·基因操作（重组DNA技术） ·重组DNA(分子克隆) ·分子杂交
• 基因操作（重组DNA技术） • 重组DNA（分子克隆） • 分子杂交
H2载体设计 噬菌体 ·入噬菌体 溶源性ysogenic phase 烈性ytic phase ·48.5kb/37-52kb/20kb 左臂 ↓个 右臂 ·cos sites(cohesive sites、.l2bp) 非必须序列 ·入载体(replacement vectors) EMBL3、入DASH 5 -CGGGGCGGCGACCTCG-3 3-GCCCCGCCGCTGGAGC-5' GGGCGGCGACCTCG-3' 5'-cG + GC-5' 3-GCCCCGCCGCTGGA
H2 载体设计——噬菌体 5’-CG + 3’-GCCCCGCCGCTGGA GGGCGGCGACCTCG-3’ + GC-5’ 5’-CGGGGCGGCGACCTCG-3’ 3’-GCCCCGCCGCTGGAGC-5’ 左臂 右臂 非必须序列 • 噬菌体 溶源性 lysogenic phase 烈性 lytic phase • 48.5kb / 37-52kb / 20kb • cos sites （cohesive sites、12bp） • 载体（replacement vectors） EMBL3、 DASH
3载体设计 粘粒 p BamHⅡ cos amp' cos Cosmid vector ori Cosmid vector 37~52kb ~5kb BamHI insert ori BamHI cos cos
H3 载体设计——粘粒 ori ampr Cosmid vector ~5kb cos BamHI ori ampr Cosmid vector 37~52kb cos BamHI BamHI insert cos cos insert
H3载体设计 YACs SnaB I CEN4 TEL-telomeric DNA SUP4 CEN4-centromere sequence ARS PYAC3 ARS酵母复制起点 TRP1 11.4kb URA3 TRP1-与p mutant互补 URA3-选择基因 SUP4-red-white color test TEL TEL
H3 载体设计——YACs SnaB I TEL TRP1 pYAC3 11.4kb SUP4 URA3 TEL ARS CEN4 insert TEL- telomeric DNA CEN4- centromere sequence ARS- 酵母复制起点 TRP1- 与 trp mutant 互补 URA3- 选择基因 SUP4- red-white color test
第二节目的基因的获得和检测 0 基因文库(gene library)又称DNA文库，是用 重组DNA技术和DNA克隆方法人工建立的包含 一个生物体或人的所有DNA序列克隆的集团为 基因组文库 。 cDNA文库mRNA逆转录成cDNA,然后 克隆到质粒或噬菌体重而形成的含有全 部cDNA的集团
第二节 目的基因的获得和检测 • 基因文库(gene library)又称DNA文库，是用 重组DNA技术和DNA克隆方法人工建立的包含 一个生物体或人的所有DNA序列克隆的集团为 基因组文库. • cDNA文库 mRNA 逆转录成cDNA，然后 克隆到质粒或噬菌体重而形成的含有全 部cDNA的集团