植物生物学实验指导面的中央滴一小滴香柏油，再换上油镜头，使油镜头与香柏油接触，然后由目镜观察。一边观察，一边用手稍移动细调节器（切忌用粗调节器）以看清物象。用油镜观察完毕后，转开油镜，必须用擦镜纸滴点二甲苯擦去镜头上的香柏油。每次实验完毕后，都要把高、倍接物镜转向前方，不可使接物镜正对着聚光器，然后放回镜箱（或镜柜）内。提放显微镜时，一定要右手握镜臂，左手托镜座，平贴胸部，轻提轻放。要注意经常保持显微镜的清洁，如金属部分有灰尘时.一定要用清洁的软布擦干净。如镜头有灰尘时，必须用擦镜纸轻轻地擦拭。切勿用手或其他布、纸等擦拭，以免损坏透镜。（三）显微镜的保养维护显微镜是精密光学仪器。使用时一定要小心，注意保养和维护。1.防潮。显微镜要放在干燥的地方。长期放在潮湿处不使用，透镜容易发霉，金属部分也会生锈。镜箱内应放干燥剂（如变色硅胶或氯化钙）。2.防尘。显微镜要放在清洁的室内，注意防尘，避免灰尘落到上面，特别是物镜上。经常使用的显微镜不必放入镜箱内，但应罩上合适的防尘罩，如软塑料布或细绸布。3.防腐蚀。显微镜不应和有挥发性的化学药品以及有腐蚀性的酸类（如硫酸、盐酸、硝酸等）和碱类（如苛性钠等）放在一起，以免被侵蚀。4.防热。显微镜不应放在阳光下曝晒，也不要放在靠近火炉或有暖气的地方，因为显微镜的金属部分和光学部分的热膨胀系数不同，受热后镜头有可能碎裂。镜头是用树胶、洋干漆或亚麻仁油粘合起来的，粘合剂受高热将融化，镜片也有可能脱落或分离。5.机械装置的擦拭。机械部分如有擦不掉的污迹，可用擦镜纸或细绸布蘸点液体石蜡擦拭，不能用酒精或乙醚擦，因为这些溶剂会侵蚀油漆，容易把油漆擦掉。6.光学镜头的擦拭。（1）光学镜头一般不要随便擦拭，如有灰尘等附着物，可用吹气球吹去。（2）如有擦不掉的灰尘、油污或指印时，可用表面光滑的细木棍或小竹签裹上脱脂棉或擦镜纸，稍蘸一点二甲苯轻擦，不可重擦、乱擦，因为灰尘中有许多比玻璃还硬4
植物生物学实验指导 4 面的中央滴一小滴香柏油，再换上油镜头，使油镜头与香柏油接触，然后由目镜观察。 一边观察，一边用手稍移动细调节器（切忌用粗调节器）以看清物象。用油镜观察完毕 后，转开油镜，必须用擦镜纸滴点二甲苯擦去镜头上的香柏油。 每次实验完毕后，都要把高、倍接物镜转向前方，不可使接物镜正对着聚光器，然 后放回镜箱(或镜柜)内。提放显微镜时，—定要右手握镜臂，左手托镜座，平贴胸部， 轻提轻放。 要注意经常保持显微镜的清洁，如金属部分有灰尘时．一定要用清洁的软布擦干净。 如镜头有灰尘时，必须用擦镜纸轻轻地擦拭。切勿用手或其他布、纸等擦拭，以免损坏 透镜。 （三）显微镜的保养维护 显微镜是精密光学仪器。使用时一定要小心，注意保养和维护。 1.防潮。 显微镜要放在干燥的地方。长期放在潮湿处不使用，透镜容易发霉，金属部分也会 生锈。镜箱内应放干燥剂（如变色硅胶或氯化钙）。 2.防尘。 显微镜要放在清洁的室内，注意防尘，避免灰尘落到上面，特别是物镜上。经常使 用的显微镜不必放入镜箱内，但应罩上合适的防尘罩，如软塑料布或细绸布。 3.防腐蚀。 显微镜不应和有挥发性的化学药品以及有腐蚀性的酸类（如硫酸、盐酸、硝酸等） 和碱类（如苛性钠等）放在一起，以免被侵蚀。 4.防热。 显微镜不应放在阳光下曝晒，也不要放在靠近火炉或有暖气的地方，因为显微镜的 金属部分和光学部分的热膨胀系数不同，受热后镜头有可能碎裂。