Solution Il 0.2N NaOH 1%SDS 强碱+阴离子去污剂可以破环细胞壁，变性染色体DNA和蛋 白，释放质粒DNA到上清中； Solution Ill 5M KAc HAC 中和溶液，变性的质粒DNA复性，以钾离子替代钠离子， 使变性的染色体DNA和蛋白及SDS在离心力下沉淀， 2025/5/15 3
2025/5/15 21 ⚫ Solution II 0.2N NaOH 1% SDS 强碱+阴离子去污剂可以破环细胞壁，变性染色体DNA和蛋 白，释放质粒DNA到上清中； ⚫ Solution III 5M KAc HAc 中和溶液，变性的质粒DNA复性，以钾离子替代钠离子， 使变性的染色体DNA和蛋白及SDS在离心力下沉淀
二、核酸的凝胶电泳 电泳：是指带电颗粒在电场作用下发生迁移的过程。 + ++ 目前，核酸的凝胶电泳技术很多，如琼脂糖凝胶电泳、聚 丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电泳、毛细管电泳等。 2025/5/15
2025/5/15 22 二、核酸的凝胶电泳 电泳：是指带电颗粒在电场作用下发生迁移的过程。 目前，核酸的凝胶电泳技术很多，如琼脂糖凝胶电泳、聚 丙烯酰胺凝胶电泳、脉冲电泳、毛细管电泳等
(一)琼脂糖凝胶电泳(agarose ge]electrophoresis): ● 琼脂糖凝胶电泳的介质为琼脂糖凝胶，主要用于核酸分子 量大小测定及核酸分子的分离纯化。也可分离大蛋白或蛋 白复合物。 ·琼脂糖是从海藻中分离的多糖，由D-半乳糖和L-半乳糖通 过糖苷键交替构成的线性多聚物，呈白色粉末状。制成胶 体后，胶内形成网格状空隙，可使核酸分子在其间穿行。 2025/5/15 3
2025/5/15 23 （一）琼脂糖凝胶电泳（agarose gel electrophoresis）： ⚫ 琼脂糖凝胶电泳的介质为琼脂糖凝胶，主要用于核酸分子 量大小测定及核酸分子的分离纯化。也可分离大蛋白或蛋 白复合物。 ⚫ 琼脂糖是从海藻中分离的多糖，由D-半乳糖和L-半乳糖通 过糖苷键交替构成的线性多聚物，呈白色粉末状。制成胶 体后，胶内形成网格状空隙，可使核酸分子在其间穿行
Agarose CH2OH CH2 CH2OH 0 OH 0 Agarose OH 2025/5/15 24
2025/5/15 24 Agarose
1.原理： 生理条件下，核酸分子的磷酸基团以带负电荷的离 子状态存在。当核酸分子被放置在电场中的琼脂糖介质内 时，它们会沿着胶内的网格状孔隙向正极移动。在一定的 电场强度下，DNA分子的迁移速率取决于核酸分子本身 的大小和分子构型。分子量小的DNA分子比分子量大的 DNA分子迁移速率快，迁移距离远。分子量相同而构象 不同的DNA分子，具有紧密构象的DNA分子迁移率要比 同等分子量的松散型的开环或线性DNA分子要快些，这 样，核酸分子混合物依据分子大小、构型的差异被分离开。 2025/5/15
2025/5/15 25 1. 原理： 生理条件下，核酸分子的磷酸基团以带负电荷的离 子状态存在。当核酸分子被放置在电场中的琼脂糖介质内 时，它们会沿着胶内的网格状孔隙向正极移动。在一定的 电场强度下，DNA分子的迁移速率取决于核酸分子本身 的大小和分子构型。分子量小的DNA分子比分子量大的 DNA分子迁移速率快，迁移距离远。分子量相同而构象 不同的DNA分子，具有紧密构象的DNA分子迁移率要比 同等分子量的松散型的开环或线性DNA分子要快些，这 样，核酸分子混合物依据分子大小、构型的差异被分离开