组织胚胎学实验教案姜永华
组织胚胎学实验教案 姜 永 华
第二章 组织学与胚胎学实验技术实验一动物组织切片技术第一部分水产动物器官、组织的取材与固定一、实验目的：通过该实验，识别水产动物各器官、组织并对其进行取样、固定同时掌握水产动物解剖、取材和固定的基本方法。二、实验原理：借助固定液的作用保存活体组织和细胞的原有形态结构，使之不致变形和变质。三、实验材料：1、健康的水产动物。2、药品和器械：磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、碳酸氢钠、甲醛、戊乙醛、煎糖、天平、刻度尺、剪刀、镊子、刀片、解剖盘、培养皿、纱布、塑料切板、广口瓶、烧杯等。四、实验准备：1、清洗玻璃器皿2、配制0.1M的磷酸钠缓冲液3、配制5%中性甲醛固定液4、配制水产动物的生理盐水5、配制5%煎糖缓冲液五、实验步骤（以鱼类为例）：1、灭活2、用天平和直尺对鱼体进行称重和体长等的测量3、鱼体的解剖与组织切取4、将固定的材料放入冰箱（4℃）固定10小时5、用5%的蔗糖缓冲液置换，密闭后放入冰箱冷藏（4℃）保存。六、注意事项：1、从鱼体取下组织后，应立即投入固定液中。2、切取组织材料时必须小心仔细，刀要锐利。切取较大的组织块时只能一个方向，同时，预先要考虑好材料的方向性，如管状器官一般横切或纵切。3、切取的组织块必须小而薄，一般厚度不要超过3毫米。七、实验要求与思考：熟悉该实验的步骤及药品的配制；了解实验动物主要的组织和器官：如何做到准确取样并达到固定的要求？
第二章 组织学与胚胎学实验技术 实验一 动物组织切片技术 第一部分 水产动物器官、组织的取材与固定 一、实验目的：通过该实验，识别水产动物各器官、组织并对其进行取样、固定， 同时掌握水产动物解剖、取材和固定的基本方法。 二、实验原理：借助固定液的作用保存活体组织和细胞的原有形态结构，使之不致 变形和变质。 三、实验材料： 1、 健康的水产动物。 2、药品和器械：磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、氯化钠、氯化钾、氯化钙、氯化镁、碳酸 氢钠、甲醛、戊乙醛、蔗糖、天平、刻度尺、剪刀、镊子、刀片、解剖盘、培养皿、纱布、 塑料切板、广口瓶、烧杯等。 四、实验准备： 1、清洗玻璃器皿 2、配制 0.1M 的磷酸钠缓冲液 3、配制 5%中性甲醛固定液 4、配制水产动物的生理盐水 5、配制 5%蔗糖缓冲液 五、实验步骤（以鱼类为例）： 1、灭活 2、用天平和直尺对鱼体进行称重和体长等的测量 3、鱼体的解剖与组织切取 4、将固定的材料放入冰箱（4℃）固定 10 小时 5、用 5%的蔗糖缓冲液置换，密闭后放入冰箱冷藏（4℃）保存。 六、注意事项： 1、从鱼体取下组织后，应立即投入固定液中。 2、切取组织材料时必须小心仔细，刀要锐利。切取较大的组织块时只能一个方向，同 时，预先要考虑好材料的方向性，如管状器官一般横切或纵切。 3、切取的组织块必须小而薄，一般厚度不要超过 3 毫米。 七、实验要求与思考：熟悉该实验的步骤及药品的配制；了解实验动物主要的组织 和器官；如何做到准确取样并达到固定的要求？
第二部分组织材料的石蜡包埋法一、实验目的：掌握水产动物组织材料的常规石蜡包埋法。二、实验原理：组织材料的逐级脱水、透明、透蜡和固体石蜡包埋。三、实验材料：1、已固定的组织材料。2、药品和器械：酒精、二甲苯、石蜡、熔蜡杯、漏斗、牛皮纸、培养皿、染色缸或玻璃瓶、量筒、酒精灯、恒温箱、水槽、温台、木台、刀片、镊子等。四、实验准备：1、配制0.1M的磷酸钠缓冲液。2、配制浓度为50%、70%、80%、90%的酒精溶液。3、熔蜡4、清洗染色缸5、用牛皮纸折成小纸盒作为包理容器6、将洗净的培养皿放入恒温箱中加热备用五、实验步骤：1、冲洗2、脱水3、透明4、透蜡5、包埋六、注意事项：1、脱水时染色缸或玻璃瓶必须盖上盖子2、材料的脱水必须彻底、完全3、组织材料不能长时间浸泡在透明剂二甲苯中4、恒温箱门应该随开随关，以免影响温度的恒定。5、透蜡的温度不能过高，透蜡的时间要足够长。6、在包埋和修块时一定要使材料居于蜡块中央，修块时蜡块的上下两边要平行。七、实验要求和思考：熟悉该实验的步骤并掌握石蜡包埋法的要领；认真做好组织材料石蜡包埋的全程工作：包埋过程中要识别各种器官组织并充分考虑其切片时的切面：在包埋过程中有哪些关键环节?
