实验一血糖的斐林法测定 、实验目的 掌握 Folin-Wu法测定血糖含量的原理和方法。 二、实验原理 1.血糖指的是血液中哪一种糖 葡萄糖是血液主要的糖类,因此测血糖含量就是测血液中葡萄糖的含量 2.用什么方法测定? 测定血液中葡萄糖的含量,即测复杂组分中一种物质的量,根据生化实验基 本技术的原理,可采用分光光度法(比色法)进行测定 3.葡萄糖可以用比色法直接测定吗? 不行,可以用间接的方法。血液中的葡萄糖与碱性硫酸铜溶液共热,铜离子 即被血液中的葡萄糖还原成氧化亚铜,后者又可使钼酸试剂还原成低价的钼蓝 (蓝色)。血糖的含量与产生的氧化亚铜成正比,氧化亚铜的量与形成的钼化合 物的量成正比,可以用比色的方法进行测定。 三、材料、仪器与试剂 (一)、材料:动物血液 (二)、仪器(仪器的选择在实验开始前由学生在预习报告中提出方案后教师审 定) 分光光度计、血糖管、奥氏吸管、水浴锅、表面皿 (三)、药品(试剂的选择在实验开始前由学生在预习报告中提出方案后教师审 定后并配制) 标准葡萄糖溶液、碱性硫酸铜溶液(A、B液)、酸性钼酸盐溶液、10%钨酸钠溶 液、0.33mol/L硫酸溶液 四、实验操作 1.无蛋白血滤液的制备 用奥氏吸管吸取已加抗凝剂的全血1ml,缓缓放入20ml锥形瓶中,加水7ml 摇匀,血液变成红色透明时加10%钨酸钠lml,摇匀,再加0.33mol/L硫酸, 随加随摇,加完放置5~15πin,至沉淀由鲜红变为暗棕色,滤纸过滤。每亳升
1 实验一 血糖的斐林法测定 一、实验目的 掌握 Folin-Wu 法测定血糖含量的原理和方法。 二、实验原理 1.血糖指的是血液中哪一种糖？ 葡萄糖是血液主要的糖类，因此测血糖含量就是测血液中葡萄糖的含量。 2.用什么方法测定？ 测定血液中葡萄糖的含量，即测复杂组分中一种物质的量，根据生化实验基 本技术的原理，可采用分光光度法（比色法）进行测定。 3.葡萄糖可以用比色法直接测定吗？ 不行，可以用间接的方法。血液中的葡萄糖与碱性硫酸铜溶液共热，铜离子 即被血液中的葡萄糖还原成氧化亚铜，后者又可使钼酸试剂还原成低价的钼蓝 （蓝色）。血糖的含量与产生的氧化亚铜成正比，氧化亚铜的量与形成的钼化合 物的量成正比，可以用比色的方法进行测定。 三、材料、仪器与试剂 （一）、材料：动物血液 （二）、仪器（仪器的选择在实验开始前由学生在预习报告中提出方案后教师审 定） 分光光度计、血糖管、奥氏吸管、水浴锅、表面皿 （三）、药品（试剂的选择在实验开始前由学生在预习报告中提出方案后教师审 定后并配制） 标准葡萄糖溶液、碱性硫酸铜溶液（A、B 液）、酸性钼酸盐溶液、10％钨酸钠溶 液、0.33mol/L 硫酸溶液 四、实验操作： 1.无蛋白血滤液的制备 用奥氏吸管吸取已加抗凝剂的全血 1ml，缓缓放入 20ml 锥形瓶中，加水 7ml， 摇匀，血液变成红色透明时加 10％钨酸钠 1ml， 摇匀，再加 0.33mol /L 硫酸， 随加随摇，加完放置 5～15min，至沉淀由鲜红变为暗棕色，滤纸过滤。每毫升
无蛋白血滤液相当于0.1m1全血 2.血糖的测定 取具25ml刻度的血糖管3只,编号,用奧氏吸管吸取无蛋白血滤液2ml, 放入第一只血糖管中,于第二只血糖管中加2ml标准葡萄糖溶液。第三只血糖管 中加2ml蒸馏水。然后各加2nl新配置的碱性硫酸铜溶液,同时置沸水浴内煮 6imin,取出,在流水中迅速冷却,各加入4ml酸性钼酸盐溶液,lmin后以蒸馏 水稀释至25ml,混匀,倒入比色杯,用722型风光光度计于420~440nm波长比 色(先以空白管调节零点,然后测标准管和样品管)。 五、计算 按下式计算100m1全血中所含的血糖质量(mg) m= Alco A0/0.1x100 式中:m:100m1血中所含的糖质量 C0:标准葡萄糖溶液浓度 A1:样品溶液吸光度 A0:标准溶液吸光度 六、注意事项 1.欲得准确结果,所取血液的量必须准确。如果由吸管中放出血液的速度太 快,会有大量血液粘在吸管内壁,容量不准,所以一般放出1m1血液所用的时间 不应少于1min 2.沉淀由鲜红变为暗棕色,是因钨酸钠与硫酸作用生成钨酸,在适当酸度时, 使血红蛋白变性、沉淀。如血沉淀放置后不变为棕红色或重滤后仍混浊,可在钨 酸与血混合液中加入10%硫酸1~2滴,待变为暗棕色后再滤