镜头是用树胶、洋干 漆或亚麻仁油粘合起来的，粘合剂受高热将融化，镜片也有可能脱落或分离。 5.机械装置的擦拭。 机械部分如有擦不掉的污迹，可用擦镜纸或细绸布蘸点液体石蜡擦拭，不能用酒精 或乙醚擦，因为这些溶剂会侵蚀油漆，容易把油漆擦掉。 6.光学镜头的擦拭。 （1）光学镜头一般不要随便擦拭，如有灰尘等附着物，可用吹气球吹去。 （2）如有擦不掉的灰尘、油污或指印时，可用表面光滑的细木棍或小竹签裹上脱 脂棉或擦镜纸，稍蘸一点二甲苯轻擦，不可重擦、乱擦，因为灰尘中有许多比玻璃还硬
植物生物学实验指导的砂粒，乱擦很容易划出条纹。另外，要顺着镜片的直径方向擦，而不要绕着镜头的圆周擦，因为万一划出条纹，直径方向的条纹比圆周方向的条纹对成像质量的影响要小些。（3）镜头表面发霉长雾时，用酒精一一乙醚混合液擦拭。其配比要根据存放显微镜房间的干湿程度灵活掌握。配比如下：潮湿干燥非常干垛酒精15 %10%25%乙醚85%75 %90 %使用时用量要少，擦拭时不要停留过久，以防镜头脱胶损坏。（4）视野中出现污点或异物，通常是目镜或标本不干净造成的，旋转目镜或移动标本，看污点或异物是跟着目镜旋转，还是跟着标本移动，就能判断附着物是在目镜上还是在标本上。除去这些污点或异物，就能得到清晰的物像。视野的一部分不清晰，这可能是自镜或物镜前透镜上面有指纹或灰尘，也可能是标本不良，或显微镜用法不当，或照明部分未调好等原因，应找出原因加以解决。7.镜筒取放及清洁。目镜取下时，物镜的后透镜背面上也容易落上灰尘，装上物镜后要立即插入目镜，物镜不必从物镜转换器上卸下来。如要拆卸，拆卸后的物镜，要使镜片的一端朝上，放在清洁的物体上。长期不用的目镜金属筒外侧如有灰尘要擦净后插入镜筒。清除镜筒内灰尘时，要特别注意清洁。8.机械装置的保养。机械装置表面不要常上油，以免混入灰尘，使操作反而不灵活。调焦装置和聚光器升降装置的齿轮、齿条和导轨等部分都涂有优质润滑油，不要再加机油或质量不好的润滑油。有时新购来的或多年未用的显微镜，操作时有些不灵活，只要来回拧动几次，就会逐渐灵活起来，有时室内温度过低，润滑油凝固而引起的操作不灵活，只要温度升高些就会灵活。9.粗准焦螺旋的调整。过紧，不容易转动；过松，镜筒会自动下滑，使调好的视野变得不清晰。对此，用手握紧一侧粗准焦螺旋，另一手转动另一侧粗准焦螺旋，作适当的前后转动，直到松紧适度为止。附：显微镜术语1、总放大倍率：显微镜的总放大倍率一单个物镜的放大倍率×目镜的放大倍率5
植物生物学实验指导 5 的砂粒，乱擦很容易划出条纹。另外，要顺着镜片的直径方向擦，而不要绕着镜头的圆 周擦，因为万一划出条纹，直径方向的条纹比圆周方向的条纹对成像质量的影响要小些。 （3）镜头表面发霉长雾时，用酒精——乙醚混合液擦拭。其配比要根据存放显微 镜房间的干湿程度灵活掌握。配比如下： 使用时用量要少，擦拭时不要停留过久，以防镜头脱胶损坏。 （4）视野中出现污点或异物，通常是目镜或标本不干净造成的，旋转目镜或移动 标本，看污点或异物是跟着目镜旋转，还是跟着标本移动，就能判断附着物是在目镜上 还是在标本上。除去这些污点或异物，就能得到清晰的物像。视野的一部分不清晰，这 可能是目镜或物镜前透镜上面有指纹或灰尘，也可能是标本不良，或显微镜用法不当， 或照明部分未调好等原因，应找出原因加以解决。 7.镜筒取放及清洁。 