浙江大学博士学位论文 第一章文献棕述与立题依据 表1-2基于GC-MS方法的食品中丙烯酰胺的定量分析工作 Table 1-2 GC-MS-based method for quantitative analysis of acrylamide in foods 样品基质内标 方法与 LODLOQ 衍生化， 色谱柱规格 遗样 质谱参数 参考文献 和线性范围 烤面包片甲基丙 DB17毛细管柱 GC-Ms 丙烯酰酸m饣152、 澳化 4℃、过夜30m*0.25mm, 非分流进 L0D:25gkg150、108、106: Ahn et al 油炸薯条烯酰胺 (2002) 0.25μm 样1L 内标mh122、120 谷物食品 D,丙烯无 DB-WAX毛细管 GC-MS/MS 丙烯酰胺mk89、Hoenicke 柱.30m×025 非分流进L0D:30gkgn、55: 时ad 酰胺 mm,0.25 um 样1L 内标mh92、75(2004) 游离脂肪酸聚酯熔 D,丙烯无 GC-MS 丙烯酰胶m271、Je刀usek天 面包片 融石英毛细管柱， 非分流进 油炸薯条酰胺 L0D:4gkg55、27: Schieberle 30mx0.32mm. 样2L 内标（未标明） (2003) 0.25m DB-WAX手细管 薯类袖炸无 无 柱，30m×025 GC-MS/MS LOD::01gL丙烯酰mk2、Lee 非分流进线性范围 食品 55 (2007) mm,0.25μm 样1L 1-1000Hg/1 DB-17MS毛细管 0D:0.2 GC-MS BC,丙溴化 丙烯酰肢mk152、Mizukami ne/ml 绿茶 非分流进 150: etal 烯酰肢0℃、1h30m×0.25mm, 线性范用 0.5m 样1L 16120ngmL内标k15.153206 LOD:0.2 63种热加Dr丙烯溴化 CP-Si24CB柱 丙烯酰胶mk152、 30mx0.25mm GC-MS / 150. 工食品 酰胺 4℃、1h 0.25m 线性范闲 20-1000ng/mL 内标m15、153203) BP21毛细管杜， GC-MS 油炸薯条无 无 30mx0.25mm, 非分流进 (未标明) 丙烯酰胶mh71、Pedersen& 0.254m 55、27 样2.5L (2003) Carbowax柱， GC-MS LOD:5gkg丙烯酰我mk169、 各种食品 C,丙‘溴化 烯酰胺0C、1h 15m×0.25mm, 非分流进线性范闲 Robarge et 167: 0.25wm al(2003) 样1L 5-1000gkg 内标m172、170 0
浙江大学博士学位论文 第一章文献综述与立题依据 表1．2基于GC．MS方法的食品中丙烯酰胺的定量分析工作 Table 1-2 GC．．MS．．based method for quantitative analysis of acrylamide in foods 样品基质内标 衍生化． 色谱柱规格 方法与 进样 器 质谱参数 参考文献 嚣臻星慧触烈焉淼：G糊C-M流S进啪崩眺耐150,瞧1 08删,1 油炸薯条烯酰胺 4 0652、：A∞hn吻et以 oC、过夜：0m．25Ⅳxon 25姗’ 样非-撇I ttL迸 LoD’25蚓她内撇122、12。(2002) 谷物食品慧烯无 面包片D3一丙烯一 油炸薯条酰胺 儿 荸誊油炸无 无 食品 ～ ～ 绿茶 DB—WAX毛细管 GC—MS／MS 丙烯酰胺m／z 89、Hoenicke 柱。30 m×0．25 非分流进LOD：30．g／kg 72、55： et a1． mlrl，0．25 Inn 样1止 内标舭92、75(2004) 游离脂肪酸聚酯熔 融石英毛细管柱， 30m x 0．32mm， 0．25 Inn DB．WAX毛细管 柱．30 m×0．25 mm，0．25 Hm GC．