4.去蛋白质 (1)苯酚抽提法：水饱和苯酚与DNP一起振荡， 冷冻离心，DNA在上层水相，变性蛋白位于中 间界面，部分停留在苯酚相。多次重复除净蛋白。 (2)氯仿-异戊醇法 (3)酚：氯仿：异戊醇法 (4)SDS-蛋白酶法：细胞悬浮液中加2倍体积 sDs1%的缓冲液，并加入蛋白酶K(100ug/ml) 65℃保温4小时，使细胞蛋白质全部降解，再用 苯酚抽提
4．去蛋白质 （1）苯酚抽提法：水饱和苯酚与DNP一起振荡， 冷冻离心，DNA在上层水相，变性蛋白位于中 间界面，部分停留在苯酚相。多次重复除净蛋白。 （2）氯仿-异戊醇法 （3）酚:氯仿:异戊醇法 （4）SDS-蛋白酶法：细胞悬浮液中加2倍体积 SDS 1%的缓冲液，并加入蛋白酶K（100ug/ml） 65℃保温4小时，使细胞蛋白质全部降解，再用 苯酚抽提
5.沉淀DNA:合并水相DNA,在盐存在的条件 下加2倍体积冷的乙醇，DNA沉淀，用乙醚、乙 醇洗涤沉淀。 6.去RNA杂质：可用纯RNasel除去少量RNA。 7.进一步纯化：柱层析；电泳；密度梯度离心等 原核生物的DNA是裸露的，与蛋白质结合不多， 分离纯化要简单些
5．沉淀DNA： 合并水相DNA，在盐存在的条件 下加2倍体积冷的乙醇， DNA沉淀，用乙醚、乙 醇洗涤沉淀。 6．去RNA杂质：可用纯RNase除去少量RNA。 7．进一步纯化：柱层析；电泳；密度梯度离心等。 原核生物的DNA是裸露的，与蛋白质结合不多， 分离纯化要简单些
DNA分离纯化流程 破碎细胞 浓盐溶液◆ 稀释 DNP沉淀 苯酚抽提（或氯仿-辛醇）除蛋 白冷乙醇 DNA沉淀· 乙醚和乙 醇洗沉淀·柱层析；电泳；氯化铯密度梯度 离心；·纯DNA
• 破碎细胞 浓盐溶液 稀释 DNP沉淀 苯酚抽提（或氯仿-辛醇）除蛋 白 冷乙醇 DNA沉淀 乙醚和乙 醇洗沉淀 柱层析；电泳；氯化铯密度梯度 离心 ； 纯DNA DNA分离纯化流程
(三)RNA的提取 1.大分子RNA的提取 (1)异硫氰酸胍/苯酚-氯仿-SDS抽提法 (2)异硫氰酸胍/氯化铯密度梯度离心 蛋白质密度<1.33g/cm3;DNA≈1.71g/cm3; RNA>1.89g/cm3。 2.mRNA的提取 具有poly(A)的mRNA,可用oligo(dT) 亲和层析
（三）RNA的提取 1．大分子RNA的提取 （2）异硫氰酸胍/氯化铯密度梯度离心 蛋白质密度< 1.33g/cm 3；DNA≈ 1.71g/cm 3； RNA> 1.89g/cm 3 。 （1）异硫氰酸胍/苯酚-氯仿-SDS抽提法 2．mRNA的提取 具有poly（A）的mRNA，可用oligo（dT） 亲和层析
4.核酸含量的测定 核酸含量测定的方法有： 。紫外分光光度法：测260nm的光密度。 定磷法：磷与钼酸作用生成磷钼酸，被还原 成钼蓝，660nm处有最大吸收峰。 。定糖法： 加热 DNA:酸+二苯胺+脱氧核糖 蓝色（595nm) 加热 RNA: 盐酸+甲基间苯二酚+核糖 鲜绿色(670nm)
核酸含量测定的方法有： ：测260nm的光密度。 ：磷与钼酸作用生成磷钼酸，被还原 成钼蓝，660nm处有最大吸收峰。 ： ：酸 + 二苯胺 + 脱氧核糖 蓝色（595nm） ：盐酸 +甲基间苯二酚 +核糖 鲜绿色（ 670nm） 4.核酸含量的测定 加热 加热