目镜取下时，物镜的后透镜背面上也容易落上灰尘，装上物镜后要立即插入目镜， 物镜不必从物镜转换器上卸下来。如要拆卸，拆卸后的物镜，要使镜片的一端朝上，放 在清洁的物体上。长期不用的目镜金属筒外侧如有灰尘要擦净后插入镜筒。清除镜筒内 灰尘时，要特别注意清洁。 8. 机械装置的保养。 机械装置表面不要常上油，以免混入灰尘，使操作反而不灵活。调焦装置和聚光器 升降装置的齿轮、齿条和导轨等部分都涂有优质润滑油，不要再加机油或质量不好的润 滑油。有时新购来的或多年未用的显微镜，操作时有些不灵活，只要来回拧动几次，就 会逐渐灵活起来，有时室内温度过低，润滑油凝固而引起的操作不灵活，只要温度升高 些就会灵活。 9.粗准焦螺旋的调整。 过紧，不容易转动；过松，镜筒会自动下滑，使调好的视野变得不清晰。对此，用 手握紧一侧粗准焦螺旋，另一手转动另一侧粗准焦螺旋，作适当的前后转动，直到松紧 适度为止。 附: 显微镜术语 1、总放大倍率： 显微镜的总放大倍率＝单个物镜的放大倍率×目镜的放大倍率
植物生物学实验指导2、数值孔径N.A.：数值孔径是决定物镜和聚光镜性能的一个重要参数，它用下式表示：N.A.=nsinα（n为物镜透镜和聚光镜与标本之间的一种介质如空气或浸油的折射率，而α则是孔径角的一半。数值孔径越大。图像就越明亮，分辨率就越高。3、分辨率：分辨相隔微小距离的两个点的能力的指标，称为分辨率。分辨率=入／（2XN.A.）（入为所用光线的波长）4、机械筒长：是指从转换器上的物镜安装端面到插入目镜处的镜筒顶端的长度如本镜为160mm）。5、工作距离：指当一个标本图像被清晰聚焦时，从物镜的前端到盖玻片的上表面的距离，通常物镜的放大倍率越高，其工作距离便越短。6、视场数：指透过目镜可观察到的视场的直径（mm），再目镜的顶端标明的10×/18，表示目镜的放大倍率为10×，视场数为18。7、物方视场：是指标本在显微镜下实际能被观察到的圆形区域的直径。物方视场一视场数/物镜的放大倍率。（四）简易装片制作用手或镊子将洋葱鳞叶表皮撕下剪成约3～5毫米的小片。在载玻片上滴一滴水，将剪好的表皮浸入水滴内（注意表皮的外面应朝上），并用解剖针挑平，再加盖玻片。加盖玻片的方法是先从一边接触水滴，另一边用针顶住慢慢放下，以免产生气泡。如盖玻片内的水未充满，可用滴管吸水从盖波片的一侧滴入；如果水太多浸出盖玻片外可用吸水纸将多余的水吸去，这样装好的片子就可以进行镜检。（五）观察洋葱鳞叶表皮细胞的构造把装好的片子放在显微镜载物台上，先用低倍接物镜观察，可看到许多长形的小室，这就是细胞，再换用高倍接物镜观察细胞的详细结构，可看到：1、细胞壁包在细胞的最外面。2、细胞质幼小细胞的细胞质充满整个细胞，形成大液泡时，细胞质贴着细胞壁成一薄层。6
植物生物学实验指导 6 2、数值孔径 N.A.: 数值孔径是决定物镜和聚光镜性能的一个重要参数，它用下式表示：N.A.＝n sin α（n 为物镜透镜和聚光镜与标本之间的一种介质如空气或浸油的折射率，而α则是孔 径角的一半。数值孔径越大。图像就越明亮，分辨率就越高。 3、分辨率： 分辨相隔微小距离的两个点的能力的指标，称为分辨率。分辨率＝λ/（2×N.A.） (λ为所用光线的波长) 4、机械筒长： 是指从转换器上的物镜安装端面到插入目镜处的镜筒顶端的长度如本镜为 160mm)。 