MS 丙烯酰胺m／z 71、 Jezussek& 非分流进LOD：4 r,g／kg 55、27： Schieberle 样2 laL 内标(未标明) (2003) 晕毫竺翼s黑?：。竺rtg／L丙烯酰胺，心72、 Lee Pf以 苎黼进线性范目 样1 ttL l-1000II虮 掌～“.”～～’赫“ ，. DB·17 Ms毛细管 GC．MS LoD：O·2 丙烯酰胺，砘152、M i13 .C3-丙置h巍0．15盏，鬻n篙g／m氛L L 1.50：螂、：i以zukam30m 0．25 mm 5 153(2006)0 1 烯酰胺 O。C、1 h x ， 样l此 线性范围 -um 内标，以155、 ： 。 1．6一1280 n∥mL。 63銎梦宝：霎烯溴垡．3C。P-mS‘：麓兰∞Ms 工食品 酰胺 4。c、1h三葛1孟.“’ 油炸薯条无 BP 21毛细管柱， 无 30 m×0．25 mm． O．25 Um LoD：O·2 丙烯酰胺删2 152、 黧嘉围 线性范围 ，兰内杀施155、】53(2003’ 菡写以 20．1000 n咖L内标施155、】53 GC．MS 非分流进 (朱标明) 样2．5此 丙烯酞胺，胞7 1、P。eldsse。rnsen& 55、27(2003) .‰13C3_股]庆：j。愁仆C茹arbowax25柱mm，．,G鬻C-MS L鬻OD：5‰IJg／gkg黧=1 6m9,鬻
渐江大学博士学位论文 第一章文献综述与立题依据 (续表) 样品基质内标 衍生化色谱柱规格 方法与 LOD/LOQ 进样 质谱参数 参考文献 和线性范用 DB1301毛细管GC-MS 丙烯酰按m饣152、 C.丙溴化 线性范用 Soares et 咖啡 150、108、106: 烯酰胺 0℃ 柱，30m×0.25非分流进 0-300gL al(2006) mm,0.25m 样1 内标mk155、153 N,N二甲 澳化 HP PAS17OI柱，GCMS L0D:5gkg丙烯酰胺mh152、 油炸食品基甲酰 25m×0.32mm, 4℃、18h 非分流进 线性范围 150、108、106: 胺 0.25um 样2L 5-500 ug/kg 内标mk180、178a(200) Supelcowax柱. GC-MS LOD:2 ug/kg Tateo 线性范闺 丙烯酰胺m271、 焙烤食品无 无 30m×0.25mm,非分流进 Bononi 100-4000 55、27: 0.20um 样1L ng/mL (2003) 50%基-.50% 丙烯酰胺mz151、 烤和士”C丙 溴化 甲基硅氧烷毛细 线性范围 149、135、133 Wenzl et 豆制品 GC-MS 烯酰肢 4C、1h al.(2006) 管柱 20-90004gkg 内标m:154、152 LC-MSMS方法在采用MRM模式时具有高度的选择性。在该模式下，样品中的 丙烯酰胺从液相色谱系统进入离子源，它的母离子[CH,-CHCONH广(m饣72)根据 事先设置的参数通过第一级质谱，而其它质量数被截留：紧接着，该母离子通过离 子通道进入碰撞池，根据碰撞能量的大小发生碰撞诱导裂解行为：经过碰撩后内烯 酰胺的特征性碎片离子[CH,-CHC-O(mk55)、[CH,-CHC=NH(mk54)、 NHC-O(m244)和[CH,CH(mk27)通过第二级质谱，进而被监测，而其它 质量数被截留。同时，一些同分异构体可以通过第一级质谱，但由于其碎片离子与 丙烯酰胺的碎片离子明显不同，因此也在第二级质谱被截留。采用LC-MSMS方法 在MRM模式下的检测流程如图1-3所示。在定量分析时，根据相对丰度的响应值， 通常选择跃迁模式72>55作为丙烯酰胺的定量离子，选择跃迁模式75>58作为1℃ 内烯酰胺和D,-丙烯酰胺的定量离子，选择73>56作为P℃-丙烯酰胺的定量离子，其 它离子作为辅助定性离子(Wenzl et al.,2003)
