要严格遵守实验室安全用电规则和其他安全规则。13.每日实验完毕，值日生要认真做好实验室的卫生值日工作。最后离开实验室的实验人员，必须检查并关好水、电、门、窗。二实验室安全及防护知识实验室中可以说是“五毒”俱全，即着火、爆炸、中毒、触电和割伤的危险均时刻存在。因此每一位在生化实验室工作的人员都必须有充分的安全意识，严格的防范措施和丰富实用的防护救治知识，一旦发生意外能正确地进行处置，以防事故进一步扩大。1.着火实验室经常使用大量的有机溶剂，如甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等，而实验室又经常使用电炉等火源，因此极易发生着火事故。乙醚、二硫化碳、内酮和苯不得存于可能会产生电火花的普通冰箱内。他们的蒸汽只需接触红热物体的表面便会着火，其中二硫化碳尤其危险。（1）预防火灾必须严格遵守以下操作规程①严禁在开口容器和密闭体系中用明火加热有机溶剂，只能使用加热套或水浴加热。②废有机溶剂不得倒入废物桶，只能倒入回收瓶，以后再集中处理。量少时用水稀释后排入下水道。不得在烘箱内存放、干燥、烘焙有机物。④在有明火的实验台面上不允许放置开口的有机溶剂或倾倒有机溶剂。（2）灭火方法实验室中一旦发生火灾切不可惊慌失措，要保持镇静，根据具体情况正确地进行灭火或立即报火警（火警电话119）。①容器中的易燃物着火时，用灭火毯盖灭。因已确证石棉有致癌性，故改用玻璃纤维布作灭火毯。②乙醇、内酮等可溶于水的有机溶剂着火时可以用水灭火。汽油、乙醚、甲苯等有机溶剂着火时不能用水，只能用灭火毯和砂土盖灭。③导线、电器和仪器着火时不能用水和二氧化碳灭火器灭火，应先切断电源，然后用1211灭火器（内装二氟一氯一溴甲烷）灭火。④个人衣服着火时，切勿慌张奔跑，以免风助火势，应迅速脱衣，用水龙头浇2
2 过夜使用，要严格遵守实验室安全用电规则和其他安全规则。 13．每日实验完毕，值日生要认真做好实验室的卫生值日工作。最后离开实验室 的实验人员，必须检查并关好水、电、门、窗。 二 实验室安全及防护知识 实验室中可以说是“五毒”俱全，即着火、爆炸、中毒、触电和割伤的危险均时刻 存在。因此每一位在生化实验室工作的人员都必须有充分的安全意识，严格的防范措 施和丰富实用的防护救治知识，一旦发生意外能正确地进行处置，以防事故进一步扩 大。 1．着火 实验室经常使用大量的有机溶剂，如甲醇、乙醇、丙酮、氯仿等，而实验室又经 常使用电炉等火源，因此极易发生着火事故。 乙醚、二硫化碳、丙酮和苯不得存于可能会产生电火花的普通冰箱内。他们的蒸 汽只需接触红热物体的表面便会着火，其中二硫化碳尤其危险。 （1）预防火灾必须严格遵守以下操作规程 ① 严禁在开口容器和密闭体系中用明火加热有机溶剂，只能使用加热套或水浴 加热。 ② 废有机溶剂不得倒入废物桶，只能倒入回收瓶，以后再集中处理。量少时用 水稀释后排入下水道。 ③ 不得在烘箱内存放、干燥、烘焙有机物。 ④ 在有明火的实验台面上不允许放置开口的有机溶剂或倾倒有机溶剂。 （2）灭火方法 实验室中一旦发生火灾切不可惊慌失措，要保持镇静，根据具体情况正确地进行 灭火或立即报火警（火警电话 119）。 ① 容器中的易燃物着火时，用灭火毯盖灭。因己确证石棉有致癌性，故改用玻 璃纤维布作灭火毯。 ② 乙醇、丙酮等可溶于水的有机溶剂着火时可以用水灭火。汽油、乙醚、甲苯 等有机溶剂着火时不能用水，只能用灭火毯和砂土盖灭。 ③ 导线、电器和仪器着火时不能用水和二氧化碳灭火器灭火，应先切断电源， 然后用 1211 灭火器（内装二氟一氯一溴甲烷）灭火。 ④ 个人衣服着火时，切勿慌张奔跑，以免风助火势，应迅速脱衣，用水龙头浇