5、工作距离： 指当一个标本图像被清晰聚焦时，从物镜的前端到盖玻片的上表面的距离，通常物 镜的放大倍率越高，其工作距离便越短。 6、视场数： 指透过目镜可观察到的视场的直径（mm），再目镜的顶端标明的 10×/18，表示目镜 的放大倍率为 10×，视场数为 18。 7、物方视场： 是指标本在显微镜下实际能被观察到的圆形区域的直径。物方视场＝视场数/物镜 的放大倍率。 （四）简易装片制作 用手或镊子将洋葱鳞叶表皮撕下剪成约 3 ～ 5 毫米的小片。在载玻片上滴一滴 水，将剪好的表皮浸入水滴内（注意表皮的外面应朝上），并用解剖针挑平，再加盖玻 片。加盖玻片的方法是先从一边接触水滴，另一边用针顶住慢慢放下，以免产生气泡。 如盖玻片内的水未充满，可用滴管吸水从盖波片的一侧滴入；如果水太多浸出盖玻片外， 可用吸水纸将多余的水吸去，这样装好的片子就可以进行镜检。 （五）观察洋葱鳞叶表皮细胞的构造 把装好的片子放在显微镜载物台上，先用低倍接物镜观察，可看到许多长形的小室， 这就是细胞，再换用高倍接物镜观察细胞的详细结构，可看到： 1、细胞壁 包在细胞的最外面。 2、细胞质 幼小细胞的细胞质充满整个细胞，形成大液泡时，细胞质贴着细胞壁 成一薄层
植物生物学实验指导3、细胞核在细胞质中有一个染色较深的圆球状颗粒，这就是细胞核，有时还可看到其中的核仁。4、液泡如把光线调暗一些，可见细胞内较亮的部分，这就是液泡。幼小细胞的液泡小，数目多。成长的细胞通常只有一个大液泡，占细胞的大部分。（六）生物绘图进行植物形态构造实验时，常需绘图。绘出的图要清楚，并正确的表示出形态构造的特点，绘图注意事项如下：1、绘图要用黑色硬铅笔，不要用软铅笔或有色铅笔，一般用2H铅笔为宜。2、图的大小及在纸上分布的位置要适当。一般画在靠近中央稍偏左方，并向右方引出注明各部名称的线条。各引出线条要整齐平列，各部名称写在线条右边3、画图时先用轻淡小点或轻线条画出轮廓，再依照轮廓一笔画出与物象相符的线条。线条要清晰，比例要准确。较长的线条要向顺手的方向运笔，或把纸转动再画。同一线条粗细相同，中间不要有断线或开叉痕迹，线条也不要涂抹。4、绘出的图要正确，观察时要把混杂物、破损、重叠等现象区别清楚，不要把这些现象绘上。5、图的明暗及浓淡，应用细点表示，不要采用涂抹方法。点细点时，要点成圆点，不要点成小。6、整个图要美观、整洁，还要特别注意准确性。（七）徒手切片1、将植物材料切成0.5cm见方，1一2cm长的长方条。如果是叶片，则把叶片切成0.5cm宽的窄条，夹在胡萝卜（或萝卜或通草）等长方条的切口内。2、取上述一个长方条用正手的拇指和食指拿着，使长方条上端露出1一2mm高：并以无名指顶住材料。用右手拿着刀片的一端。3、把材料上端和刀刃先蘸些水，并使材料成直立方向，刀片成水平方向，自外向内把材料上端切去少许，使切口成光滑的断面，并在切口蘸水，接着按同法把材料切成极薄的薄片（愈薄愈好）。切时要用臂力，不要用腕力及指力，刀片切割方向由左前方向右后方拉切；拉切的速度宜较快，不要中途停顿。把切下的切片用小镊子或解剖针拨入表面血的清水中，切时材料的切面经常蘸水，起润滑作用。4、初切时必须反复练习，并多切一些，从中选取最好的薄片进行装片观察5、如需染色，可把薄片放入盛有染色液的表面皿内，染色约1分钟，轻轻取出放入另一盛清水的表面皿内漂洗，之后，即可装片观察。7