浙江大学博七学位论文 (续表) LC．MS／MS方法在采用MRM模式时具有高度的选择性。在该模式下，样品中的 丙烯酰胺从液相色谱系统进入离子源，它的母离子[CH2=CHCONH2】+(m／z 72)根据 事先设置的参数通过第一级质谱，而其它质量数被截留；紧接着，该母离子通过离 子通道进入碰撞池，根据碰撞能量的大小发生碰撞诱导裂解行为；经过碰撞后丙烯 酰胺的特征性碎片离子[CH2=CHC=O]+(m／z 55)、[CH2=CHC三NH】+(m／z 54)、 【NH2c=o】+(m／z 44)和[CH2=cH】+(m／z 27)通过第二级质谱，进而被监测，而其它 质量数被截留。同时，一些同分异构体可以通过第一级质谱，但由于其碎片离子与 丙烯酰胺的碎片离子明显不同，因此也在第二级质谱被截留。采用LC．MS／MS方法 在MRM模式下的检测流程如图1．3所示。在定量分析时，根据相对丰度的响应值， 通常选择跃迁模式72>55作为丙烯酰胺的定量离子，选择跃迁模式75>58作为13C3一 丙烯酰胺和D3．丙烯酰胺的定量离子，选择73>56作为13C1．丙烯酰胺的定量离子，其 它离子作为辅助定性离子(Wenzl et a1．，2003)
渐江大学博士学位论文 第一章文献综述与立题依据 Pre-tier Post teter 图1-3采用LC-MSMS方法在MRM模式下对丙烯酰胺的检测程序 Figure 1-3 The whole detection procedure of acrylamide by LC-MS/MS using the MRMmode 尽管串联质谱法与其它色谱分析方法相比具有更高的选择性，但是干扰仍然存在 (Becalski et al.,2003),尤其是对一些复杂食品基质（如咖啡）中的丙烯酰胺进行检 测时，杂质会干扰丙烯酰肢及其内标的碰撞诱导裂解(Andrzejewski etal.,2004).可 考虑两种解决方案：第一，在样品预处理时将水相中的丙烯酰胺用乙酸乙酯进行液， 液萃取，更为彻底地除去试样中的糖、盐、淀粉和氨基酸等杂质，然后将乙酸乙酯 相浓缩后进样(Sanders etal,2002):第二，优化SPE的条件，改变色谱柱的规格（如 将柱长从100mm加长至1S0mm),通过液相色谱将杂质峰与目标物峰分离(Becalski tal,20O3)。基于LC-MSMS方法的丙烯酰胺定量分析研究进展与相关文献报道汇 总于表1-3，主要列出了内标、色谱柱、液相参数、质谱参数以及方法学论证参数等。 1.2.5其它分析检测方法 除了以上两种常用的分析检测方法以外，近年来的研究建立了丙烯酰胺的其它定 量分析方法，包括HPLC法(G6 kmen et al,.200S,Paleologos&Kontominas,2005)、 GC法(US EPA,.1996;Pedersen&Olsson,.2003)、脉冲电化学检测法(Casella et al,. 2006)、毛细管电泳法(Bermudo etal.,2006b,c、毛细管电泳-串联质谱法(Bermudo etal,2007)、气相/液相色谱.飞行时间质谱联用法(Dunovsk etal.,2006,W%,2007)、 近红外光谱法(Segtnan et al,2006)、脉冲极谱法(Niaz et al.,2008)、酶联免疫法
浙Ⅱ^学博±学位论i 第章文献综述1j立愿依槲 图l-3采用LC—MS／MS方法在MRM模式下对丙烯酰胺的检测程序 F姆矾1-3 1kwllokdeb嘶衄poc础孵of蚓ybmi出byLC-MS／MSuslllg恤MRMmode 尽管串联质谱法与其它色谱分析方法相比具有更高的选择性，但是干扰仍然存在 (BecalskietaL，2003)，尤其是对一些复杂食品基质(如咖啡)中的丙烯酰胺进行检 测时，杂质会干扰丙烯酰胺及其内标的碰撞诱导裂解(And仃ejewski elaL．2004)。可 考虑两种解决方案：第一，在样品预处理时将水相中的丙烯酰胺用乙酸己酯进行液． 