第二部分 组织材料的石蜡包埋法 一、实验目的：掌握水产动物组织材料的常规石蜡包埋法。 二、实验原理：组织材料的逐级脱水、透明、透蜡和固体石蜡包埋。 三、实验材料： 1、已固定的组织材料。 2、药品和器械：酒精、二甲苯、石蜡、熔蜡杯、漏斗、牛皮纸、培养皿、染色缸或玻 璃瓶、量筒、酒精灯、恒温箱、水槽、温台、木台、刀片、镊子等。 四、实验准备： 1、配制 0.1M 的磷酸钠缓冲液。 2、配制浓度为 50%、70%、80%、90%的酒精溶液。 3、熔蜡 4、清洗染色缸 5、用牛皮纸折成小纸盒作为包埋容器 6、将洗净的培养皿放入恒温箱中加热备用 五、实验步骤： 1、冲洗 2、脱水 3、透明 4、透蜡 5、包埋 六、注意事项： 1、脱水时染色缸或玻璃瓶必须盖上盖子 2、材料的脱水必须彻底、完全 3、组织材料不能长时间浸泡在透明剂二甲苯中 4、恒温箱门应该随开随关，以免影响温度的恒定。 5、透蜡的温度不能过高，透蜡的时间要足够长。 6、在包埋和修块时一定要使材料居于蜡块中央，修块时蜡块的上下两边要平行。 七、实验要求和思考： 熟悉该实验的步骤并掌握石蜡包埋法的要领；认真做好组织材料石蜡包埋的全程工作； 包埋过程中要识别各种器官组织并充分考虑其切片时的切面；在包埋过程中有哪些关键环 节？
第三部分水产动物组织的石蜡切片法一、实验目的：掌握水产动物组织材料的石蜡切片技术。二、实验原理：石蜡在室温条件下（一般20℃左右为佳）的硬度适中，在此状态下运用石蜡切片机，可进行石蜡包埋组织块的切片。三、实验材料：1、石蜡包埋的组织块。2、药品和器械：粘片液、石蜡切片机、清洁的载玻片、石蜡伸展台、毛笔、解剖针、吸水纸、切片盒等。四、实验准备：1、配制粘片液2、清洗载玻片五、实验步骤：1、石蜡包埋块的做台：（1）石蜡块的固着（2）修块2、掌握切片机的结构和使用方法3、固定4、调整石蜡块与刀口之间的角度与位置5、调整厚度计6、切片7、贴片8、捞片展片9、切片工作结束后，将切片力取下，放入力盒内。用干净的纱布把切片机擦拭干净六、注意事项：1、室温不可过高或过低（20℃左右为宜），如条件允许，切片工作应在空调房内进行。2、切片刀要研磨锋利。3、木台在夹物台上一定要固定牢固。4、摇动推动螺旋时要小心观察，蜡块不可以上或超过刀口。5、摇转速度不可太急，要均匀。6、粘片时粘片液不能涂得过厚，否则烘干时易产生气泡，烘干一定要彻底烘干。七、实验要求与思考：熟悉实验的步骤并掌握切片的操作技能；独立动手认真进行石蜡切片；分析蜡片的形态如何使蜡片平行连接成带；解决蜡片皱折、伸展等技术问题
第三部分 水产动物组织的石蜡切片法 一、实验目的：掌握水产动物组织材料的石蜡切片技术。 二、实验原理：石蜡在室温条件下（一般 20℃左右为佳）的硬度适中，在此状态下 运用石蜡切片机，可进行石蜡包埋组织块的切片。 三、实验材料： 1、石蜡包埋的组织块。 2、药品和器械：粘片液、石蜡切片机、清洁的载玻片、石蜡伸展台、毛笔、解剖针、 吸水纸、切片盒等。 四、实验准备： 1、配制粘片液 2、清洗载玻片 五、实验步骤： 1、石蜡包埋块的做台： (1) 石蜡块的固着 （2）修块 2、掌握切片机的结构和使用方法 3、固定 4、调整石蜡块与刀口之间的角度与位置 5、调整厚度计 6、切片 7、贴片 8、捞片展片 9、切片工作结束后，将切片刀取下，放入刀盒内。