植物生物学实验指导 7 3、细胞核 在细胞质中有一个染色较深的圆球状颗粒，这就是细胞核，有时还可 看到其中的核仁。 4、液泡 如把光线调暗一些，可见细胞内较亮的部分，这就是液泡。幼小细胞的 液泡小，数目多。成长的细胞通常只有一个大液泡，占细胞的大部分。 （六）生物绘图 进行植物形态构造实验时，常需绘图。绘出的图要清楚，并正确的表示出形态构造 的特点，绘图注意事项如下： 1、绘图要用黑色硬铅笔，不要用软铅笔或有色铅笔，一般用 2H 铅笔为宜。 2、图的大小及在纸上分布的位置要适当。一般画在靠近中央稍偏左方，并向右方 引出注明各部名称的线条。各引出线条要整齐平列，各部名称写在线条右边 3、画图时先用轻淡小点或轻线条画出轮廓，再依照轮廓一笔画出与物象相符的线 条。线条要清晰，比例要准确。较长的线条要向顺手的方向运笔，或把纸转动再画。同 一线条粗细相同，中间不要有断线或开叉痕迹，线条也不要涂抹。 4、绘出的图要正确，观察时要把混杂物、破损、重叠等现象区别清楚，不要把这 些现象绘上。 5、图的明暗及浓淡，应用细点表示，不要采用涂抹方法。点细点时，要点成圆点， 不要点成小撇。 6、整个图要美观、整洁，还要特别注意准确性。 （七）徒手切片 1、将植物材料切成 0.5cm 见方， 1 — 2cm 长的长方条。如果是叶片，则把叶片 切成 0.5cm 宽的窄条，夹在胡萝卜 ( 或萝卜或通草 ) 等长方条的切口内。 2、取上述一个长方条用正手的拇指和食指拿着，使长方条上端露出 1 － 2mm 高， 并以无名指顶住材料。用右手拿着刀片的一端。 3、把材料上端和刀刃先蘸些水，并使材料成直立方向，刀片成水平方向，自外向 内把材料上端切去少许，使切口成光滑的断面，并在切口蘸水，接着按同法把材料切成 极薄的薄片（愈薄愈好）。切时要用臂力，不要用腕力及指力，刀片切割方向由左前方 向右后方拉切；拉切的速度宜较快，不要中途停顿。把切下的切片用小镊子或解剖针拨 入表面皿的清水中，切时材料的切面经常蘸水，起润滑作用。 4、初切时必须反复练习，并多切一些，从中选取最好的薄片进行装片观察。 5、如需染色，可把薄片放入盛有染色液的表面皿内，染色约 1 分钟，轻轻取出放 入另一盛清水的表面皿内漂洗，之后，即可装片观察
植物生物学实验指导也可以在载玻片上直接染色，即先把薄片放在载玻片上，滴一滴染色液。约1分钟，倾去染色液，再滴几滴清水，稍微摇动，再把清水倾去，然后再滴一滴清水，盖上盖玻片，便可镜检。五、思考与练习1、显微镜的构造分哪几部分？各部分有什么作用？2、反复练习使用低倍镜及高倍接物镜观察切片，使用时应特别注意什么问题？3、如何计算显微镜的放大倍数？你现在所用的显微镜可以放大多少倍？4、使用显微镜过程中，应做好哪些保养工作？六、实验报告绘几个表皮细胞，并注明细胞壁、细胞质、细胞核、液泡。8
植物生物学实验指导 8 也可以在载玻片上直接染色，即先把薄片放在载玻片上，滴一滴染色液。约 1 分 钟，倾去染色液，再滴几滴清水，稍微摇动，再把清水倾去，然后再滴一滴清水，盖上 盖玻片，便可镜检。 五、思考与练习 1、显微镜的构造分哪几部分？各部分有什么作用？ 2、反复练习使用低倍镜及高倍接物镜观察切片，使用时应特别注意什么问题？ 3、如何计算显微镜的放大倍数？你现在所用的显微镜可以放大多少倍？ 4、使用显微镜过程中，应做好哪些保养工作？ 六、实验报告 绘几个表皮细胞，并注明细胞壁、细胞质、细胞核、液泡