7. 维生素的测定 7.1 维生素A的测定—— 比色法 7.2 维生素C（抗坏血酸）的测定
7. 维生素的测定 7.1 维生素A的测定—— 比色法 7.2 维生素C（抗坏血酸）的测定
7.1维生素A的测定 （1）原理 在氯仿溶液中，维生素A与三氯化锑 可相互作用，生成蓝色可溶性配合物，其 颜色深浅与溶液中所含维生素A的含量成 正比。该物质在620nm波长处有最大吸收 峰，其吸光度与维生素A的含量在一定的 范围内成正比，故可比色测定
7.1维生素A的测定 （1）原理 在氯仿溶液中，维生素A与三氯化锑 可相互作用，生成蓝色可溶性配合物，其 颜色深浅与溶液中所含维生素A的含量成 正比。该物质在620nm波长处有最大吸收 峰，其吸光度与维生素A的含量在一定的 范围内成正比，故可比色测定
（2）试剂 ① 无水硫酸钠 不吸附维生素A ② 乙酸酐 ③ 无水乙醚 不含过氧化物 ④ 无水乙醇 不含醛类物质 ⑤ 三氯甲烷 不含分解物 ⑥ 250g／L三氯化锑一三氯甲烷溶液 ⑦ 1：1氢氧化钾溶液 ⑧ 0.5mol／L氢氧化钾溶液 ⑨ 维生素A标准溶液 ⑩ 酚酞指示剂
（2）试剂 ① 无水硫酸钠 不吸附维生素A ② 乙酸酐 ③ 无水乙醚 不含过氧化物 ④ 无水乙醇 不含醛类物质 ⑤ 三氯甲烷 不含分解物 ⑥ 250g／L三氯化锑一三氯甲烷溶液 ⑦ 1：1氢氧化钾溶液 ⑧ 0.5mol／L氢氧化钾溶液 ⑨ 维生素A标准溶液 ⑩ 酚酞指示剂
（3）操作步骤 ① 样品处理 ② 标准曲线的绘制 ③ 样品测定 （4）结果计算
（3）操作步骤 ① 样品处理 ② 标准曲线的绘制 ③ 样品测定 （4）结果计算
（5）说明及讨论 ① 维生素A极易被光破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或使用棕 色玻璃仪器。 ② 乙醚为溶剂的萃取体系，易发生乳化现象。在提取、洗涤操作中， 不要用力过猛，若发生乳化，可加几滴乙醇破乳。 ③ 所用氯仿中不应含有水分，因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比 色测定。故在每毫升氯仿中应加入乙酸酐1滴，以保证脱水。另外， 由于三氯化锑遇水生成白色沉淀，因此用过的仪器要用稀盐酸浸泡 后再清洗。 ④ 由于三氯化锑与维生素A所产生的蓝色物质很不稳定，通常生成6S 后便开始比色，因此要求反应在比色管中进行，产生蓝色后立即读 取吸光度。 ⑤ 如果样品中含β-胡萝卜素（如奶粉、禽蛋等食品）干扰测定，可将 浓缩蒸干的样品用正己烷溶解，以氧化铝为吸附剂，丙酮、乙烷混 合液为洗脱剂进行柱层析。 ⑥ 比色法除用三氯化锑做显色剂外，还可用三氟乙酸、三氯乙酸做显 色剂。其中三氟乙酸没有遇水发生沉淀而使溶液混浊的缺点
（5）说明及讨论 ① 维生素A极易被光破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或使用棕 色玻璃仪器。 ② 乙醚为溶剂的萃取体系，易发生乳化现象。在提取、洗涤操作中， 不要用力过猛，若发生乳化，可加几滴乙醇破乳。 ③ 所用氯仿中不应含有水分，因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比 色测定。故在每毫升氯仿中应加入乙酸酐1滴，以保证脱水。另外， 由于三氯化锑遇水生成白色沉淀，因此用过的仪器要用稀盐酸浸泡 后再清洗。 ④ 由于三氯化锑与维生素A所产生的蓝色物质很不稳定，通常生成6S 后便开始比色，因此要求反应在比色管中进行，产生蓝色后立即读 取吸光度。 ⑤ 如果样品中含β-胡萝卜素（如奶粉、禽蛋等食品）干扰测定，可将 浓缩蒸干的样品用正己烷溶解，以氧化铝为吸附剂，丙酮、乙烷混 合液为洗脱剂进行柱层析。 ⑥ 比色法除用三氯化锑做显色剂外，还可用三氟乙酸、三氯乙酸做显 色剂。其中三氟乙酸没有遇水发生沉淀而使溶液混浊的缺点