3.1.1.2 肌球蛋白的结构
3.1.1.2 肌球蛋白的结构
Rayment Model of Myosin S-1 ATP binding site Actin binding site Lc-1/3 LC-2 德95 州
轻链的结构 ➢ 三种轻链存在于重链头部，按分子量大小分别为LC1、 LC2和LC3。LC1和LC3在碱溶液中能解离，称为碱轻链 （即A1和A2）；LC2在5,5’-二硫双（2-二硝基苯甲酸） 即DTNB中能解离，故称为DTNB-LC。 ➢ A1、A2由同一遗传子合成，其氨基酸排列大致相同， 是ATPase作用时的必需成分；DTNB-LC与Ca2+结合， 其组成氨基酸的丝氨酸被磷酸化。 ➢ 肌球蛋白的轻链分子量和氨基酸组成因种类而异，在鲤、 鲫等中，A1>DTNB-LC>A2，而在鲭等鲭科鱼中， A1>A2>DTNB-LC，显示出A2的分子量与鱼类的游泳运 动有关
轻链的结构 ➢ 三种轻链存在于重链头部，按分子量大小分别为LC1、 LC2和LC3。LC1和LC3在碱溶液中能解离，称为碱轻链 （即A1和A2）；LC2在5,5’-二硫双（2-二硝基苯甲酸） 即DTNB中能解离，故称为DTNB-LC。 ➢ A1、A2由同一遗传子合成，其氨基酸排列大致相同， 是ATPase作用时的必需成分；DTNB-LC与Ca2+结合， 其组成氨基酸的丝氨酸被磷酸化。 ➢ 肌球蛋白的轻链分子量和氨基酸组成因种类而异，在鲤、 鲫等中，A1>DTNB-LC>A2，而在鲭等鲭科鱼中， A1>A2>DTNB-LC，显示出A2的分子量与鱼类的游泳运 动有关
3.1.1.3 肌球蛋白的提取分离 鱼 肉 加入低离子浓度 缓冲液 Ph7.5 洗 净 提 取 加入磷酸缓冲液 Ph6.4 稀 释 沉淀溶解于0.6MKCl 透析除盐 肌球蛋白 I<0.025
3.1.1.3 肌球蛋白的提取分离 鱼 肉 加入低离子浓度 缓冲液 Ph7.5 洗 净 提 取 加入磷酸缓冲液 Ph6.4 稀 释 沉淀溶解于0.6MKCl 透析除盐 肌球蛋白 I<0.025
3.1.1.4 ATPase 肌球蛋白ATPase被Ca2+和K+所赋活： Ca2+ 存在下的活性称为Ca2+ -ATPase活性，在pH6和9有 两个最适pH；K+存在下的活性，是通过添加EDTA除 去Ca2+Mg2+后测定的，因此称为EDTA-ATPase活 性，在碱性较高。 在生理条件的低离子强度下，肌球蛋白ATPase活 性被Mg2+所抑制，但在肌动蛋白共存下则被赋活，此 时的Mg2+-ATPase活性就是肌动球蛋白的酶活性
3.1.1.4 ATPase 肌球蛋白ATPase被Ca2+和K+所赋活： Ca2+ 存在下的活性称为Ca2+ -ATPase活性，在pH6和9有 两个最适pH；K+存在下的活性，是通过添加EDTA除 去Ca2+Mg2+后测定的，因此称为EDTA-ATPase活 性，在碱性较高。 在生理条件的低离子强度下，肌球蛋白ATPase活 性被Mg2+所抑制，但在肌动蛋白共存下则被赋活，此 时的Mg2+-ATPase活性就是肌动球蛋白的酶活性