用干净的纱布把切片机擦拭干净 六、注意事项： 1、室温不可过高或过低（20℃左右为宜），如条件允许，切片工作应在空调房内进行。 2、切片刀要研磨锋利。 3、木台在夹物台上一定要固定牢固。 4、摇动推动螺旋时要小心观察，蜡块不可以挨上或超过刀口。 5、摇转速度不可太急，要均匀。 6、粘片时粘片液不能涂得过厚，否则烘干时易产生气泡，烘干一定要彻底烘干。 七、实验要求与思考： 熟悉实验的步骤并掌握切片的操作技能；独立动手认真进行石蜡切片；分析蜡片的形态， 如何使蜡片平行连接成带；解决蜡片皱折、伸展等技术问题
第四部分水产动物组织切片的染色及观察法一、实验目的：掌握水产动物组织切片的染色方法和观察各器官组织的基本结构。二、实验原理：不同染色剂对各器官组织结构的染色效果不同，产生不同的颜色和不同的折射率，可使组织或细胞内各部分的构造清晰地显示出来，便于利用光学显微镜进行观察研究，运用组织学的方法可以了解细胞组织的化学成分。三、实验材料：1、待染的组织切片。2、药品和器械：酒精、二甲苯、苏木精、冰醋酸、甘油、钾矾、曙红Y（伊红）、品红、甲基兰等染色剂、染色缸、树脂等。四、实验准备：（H、E染色为例）1、清洗试剂瓶等玻璃器皿2、配制苏木精染液3、配制0.5%曙红Y染液4、配制浓度为95%、90%、70%、50%的酒精溶液5、清洗染色缸五、实验步骤：1、脱腊2、复水3、染色4、脱水5、透明6、封片7、切片风干后，将切片放在显微镜下观察、判断与分析。六、注意事项：1、第一步的脱蜡必须彻底，否则会影响到下一步操作。2、流水不能过大，荡洗的动作要轻缓，以防切片脱落。3、染色的步骤要依次进行，不能前后颠倒。4、不能有酸性或碱性的物质与透明剂接触。5、封片时动作要快，以免切片上的二甲苯挥发尽后材料因变干而黑掉。6、尽量避免人为的污染。七、实验要求与思考：理解细胞组织染色的原理和掌握染色的技能：认真观察染色后的器官、组织及细胞的基本结构；如何避免人为污染，如实反映切片的细胞组织结构？
第四部分 水产动物组织切片的染色及观察法 一、实验目的：掌握水产动物组织切片的染色方法和观察各器官组织的基本结构。 二、实验原理：不同染色剂对各器官组织结构的染色效果不同，产生不同的颜色和 不同的折射率，可使组织或细胞内各部分的构造清晰地显示出来，便于利用光学显微镜进行 观察研究，运用组织学的方法可以了解细胞组织的化学成分。 三、实验材料： 1、待染的组织切片。 2、药品和器械：酒精、二甲苯、苏木精、冰醋酸、甘油、钾矾、曙红 Y（伊红）、品红、 甲基兰等染色剂、染色缸、树脂等。 四、实验准备：（H、E 染色为例） 1、清洗试剂瓶等玻璃器皿 2、配制苏木精染液 3、配制 0.5%曙红 Y 染液 4、配制浓度为 95%、90%、70%、50%的酒精溶液 5、清洗染色缸 五、实验步骤： 1、脱腊 2、复水 3、染色 4、脱水 5、透明 6、封片 7、切片风干后，将切片放在显微镜下观察、判断与分析。 六、注意事项： 1、第一步的脱蜡必须彻底，否则会影响到下一步操作。 2、流水不能过大，荡洗的动作要轻缓，以防切片脱落。 3、染色的步骤要依次进行，不能前后颠倒。 4、不能有酸性或碱性的物质与透明剂接触。 5、封片时动作要快，以免切片上的二甲苯挥发尽后材料因变干而黑掉。 6、尽量避免人为的污染。 七、实验要求与思考： 理解细胞组织染色的原理和掌握染色的技能；认真观察染色后的器官、组织及细胞的基 本结构；如何避免人为污染，如实反映切片的细胞组织结构？