材料 溶液|提取液指甲头发/05%03%03% 鸡蛋清大豆 (滴) 少许少许苯酚色氨酸酪氨酸 浓硝酸 2 4 现象 考马斯亮蓝反应 二、实验原理 考马斯亮蓝G250具有红色和蓝色两种色调。在酸性溶液中,其以游离态存 在呈棕红色;当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色 它染色灵敏度高,比氨基黑高3倍。反应速度快,约在2分钟左右时间达到 平衡,在室温一小时内稳定。在001~10mg蛋白质范围内,蛋白质浓度A9m 值成正比。所以常用来测定蛋白质含量 三、材料、仪器与试剂 蛋白质溶液(鸡蛋清:水=1:20);考马斯亮蓝染液 四、实验操作 取2支试管,按下表操作 试剂蛋白质溶液蒸馏水考马斯亮蓝染 管号 (mD (ml) 0 2 0.1 0.9 5 五、思考题 1.茚三酮反应的阳性结果是否经常是同一色调?并说明原因。 2.你能区分蛋白质茚三酮反应及其他氨基化合物茚三酮反应的结果吗?试 解释之。 3.能否利用茚三酮反应可靠地鉴定蛋白质的存在? 4.哪些芳香基因(蛋白质中的、非蛋白质中的)可以与浓硝酸作用呈现黄 色反应的阳性结果?
16 管 号 1 2 3 4 5 6 7 材 料 （滴） 鸡蛋清 溶液 4 大豆 提取液 4 指甲 少许 头发 少许 0.5% 苯酚 4 0.3% 色氨酸 4 0.3% 酪氨酸 4 浓硝酸/ （滴） 2 4 40 40 4 4 4 现象 考马斯亮蓝反应 二、实验原理 考马斯亮蓝 G250 具有红色和蓝色两种色调。在酸性溶液中，其以游离态存 在呈棕红色；当它与蛋白质通过疏水作用结合后变为蓝色。 它染色灵敏度高，比氨基黑高 3 倍。反应速度快，约在 2 分钟左右时间达到 平衡，在室温一小时内稳定。在 0.01~1.0mg 蛋白质范围内，蛋白质浓度 A595nm 值成正比。所以常用来测定蛋白质含量。 三、材料、仪器与试剂 蛋白质溶液（鸡蛋清∶水=1∶20）；考马斯亮蓝染液 四、实验操作 取 2 支试管，按下表操作 试剂 管号 蛋白质溶液 （ml） 蒸馏水 （ml） 考马斯亮蓝染 液 （ml） 1 0 1 5 2 0.1 0.9 5 五、思考题 1．茚三酮反应的阳性结果是否经常是同一色调？并说明原因。 2．你能区分蛋白质茚三酮反应及其他氨基化合物茚三酮反应的结果吗？试 解释之。 3．能否利用茚三酮反应可靠地鉴定蛋白质的存在？ 4．哪些芳香基因（蛋白质中的、非蛋白质中的）可以与浓硝酸作用呈现黄 色反应的阳性结果？
实验六蛋白质的性质实验—蛋白质的沉淀反应 、实验目的 1.加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 2.了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。 3.了解蛋白质变性与沉淀的关系 二、实验原理 在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水 胶体颗粒,在一定的理化因素影响下,蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。 蛋白质的沉淀反应可分为两类。 (1)可逆的沉淀的反应此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化,除去 引起沉淀的因素后,蛋白质的沉淀仍能溶解于原来的溶剂中,并保持其天然性质 而不变性。如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇(或丙酮)短时间作用 于蛋白质。提纯蛋白质时,常利用此类反应。 (2)不可逆沉淀反应此时蛋白质分子内部结构发生重大改变,蛋白质常 变性而沉淀,不再溶于原来溶剂中。加热引起的蛋白质沉淀与凝固,蛋白质与重 金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。 蛋白质变性后,有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在(如电荷),并不析 出。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀,而沉淀的蛋白质也未必都已变性 三、材料、仪器与试剂 (一)实验材料:鸡蛋清 (二)仪器设备:试管 (三)试剂 pH47醋酸醋酸钠的缓冲溶液;3%硝酸银溶液;5%三氯乙酸溶液;95%乙 醇;饱和硫酸铵溶液;硫酸铵结晶粉末;.lmo·L盐酸溶液:O.1mol·L-氢 氧化钠溶液;05mol·L碳酸钠溶液:0.lmol·Ll醋酸溶液;甲基红溶液 2%氯化钡溶液 四、实验操作 1.蛋白质的盐析:无机盐(硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等)的浓溶液能析出