液萃取，更为彻底地除去试样中的糖、盐、淀粉和氨基酸等杂质，然后将匕酸匕酯 柏浓缩后进样(Sanders etaL，2002)；第二，优化SPE的条件，改变色谱柱的规格(如 将柱长从100mm加长至150mm)，通过液相色谱将杂质峰哼目标物峰分离(Becalski et aL，2003)。基于LC-MS／MS方法的丙烯酰胺定量分析研究进展与相关文献报道汇 总于表1-3，主蔓列出了内标、色谱柱、液相参数、质谱参数以及方法学论证参数等。 2 5其它分析检测方法 除了以上两种常用的分析检测方法以外．近年来的研究建立了丙烯酰胺的其它定 量分析方法．包括HPLC法(G6kmen“aL．2005；Paleologos＆Kontominas．2005)、 Gc法(US EPA，1996；Pedersen＆Olsson，2003)、脉冲电化学检测法(Casella“aL． 2006)、毛细管电泳法(Bermudo e／a／．，2006b，c)、毛细管电泳．串联质谱法(Bermudo elaL，2007)、气相／液相色谱．飞行时间质谱联用法(Dunovska甜aL．2006；Wu，2007)、 近红外光谱法(Segman et aL，2006)、脉冲极谱法(Nmz et aL，2008)、酶联免疫法 12
浙江大学博士学位论文 第一章文献综述与立题依据 (Preston et al,2008). 表1-3基于LC-MSMS方法的食品中丙烯酰胺的定量分析工作 Table 1-3 LC-MS/MS-based method for quantitative analysis of acrylamide in foods 样品基质内标 色谱柱规格 液相参数 质谱参数 LOD/LOQ 和线性范围 参考文献 咖啡、可℃丙 Hypercarb柱， 水 离子阱申联质谱 100: Aguas et 可 放电电流7HA 12.3 ug/kg 烯酰胺 150mm×2.1mm,流速0.35 mL/min 5 um 0-2500gkg al.(2006) 进样20L 汽化室温度250℃ μ-Bondapak C柱，Q.1%醋酸 毛细管电压4kV LOD: 巴西特色D丙烯 锥孔电压20V 10 ug/kg Arisseto er 食品 酰胺 300mmx3.9mm,流速0.6 mL/min 源温120℃ 60-10000 10 um 进样100L aL(2007) 脱溶剂温度300℃ ng/mL. 各类食品 D丙烯 Semi-micro ODS-80水 离子阱串联质谱 LOD: Bermudo TS柱，150mm×2.1流速0.3 mL/min 放电电流5A et al 酰胺 45 ng/g mm,5 um 进样10 汽化丝温度250C 0.02-3μg/mL(2006a) Genesis C柱 水 去株电压34V 水 Dr丙烯 流速0.2m/min 入山电乐4V L00: Chu 酰胺 150mmx×2.1mm, 0.06 ng/mL 4 um 进样20L 探针温度450C 2007) 乙腈0.05%甲酸=199离子阱串联质谱 焙烤食品 D丙烯 Hypercarb柱： L00: Claus et 100 mm x 2.1 mm 流速02mL/min 毛细管电压2.238kV102ngmL 酰胺 进样40L 脱溶剂温度365℃ 12-36gL al.(2005) 巧克力 D丙烯 DE413L聚甲基丙 甲醇0.01%甲酸-=3070毛细管电乐31k 方法检测限：Delatour 粉、咖啡、 锥孔电乐22V 酰胺 烯酸酯柱， 流速0.6mlmn 9.2 ug/kg et al. 可可 150mm×6mm 进样60uL 源温100℃ 10-2500μg/kg(2004) 毛管电压3.6kV 芬兰特色Dr丙烯 Hypercarb柱， 甲醇/水=5/95 锥孔电压30V LOD: Eerola er 100mm×2.1mm,流速02 mL/min 食品 酰胺 源流120℃ 68μgkg al.(2007) 5 um 进样10L 脱游剂温度300℃ 75-7500μgkg 察类谷D,丙婚ondapak C反相0.1%酸 毛细管电压37kV 锥孔电压20V LOD: 物食品酰胶 柱，300mm×3.9 流速0.6mL/min 源温120℃ 10μgkg a.(2006) mm,10 gm 进样100L 脱溶剂温度300℃ 15-600ngmL 13
