Total RNA的提取 ● 通常使用的试剂是Unizol,.另外还有Trizol。 ·如果用以上方法提的效果不好，可以选择其他针对 性较强的方法。建议建立一个完整的试剂库即选择 配制若干种典型的试剂，比如针对含多糖或蛋白等 的试剂。 。工具及耗材的准备：研钵、钥匙、玻璃器皿等要 180℃处理6-8h;离心管、枪头（进口的可直接灭 菌烘千后使用)要用1/5000的DEPC水处理（静置 过夜，之后灭菌烘干)；在试剂的配制的过程中要 防止RNA酶的污染。 2025/5/15
2025/5/15 16 Total RNA的提取 ⚫ 通常使用的试剂是Unizol，另外还有Trizol。 ⚫ 如果用以上方法提的效果不好，可以选择其他针对 性较强的方法。建议建立一个完整的试剂库即选择 配制若干种典型的试剂，比如针对含多糖或蛋白等 的试剂。 ⚫ 工具及耗材的准备：研钵、钥匙、玻璃器皿等要 180℃ 处理6-8h；离心管、枪头（进口的可直接灭 菌烘干后使用）要用1/5000的DEPC 水处理（静置 过夜，之后灭菌烘干）；在试剂的配制的过程中要 防止RNA 酶的污染
Total RNA举例 海洋动物 高等陆生植物 原生动物 →28S →28S →18S →18S →28S4.7kb →18S1.9kb 5S 5S 5S 28S4.7kb 18S 1.9kb 2025/5/15
2025/5/15 17 Total RNA举例 海洋动物 高等陆生植物 原生动物 → → → → → → → 5S 18S 28S 28S 28S 4.7kb 18S 18S 1.9kb → 5S → 5S 28S 4.7kb 18S 1.9kb
mRNA分离 ●Kit and protocol Collect Oligotex Oligotex mRNA:Oligotex mRNA Direct mRNA complexes Procedure Procedure 中 Total RNA Cells and tissues Wash mRNA:Oligotex complexes Lyse, homogenize and dilute Elute mRNA from Oligotex Hybridize mRNA mRNA to Oligotex 中 2025/ Ready-to-use mRNA 18
2025/5/15 18 mRNA 分离 ⚫ Kit and protocol
●mRNA图示： DL2000 mRNA DL2000 mRNA mRNA通常是一条 弥散条带，但也有特 殊情况：有一些是比 较明显的几条带，说 明mRNA比较集中。 2025/5/15 19
2025/5/15 19 mRNA通常是一条 弥散条带，但也有特 殊情况：有一些是比 较明显的几条带，说 明mRNA 比较集中。 ⚫ mRNA图示： DL2000 mRNA DL2000 mRNA
质粒DNA分离常用试剂 及工作原理 ·以碱裂解法为例 ●Solution I 50mM glucose 25mM Tris-HCI 10mM EDTA 悬浮菌体沉淀 2025/5/15 20
2025/5/15 20 质粒DNA分离常用试剂 及工作原理 ⚫ 以碱裂解法为例 ⚫ Solution I 50mM glucose 25mM Tris-HCl 10mM EDTA 悬浮菌体沉淀