一、 核酸的分离技术 ●基因组DNA的分离： ●RNA的分离： 。质粒DNA的分离： 2025/5/15
2025/5/15 11 一、核酸的分离技术 ⚫ 基因组DNA的分离： ⚫ RNA 的分离： ⚫ 质粒DNA的分离：
基因组DNA分离常用试剂 及工作原理 Tris-HCI缓冲液：维持生理pH,不易与金属离 子发生沉淀（提取和保存DNA时常用）； EDTA:螯合二价金属离子，抑制DNA酶活性； 2025/5/15
2025/5/15 12 基因组DNA分离常用试剂 及工作原理 Tris-HCl 缓冲液：维持生理pH， 不易与金属离 子发生沉淀（提取和保存DNA 时常用）； EDTA：螯合二价金属离子，抑制DNA酶活性；
苯酚(Phenol)：非极性分子，能与水有一定程度 的互溶，变性蛋白质；残留会导致酶等失活或活 性抑制。 以0.5MTis-HCl(pH8.0)平衡后使用 氯仿(Chloroform):非极性分子，与水不相溶， 变性蛋白质；将残留的苯酚带走。 异戊醇 (Isoamyl alcohol)):消除泡沫 SDS:阴离子去污剂，破坏膜结构和变性蛋白质 2025/5/15
2025/5/15 13 苯酚（Phenol）：非极性分子，能与水有一定程度 的互溶，变性蛋白质；残留会导致酶等失活或活 性抑制。 以0.5M Tris-HCl（ pH 8.0）平衡后使用 氯仿（Chloroform）：非极性分子，与水不相溶， 变性蛋白质；将残留的苯酚带走。 异戊醇（Isoamyl alcohol）：消除泡沫 SDS：阴离子去污剂，破坏膜结构和变性蛋白质
乙醇(Ethanol):不与核酸反应；溶液中DNA以 水合状态存在，当乙醇浓度超过67%时，乙醇夺 取DNA周围的水，使DNA失水而聚合沉淀下来； NaAc/NH4 Ac/NaCl:调节盐浓度(0.1-0.25M), 便于DNA沉淀； CTAB (Cetyltrimethylammonium bromide): 十六烷基三乙基溴化铵，阳离子去污剂，在低离 子强度下使核酸和酸性多糖沉淀；在高离子强度 下（大于0.7 M NaCl)与蛋白和中性多糖形成复 合物沉淀出来。多用于植物、细菌噬菌体、质粒 等的DNA提取。 2025/5/15
2025/5/15 14 乙醇（ Ethanol）：不与核酸反应；溶液中DNA以 水合状态存在，当乙醇浓度超过67%时，乙醇夺 取DNA周围的水，使DNA失水而聚合沉淀下来； NaAc/NH4Ac/NaCl：调节盐浓度（0.1-0.25M）， 便于DNA沉淀； CTAB（Cetyltrimethylammonium bromide）： 十六烷基三乙基溴化铵，阳离子去污剂，在低离 子强度下使核酸和酸性多糖沉淀；在高离子强度 下（大于0.7M NaCl）与蛋白和中性多糖形成复 合物沉淀出来。多用于植物、细菌噬菌体、质粒 等的DNA提取
CH3 CH3 N+ Br CH3 C16H33 FIGURE 6-4 The Structure of CTAB 2025/5/15 15
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