2 无蛋白血滤液相当于 0.1ml 全血。 2.血糖的测定 取具 25ml 刻度的血糖管 3 只，编号，用奥氏吸管吸取无蛋白血滤液 2ml， 放入第一只血糖管中，于第二只血糖管中加 2ml 标准葡萄糖溶液。第三只血糖管 中加 2ml 蒸馏水。然后各加 2ml 新配置的碱性硫酸铜溶液，同时置沸水浴内煮 6min，取出，在流水中迅速冷却，各加入 4ml 酸性钼酸盐溶液，1min 后以蒸馏 水稀释至 25ml，混匀，倒入比色杯，用 722 型风光光度计于 420～440nm 波长比 色（先以空白管调节零点，然后测标准管和样品管）。 五、计算 按下式计算 100ml 全血中所含的血糖质量（mg）。 m＝ A1C0 A0 / 0.1 x100 式中：m：100ml 血中所含的糖质量 C0：标准葡萄糖溶液浓度 A1：样品溶液吸光度 A0：标准溶液吸光度 六、注意事项 1.欲得准确结果，所取血液的量必须准确。如果由吸管中放出血液的速度太 快，会有大量血液粘在吸管内壁，容量不准，所以一般放出 1ml 血液所用的时间 不应少于 1min。 2.沉淀由鲜红变为暗棕色，是因钨酸钠与硫酸作用生成钨酸，在适当酸度时， 使血红蛋白变性、沉淀。如血沉淀放置后不变为棕红色或重滤后仍混浊，可在钨 酸与血混合液中加入 10％硫酸 1～2 滴，待变为暗棕色后再滤
实验二种子粗脂肪的提取 、实验目的 脂肪广泛存在于油料植物种子和果实中,测定脂肪的含量,可以鉴别其品质 的优劣,也是油料作物选种和种质资源调査的常规测定项目。 、实验原理 在了解了实验目的之后,关于这个实验有以下几个问题需要大家思考: 1.种子成分很复杂,脂肪的提取如何进行? 2.什么是粗脂肪? (答:脂肪不溶于水,易溶于有机溶剂(如石油醚)。利用这一特性,选用 有机溶剂直接浸提出样品中的脂肪进行测定。提取物中除脂肪之外,还有游离脂 肪酸、石蜡、磷脂、固醇、色素、有机酸等物质,故浸提物称粗脂肪。)通过以 上问题的思考,我们知道了脂肪的提取主要是利用其易溶于有机溶剂的特性。具 体的实验操作粗脂肪的提取,一般采用索氏脂肪提取器 利用脂类物质溶于有机溶剂的特性。在索氏提取器中用有机溶剂(本实验用 石油醚,沸程为30~60℃)对样品中的脂类物质进行提取。 图索氏脂肪提取器 1.浸提管2.通气管3.虹吸管4.小烧瓶5.冷凝管 索氏提取器是由提取瓶、提取管、冷凝器三部分组成的,提取管两侧分别有
3 实验二 种子粗脂肪的提取 一、实验目的 脂肪广泛存在于油料植物种子和果实中，测定脂肪的含量，可以鉴别其品质 的优劣，也是油料作物选种和种质资源调查的常规测定项目。 二、实验原理 在了解了实验目的之后，关于这个实验有以下几个问题需要大家思考： 1.种子成分很复杂，脂肪的提取如何进行？ 2.什么是粗脂肪？ （答：脂肪不溶于水，易溶于有机溶剂（如石油醚）。利用这一特性，选用 有机溶剂直接浸提出样品中的脂肪进行测定。提取物中除脂肪之外，还有游离脂 肪酸、石蜡、磷脂、固醇、色素、有机酸等物质，故浸提物称粗脂肪。）通过以 上问题的思考，我们知道了脂肪的提取主要是利用其易溶于有机溶剂的特性。具 体的实验操作粗脂肪的提取，一般采用索氏脂肪提取器。 利用脂类物质溶于有机溶剂的特性。在索氏提取器中用有机溶剂（本实验用 石油醚，沸程为 30 ～ 60 ℃）对样品中的脂类物质进行提取。 图 索氏脂肪提取器 1. 浸提管 2. 通气管 3. 虹吸管 4. 小烧瓶 5. 冷凝管 索氏提取器是由提取瓶、提取管、冷凝器三部分组成的，提取管两侧分别有