17 实验六 蛋白质的性质实验——蛋白质的沉淀反应 一、实验目的 1．加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。 2．了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。 3．了解蛋白质变性与沉淀的关系。 二、实验原理 在水溶液中的蛋白质分子由于表面生成水化层和双电层而成为稳定的亲水 胶体颗粒，在一定的理化因素影响下，蛋白质颗粒可因失去电荷和脱水而沉淀。 蛋白质的沉淀反应可分为两类。 （1）可逆的沉淀的反应 此时蛋白质分子的结构尚未发生显著变化，除去 引起沉淀的因素后，蛋白质的沉淀仍能溶解于原来的溶剂中，并保持其天然性质 而不变性。如大多数蛋白质的盐析作用或在低温下用乙醇（或丙酮）短时间作用 于蛋白质。提纯蛋白质时，常利用此类反应。 （2）不可逆沉淀反应 此时蛋白质分子内部结构发生重大改变，蛋白质常 变性而沉淀，不再溶于原来溶剂中。加热引起的蛋白质沉淀与凝固，蛋白质与重 金属离子或某些有机酸的反应都属于此类。 蛋白质变性后，有时由于维持溶液稳定的条件仍然存在（如电荷），并不析 出。因此变性蛋白质并不一定都表现为沉淀，而沉淀的蛋白质也未必都已变性。 三、材料、仪器与试剂 （一）实验材料：鸡蛋清 （二）仪器设备：试管 （三）试剂 pH4.7 醋酸-醋酸钠的缓冲溶液；3%硝酸银溶液；5%三氯乙酸溶液；95%乙 醇；饱和硫酸铵溶液；硫酸铵结晶粉末；0.1 mol·L -1 盐酸溶液；0.1 mol·L -1 氢 氧化钠溶液；0.05 mol·L -1 碳酸钠溶液；0.1 mol·L -1 醋酸溶液；甲基红溶液； 2%氯化钡溶液 四、实验操作 1．蛋白质的盐析：无机盐（硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等）的浓溶液能析出
蛋白质。盐的浓度不同,析出的蛋白质也不同。 如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析岀,而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才 能析出。 由盐析获得的蛋白质沉淀,当降低其盐类浓度时,又能再溶解,故蛋白质的 盐析作用是可逆过程。 加5%卵清蛋白溶液5n于试管中,再加等量的饱和硫酸铵溶液,混匀后静 置数分钟则析出球蛋白的沉淀。倒出少量混浊沉淀,加少量水,观察是否溶解, 为什么?将管中内容物过滤,向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止,此时析 出的沉淀为清蛋白。 取出部分清蛋白,加少量蒸馏水,观察沉淀的再溶解 2.重金属离子沉淀蛋白质:重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物 取1支试管,加入蛋白质溶液2m,再加3%硝酸银溶液1~2滴,振荡试管, 有沉淀产生。放置片刻,倾去上清液,向沉淀中加入少量的水,沉淀是否溶解? 为什么? 3.某些有机酸沉淀蛋白质:取1支试管,加入蛋白质溶液2ml,再加lml5% 三氯乙酸溶液,振荡试管,观察沉淀的生成。放置片刻,倾出上清液,向沉淀中 加入少量水,观察沉淀是否溶解。 4.有机溶剂沉淀蛋白质:取1支试管,加入2m蛋白质溶液,再加入2ml95% 乙醇。混匀,观察沉淀的生成 5.乙醇引起的变性与沉淀:取3支试管,编号。依下表顺序加入试剂: 试剂(ml) 5%卵清|mol·Ll pH4.7 mol·Ll95%乙 管号 蛋白溶氢氧化 缓冲溶 盐酸溶醇 液 钠 液 液 溶液 振摇混匀后,观察各管有何变化。放置片刻,向各管内加水8m,然后在第
18 蛋白质。盐的浓度不同，析出的蛋白质也不同。 如球蛋白可在半饱和硫酸铵溶液中析出，而清蛋白则在饱和硫酸铵溶液中才 能析出。 由盐析获得的蛋白质沉淀，当降低其盐类浓度时，又能再溶解，故蛋白质的 盐析作用是可逆过程。 加 5%卵清蛋白溶液 5 ml 于试管中，再加等量的饱和硫酸铵溶液，混匀后静 置数分钟则析出球蛋白的沉淀。倒出少量混浊沉淀，加少量水，观察是否溶解， 为什么？将管中内容物过滤，向滤液中添加硫酸铵粉末到不再溶解为止，此时析 出的沉淀为清蛋白。 取出部分清蛋白，加少量蒸馏水，观察沉淀的再溶解。 2．重金属离子沉淀蛋白质：重金属离子与蛋白质结合成不溶于水的复合物。 取 1 支试管，加入蛋白质溶液 2 ml，再加 3%硝酸银溶液 1~2 滴，振荡试管， 有沉淀产生。放置片刻，倾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？ 为什么？ 3．某些有机酸沉淀蛋白质：取 1 支试管，加入蛋白质溶液 2 ml，再加 1 ml5% 三氯乙酸溶液，振荡试管，观察沉淀的生成。放置片刻，倾出上清液，向沉淀中 加入少量水，观察沉淀是否溶解。 4．有机溶剂沉淀蛋白质：取 1 支试管，加入 2 ml 蛋白质溶液，再加入 2 ml95% 乙醇。混匀，观察沉淀的生成。 5．乙醇引起的变性与沉淀：取 3 支试管，编号。依下表顺序加入试剂： 试剂（ml） 管号 5%卵清 蛋白溶 液 0.1 mol·L -1 氢氧化 钠 溶 液 0.1 mol·L -1 盐酸溶 液 95%乙 醇 pH4.7 缓冲溶 液 1 2 3 1 1 1 — 1 — — — 1 1 1 1 1 — — 振摇混匀后，观察各管有何变化。放置片刻，向各管内加水 8 ml，然后在第
2、3号管中各加一滴甲基红,再分别用0.1mol·L醋酸溶液及0.05mol·L 碳酸钠溶液中和之。观察各管颜色的变化和沉淀的生成。每管再加0.1moI·Ll 盐酸溶液数滴,观察沉淀的再溶解。解释各管发生的全部现象 五、思考题 1鸡蛋清为何可做铅、汞中毒的解素剂? 2.氯化汞为何能做为杀菌剂?
19 2、3 号管中各加一滴甲基红，再分别用 0.1 mol·L -1 醋酸溶液及 0.05 mol·L -1 碳酸钠溶液中和之。观察各管颜色的变化和沉淀的生成。每管再加 0.1 mol·L -1 盐酸溶液数滴，观察沉淀的再溶解。解释各管发生的全部现象。 五、思考题 1 鸡蛋清为何可做铅、汞中毒的解素剂？ 2．氯化汞为何能做为杀菌剂？