第十五章核酸的研究方法 Single-Stranded DNA to be Sequenced g▣阿A府可回A网闪a闪A Larger G c fragments Add: 5 c G DNA Polymerase I dATP @@ So the A dGTP 的回金 ⑧ sequence a dCTP of the t dTTP @的金 AC template T plus limiting amounts of strand is G fluorescently labelled 道①的金国 c ddATP 的总①的回金 g ddGTP ddCTP 的国a□国 ddTTP X的名回的金金 Smaller D fragments 的的国的①田 D 国自X的白田的田金 性国的A的国的@a 国的x的@的@@ 自a国的的白田的田日Ls
第十五章 核酸的研究方法
核酸分离纯化及含量测定 (一)核酸的分离、提取原则 要得到完整的天然大分子核酸，一般要注意3点： 1.保持低温(0°~4℃) 。 2.防止过酸、过碱，避免剧烈搅拌。 3.防止核酸酶的作用。 抑制ONase: 可加柠檬酸钠、EDTA等金属螯合剂；或加去 污剂十二烷基硫酸钠（SDS)；或加蛋白变性剂
（一）核酸的分离、提取原则 要得到完整的天然大分子核酸，一般要注意3点: 1．保持低温（0º～4℃）。 2．防止过酸、过碱，避免剧烈搅拌。 3．防止核酸酶的作用。 一 、核酸分离纯化及含量测定 抑制DNase： 可加柠檬酸钠、EDTA等金属螯合剂；或加去 污剂十二烷基硫酸钠（SDS）；或加蛋白变性剂
抑制RNase: (1)实验器皿高温，或高压灭菌，不能高压灭 菌的用具用0.1%二乙基焦碳酸盐（diethy1 pyrocarbonate,DEPC)处理。 (2)细胞破碎的同时加入强蛋白变性剂如硫 氰酸胍、异硫氰酸胍等。 (3)加核糖核酸酶阻抑蛋白(RNasin)等RNase 的抑制剂
抑制RNase： （1）实验器皿高温，或高压灭菌，不能高压灭 菌的用具用0.1%二乙基焦碳酸盐（diethyl pyrocarbonate,DEPC）处理。 （2）细胞破碎的同时加入强蛋白变性剂如硫 氰酸胍、异硫氰酸胍等。 （3）加核糖核酸酶阻抑蛋白（RNasin）等RNase 的抑制剂
(二) DNA的提取 1.材料的选择 2.细胞破碎 3.DNA-蛋白质(DNP)的提取 真核细胞DNA与蛋白质结合成核蛋白(DNP) RNA与蛋白质结合成RNP,而且DNP和RNP常常混在 一起。利用DNP和RNP在不同浓度NaCI中溶解度的 不同来分离DNP和RNP
（二）DNA的提取 1．材料的选择 2．细胞破碎 3．DNA-蛋白质（DNP）的提取 真核细胞DNA与蛋白质结合成核蛋白（DNP）， RNA与蛋白质结合成RNP，而且DNP和RNP常常混在 一起。利用DNP和RNP在不同浓度NaCl中溶解度的 不同来分离DNP和RNP
可用1mol/LNaC1:溶液提取DNP,用水稀释至 0.14no1/L,使DNP纤维沉淀，多次重复以纯化。 相对溶解度 0 0.14 Na&℉(mol/9 DNP在NaCl中的溶解度
可用1mol/LNaCl溶液提取DNP,用水稀释至 0.14mol/L,使DNP纤维沉淀，多次重复以纯化。 0.5 1.0 0 1 2 0.14 相 对 溶 解 度 NaCl（mol/L） DNP在NaCl中的溶解度