虹吸管和连接管。各部分连接处要严密不能漏气。提取时,将待测样品包在脱脂 滤纸包内,放入提取管内。提取瓶内加入石油醚,加热提取瓶,石油醚气化,由 连接管上升进入冷凝器,凝成液体滴入提取管内,浸提样品中的脂类物质。待提 取管内石油醚液面达到一定髙度,溶有粗脂肪的石油醚经虹吸管流λ提取瓶。流 入提取瓶内的石油醚继续被加热气化、上升、冷凝,滴入提取管内,如此循环往 复,直到抽提完全为止。 三、材料、仪器与试剂 (一)实验材料 大豆、花生、蓖麻、向日葵、芝麻等油料种子。 (二)仪器设备 索氏提取器(50皿),烧杯,干燥器,脱脂滤纸,镊子,分析天平,烘箱, 恒温水浴,脱脂棉 (三)试剂 石油醚(化学纯,沸程30~60℃)。 四、实验操作 1.将洗净、晾干的芝麻种籽放在80~100℃烘箱中烘4小时。待冷却后, 准确地称取2~4g,置于硏钵中硏磨细,将硏碎的样品及擦净硏钵的脱脂棉 并用脱脂滤纸包住用丝线扎好,勿让样品漏出。或用特制的滤纸斗装样品后, 斗口用脱脂棉塞好。放入索氏提取器的提取管内,最后再用石油醚洗净硏钵后倒 入提取管内 2.洗净索氏提取瓶,在105℃烘箱内烘干至恒重,记录重量。将石油醚加 到提取瓶内约为瓶容积的1/2~2/3。把提取器各部分连接后,接口处不能漏 气。用70~80℃恒温水浴加热提取瓶,使抽提进行16小时左右,直至抽提 管内的石油醚用滤纸检验无油迹为止。此时表示提取完全 提取完毕,取岀滤纸包,再回馏一次,洗涤提取管。再继续蒸馏,当提 取管中的石油醚液面接近虹吸管口而未流入提取瓶时,倒出石油醚。若提取瓶中 仍有石油醚,继续蒸馏,直至提取瓶中石油醚完全蒸完。取下提取瓶,洗净瓶的 外壁,放入105℃烘箱中烘干至恒重,记录重量。 五、注意事项 1.本法采用沸点低于60℃的有机溶剂,不能提取出样品中结合状态的脂
4 虹吸管和连接管。各部分连接处要严密不能漏气。提取时，将待测样品包在脱脂 滤纸包内，放入提取管内。提取瓶内加入石油醚，加热提取瓶，石油醚气化，由 连接管上升进入冷凝器，凝成液体滴入提取管内，浸提样品中的脂类物质。待提 取管内石油醚液面达到一定高度，溶有粗脂肪的石油醚经虹吸管流入提取瓶。流 入提取瓶内的石油醚继续被加热气化、上升、冷凝，滴入提取管内，如此循环往 复，直到抽提完全为止。 三、材料、仪器与试剂 （一）实验材料 大豆、花生、蓖麻、向日葵、芝麻等油料种子。 （二）仪器设备 索氏提取器（ 50 mL ），烧杯，干燥器，脱脂滤纸，镊子，分析天平，烘箱， 恒温水浴，脱脂棉。 （三）试剂 石油醚（化学纯，沸程 30 ～ 60 ℃）。 四、实验操作 1.将洗净、晾干的芝麻种籽放在 80 ～ 100 ℃烘箱中烘 4 小时。待冷却后， 准确地称取 2 ～ 4 g ，置于研钵中研磨细，将研碎的样品及擦净研钵的脱脂棉 一并用脱脂滤纸包住用丝线扎好，勿让样品漏出。或用特制的滤纸斗装样品后， 斗口用脱脂棉塞好。放入索氏提取器的提取管内，最后再用石油醚洗净研钵后倒 入提取管内。 2. 洗净索氏提取瓶，在 105 ℃烘箱内烘干至恒重，记录重量。将石油醚加 到提取瓶内约为瓶容积的 1/2 ～ 2/3 。把提取器各部分连接后，接口处不能漏 气。用 70 ～ 80 ℃恒温水浴加热提取瓶，使抽提进行 16 小时左右，直至抽提 管内的石油醚用滤纸检验无油迹为止。此时表示提取完全。 3. 提取完毕，取出滤纸包，再回馏一次，洗涤提取管。再继续蒸馏，当提 取管中的石油醚液面接近虹吸管口而未流入提取瓶时，倒出石油醚。若提取瓶中 仍有石油醚，继续蒸馏，直至提取瓶中石油醚完全蒸完。取下提取瓶，洗净瓶的 外壁，放入 105 ℃烘箱中烘干至恒重，记录重量。 五、注意事项 1.本法采用沸点低于 60 ℃的有机溶剂，不能提取出样品中结合状态的脂
类,故此法又称为游离脂类定量测定法 2.待测样品若是液体,应将一定体积的样品滴在脱脂滤纸上在60~80℃烘 箱中烘干后放入提取管内。 本法使用有机溶剂石油醚(沸程30~60℃)故加热时不能用明火。 六、思考题 1.索氏提取法提取的为什么是粗脂肪? 做好本实验应注意哪些事项?
5 类，故此法又称为游离脂类定量测定法。 2.待测样品若是液体，应将一定体积的样品滴在脱脂滤纸上在 60～80℃烘 箱中烘干后放入提取管内。 3.本法使用有机溶剂石油醚（沸程 30 ～ 60 ℃）故加热时不能用明火。 六、思考题 1. 索氏提取法提取的为什么是粗脂肪 ? 2. 做好本实验应注意哪些事项 ?