(四)蛋白质的紫外吸收 大部分蛋白质均含有带共轭双键的 Tyr和Trp。这两种AA在280nm附近有 特征性吸收峰。在此波长范围，Pr的 OD2与其浓度成正比。利用这个性质， 可以对蛋白质进行定量测定。 蛋白质浓度mgml=1.45A280-0.74A260
大部分蛋白质均含有带共轭双键的 Tyr和Trp。这两种AA在280nm 附近有 特征性吸收峰。在此波长范围，Pr的 OD280与其浓度成正比。利用这个性质， 可以对蛋白质进行定量测定。 （四）蛋白质的紫外吸收 蛋白质浓度mg/ml＝1.45A280-0.74A260
五)、蛋白质的呈色反应 反应 试剂 颜色 反应基团 有此反应的Pr及AA 双缩脲反应 NaOH,稀CuSO4 紫或粉 2个以上肽键 所有蛋白质 Millon反应 Millon,硝酸， 亚硝酸红色 酚基 Tyr 黄色反应 HNO及NH3 黄、橘黄 苯基 Phe,Tyr 乙醛酸反应 乙醛酸HSO4 紫红 吲哚 Trp 坂口反应 次氯酸钠，萘酚 红色 胍基 Arg Folin酚试剂反应CuSO,磷钨酸钼酸 兰色 酚基 Tyr 茚三酮反应 茚三酮 紫兰色游离氨、羧基 Pro和羟Pro呈黄色
反应 试剂 颜色 反应基团 有此反应的Pr及AA 双缩脲反应 NaOH,稀CuSO4 紫或粉 2个以上肽键 所有蛋白质 Millon反应 Millon,硝酸，亚硝酸 红色 酚基 Tyr 黄色反应 HNO3及NH3 黄、橘黄 苯基 Phe,Tyr 乙醛酸反应 乙醛酸H2SO4 紫红 吲哚 Trp 坂口反应 次氯酸钠,萘酚 红色 胍基 Arg Folin酚试剂反应 CuSO4磷钨酸-钼酸 兰色 酚基 Tyr 茚三酮反应 茚三酮 紫兰色 游离氨、羧基 Pro和羟Pro呈黄色 （五）、蛋白质的呈色反应
二、蛋白质分离和纯化 研究P的结构、性质和功能，首先需要 得到纯的蛋白质样品。 1.Pr来源：微生物、动物或植物细胞； 2.随时测定Pr话性并检测Pr含量； 3.分离和纯化过程须在温和的条件下进行
二、蛋白质分离和纯化 研究Pr的结构、性质和功能，首先需要 得到纯的蛋白质样品。 1. Pr来源：微生物、动物或植物细胞； 2.随时测定Pr活性并检测Pr含量; 3.分离和纯化过程须在温和的条件下进行
沉淀法 盐析法 有机溶剂沉淀法 离子交换层析 吸附层析 分离方法 层析法 凝胶过滤（分子筛） 电泳法 亲和层析.。 电学法 等电聚焦 超速离心法 层析法：凝胶过滤；高效液相色谱法 电泳法：PAGE、梯度凝胶电泳、等电聚焦电泳等 纯度、MW 免疫化学法：专一的沉淀线 和pI测定 SDS PAGE电泳法：测定亚基数 超速离心：成分均一 其它：如，结晶法
分离方法 沉淀法 盐析法 有机溶剂沉淀法 层析法 离子交换层析 吸附层析 凝胶过滤（分子筛） 亲和层析.。 电学法 电泳法 等电聚焦 超速离心法 纯度、Mw 和pI测定 层析法：凝胶过滤;高效液相色谱法 电泳法：PAGE、梯度凝胶电泳、等电聚焦电泳等 免疫化学法：专一的沉淀线 SDS PAGE电泳法：测定亚基数 超速离心：成分均一 其它：如, 结晶法
(一 盐祈法 (Salting out) 定义：加入大量中性盐以破坏Pǐ的稳定因素并 使从溶液中沉淀析出的现象。 原理：破坏Pr两个稳定因素：水化膜和电荷层 中性盐：(H4)2S04;Na2S04;NaC1等。 半饱和硫酸铵沉淀球Pr 饱和硫酸绥沉淀请Pr 叫分戟整折法 优点：Pr不变性，常用
定义：加入大量中性盐以破坏Pr的稳定因素并 使从溶液中沉淀析出的现象。 原理:破坏Pr两个稳定因素：水化膜和电荷层 中性盐：(NH4)2SO4；Na2SO4；NaCl等。 半饱和硫酸铵沉淀球Pr 饱和硫酸铵沉淀清Pr 优点：Pr不变性，常用。 （一）盐析法（Salting out) 叫分段盐析法