层析分离。3)凝胶层析(分子筛层析/凝胶过滤,分子排阻层析):以各种多孔凝胶为固定相,利用溶液中各组分的分子量不同而进行分离的技术
3)凝胶层析 (分子筛层析/凝胶过滤,分子排阻层析):以各种多孔凝胶为固定相, 利用溶液中各组分的分子量不同而进行分离的技术。 层析分离
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1.基本原理大分子物质不能进入凝胶孔内,在凝胶颗粒之间的空隙向下移动,并最先被洗脱出来小分子物质可自由出入凝胶孔,流程长而后小分子能进入凝胶过滤层析示意图大分子不能进入
1. 基本原理 大分子物质不能进入凝胶孔内,在凝胶颗 粒之间的空隙向下移动,并最先被洗脱出来; 小分子物质可自由出入凝胶孔,流程长而后 流出层析柱。按分子量有大→小顺序流出层析柱
小分子蛋白质大分子蛋白质葡萄糖凝胶
分配系数Ka:Ve-VoKa=ViK,表示分子在流动相与固定相中的分配情况,可以表示分子排阻情况。Vo一一外体积,层析柱内凝胶颗粒之间空隙的体积(ml)Vi——内体积,层析柱内凝胶颗粒内部各微孔体积的总和(ml)Ve一一洗脱体积,某一个组分从加进层析柱到流出液中该组分出现最高峰时的洗脱液体积(ml)
分配系数Ka: Ve-Vo Ka=———— Vi Ka 表示分子在流动相与固定相中的分配情况,可以 表示分子排阻情况。 Vo——外体积,层析柱内凝胶颗粒之间空隙的体积 (ml) Vi——内体积,层析柱内凝胶颗粒内部各微孔体积的 总和(ml) Ve——洗脱体积,某一个组分从加进层析柱到流出 液中该组分出现最高峰时的洗脱液体积(ml)