浙江大学博士学位论文 第一章文献综述与立题依据 (Preston e／a／．，2008)等。 表l-3基于LC．MS／MS方法的食品中丙烯酰胺的定量分析工作 Table 1-3 LC·-MS／MS—-based method for quantitative analysis of acrylamide in foods 13
浙江大学博士学位论文 第一章文献综述与立题依据 (续表) LOD/LOO 样品基质内标色谱柱规格 液相参数 质谱参数 和线性范围 参考文献 速溶咖啡 D丙烯Hypercarb, 0.1%甲酸或0.5%甲醇 毛细管电压3kW 锥孔电乐31V 50 mm x 2.1 mm, 流速0.2 mL/min LOD:2 ug/L Granby& Fagt 酰胺 源温120℃ 2-30ue/L 5 um 进样10L (2004) 脱溶剂温度400℃ Mightysil RP-1GP 薯片、法Cr丙 甲醇/水=20/80 毛细管电压3,5kWL0D:1gmL 柱， 式炸薯条烯酰胺100mm×2mm, 流速0.2 mL/min 碰撞电压100 LOQ,5mg/mL Imoue al.(2003) 5 um 进样20L 脱溶剂温度350℃5-1000ng/mL 各类加工”℃，丙 Aqua C柱. 甲醇/0.2%醋酸-1/99 毛细管电压4.2kVL0Q: 流法0.2 mL/min 源温120℃ 食品 烯酷肢 250mm×2mm 2 ug/kg Kim et al. 进样20L 浴利度240℃001：50gmL207 薯类油炸 乙睛/5mmoL甲酸 毛细管电压2.5kV Dg丙烯 Alltima C柱， =5/95 锥孔电乐31V 品、面 LOQ:30 ug/kg Konings er 150mm×3.2mm, 愈 酰胺 流速0.3 mL/min 源混70℃ 5 um 50-2000 g/kg al(2003) 进样5 脱溶剂温度400℃ Atlantis dC 毛细管电压35kW D丙烯 中醇/水梯度洗脱 LOD: 100mm×2.1mm, 派温120℃ Marin er 酰肢 流速0.2 mL/min 脱溶剂混度300℃ 0.1g/L al.(2006 5 um 水 放电电流3A LOQ: 150mm×2.1mm,流速0.1mL/min 毛细管温度250℃1gkg Pardo et 烯酰胺 5 um 进样10山 ￥汽化室温度250℃0.1-2000ngmL1(2007 DE-613聚甲基丙烯甲醇/0.01%甲酸=40160 毛细管电压3,1kV L00 Riediker C-丙 推孔.电压22V 谷物早餐 烯酰胺 酸酯柱， 表速0.75 mL/min 源温100℃ 45-70gk 150mm×6mm 进样0L (2003) 脱溶剂温度350℃ 0-500ng/m 甲醇0.1%甲酸 毛细管电压4.IkV BC-丙 Synergi Hydro RP柱 0.5/99.5 锥孔电压20V 各种食品 LOD:10 u/kg Roache 烯酰胺 250mm×2mm, 流速0.2 mL/min 源温120℃ 8-3600ngmL ad.(2003 4μm 进样20L 脱游剂温度250℃ 薯类油炸甲基丙 Hypercarb 乙脂0.1%甲酸=298 毛组管电压4.5kV LOD:1 ng/mL Taubert er 食品 烯酰 m×2.lmm 流速0.3 mL/min 脱剂温度300℃ 1-10000 ad.2004) 5 Hm 进样10L ng/ml
浙江大学博士学位论文 第一章文献综述与立题依据 (续表)