进而利用DNA芯片技术，除了上述两个探针外，再设计两 个探针，其中央碱基分别为C和「。这4个探针可原位合成或 预合成后显微打印在支持物上。杂交分析同上。如果扩增 产物与中央碱基为C或T的探针杂交，则可清楚地表明该缺 陷基因的新的突变类型为C→G或C→A。 A C 芯片设计 正常 C→T C→T C→G C→A 探针定位 (纯合子)（杂合子） 新突变 新突变 点突变检测荧光亮点模式
进而利用DNA芯片技术，除了上述两个探针外，再设计两 个探针，其中央碱基分别为C和T。这4个探针可原位合成或 预合成后显微打印在支持物上。杂交分析同上。如果扩增 产物与中央碱基为C或T的探针杂交，则可清楚地表明该缺 陷基因的新的突变类型为C→G或C→A。 A T C G 芯片设计 探针定位 （纯合子）（杂合子） 新突变 新突变 正常 C →T C →T C →G C →A 点突变检测荧光亮点模式
②诊断未知的突变 可采用PCR/SSCP/sequencing方法。通过PCR同时扩增待测基因和 野生型对照基因的DNA片段，将扩增的双链DNA变性成单链，用非变性 聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离。待测基因的单链DNA上单个碱基的改变 可导致构象的改变，其电泳迁移率也会发生改变。通过比较这两者的 迁移率，即可判断是否发生基因突变。在SSCP法检测到突变位点存在 的基础上，即可通过DA序列测定得知确切的突变。 DNA芯片技术用于大规模未知突变的筛查，则更显示出该技术的优 越性。筛查n个碱基长度序列的每个碱基的变异，需要4Xn个探针。如 在1.28cm的支持物上原位合成16000个寡核苷酸探针，通过一次杂交 即可快速确定4kb序列内所有的点突变及其部位
可采用PCR／SSCP／sequencing方法。通过PCR同时扩增待测基因和 野生型对照基因的DNA片段，将扩增的双链DNA变性成单链，用非变性 聚丙烯酰胺凝胶进行电泳分离。待测基因的单链DNA上单个碱基的改变 可导致构象的改变，其电泳迁移率也会发生改变。通过比较这两者的 迁移率，即可判断是否发生基因突变。在SSCP法检测到突变位点存在 的基础上，即可通过DNA序列测定得知确切的突变。 ②诊断未知的突变 DNA芯片技术用于大规模未知突变的筛查，则更显示出该技术的优 越性。筛查n个碱基长度序列的每个碱基的变异，需要4×n个探针。如 在1.28cm2的支持物上原位合成16000个寡核苷酸探针，通过一次杂交 即可快速确定4kb序列内所有的点突变及其部位
(2)少数核苷酸缺失或插入的诊断 可以采用检测点 突变的方法。 (3)大片段丢失或插入的诊断 利用DN缺失区域5'和3'端引物进行PCR,通过凝胶电泳观察扩增 DNA片段出现与否以及片段的大小，就可诊断出0.5~1.5 kbDNA片段 的中等程度的缺失。现又发展了多重PC技术，即用多对引物同时进 行PCR,对某一特定基因的不同DA区域进行缺失诊断。 引物1 引物3 致病基因 3' 引物4 引物2
利用DNA缺失区域5＇和3＇端引物进行PCR，通过凝胶电泳观察扩增 DNA片段出现与否以及片段的大小，就可诊断出0.5～1.5kbDNA片段 的中等程度的缺失。现又发展了多重PCR技术，即用多对引物同时进 行PCR，对某一特定基因的不同DNA区域进行缺失诊断。 （2）少数核苷酸缺失或插入的诊断 可以采用检测点 突变的方法。 （3）大片段丢失或插入的诊断 5′ 3′ 引物1 致病基因 引物2 引物3 引物4
引物1和2：可确定有无缺失及缺失片段的相对大小。引物3 和4：确定缺失部位。引物3和4的设计要通过研究来加以确 定。对于一些较长的基因，设计两端引物(1和2)进行扩增是 不合适的，PCR扩增2kb以上的片段比较困难。在这种情况 下可采用多重PCR的方法。 (4)基因重排（染色体易位）的诊断 利用PCR可以检测基因重排，其前提是已知重排基因和重排 位点的序列。可设计3条PCR引物进行2个PCR反应
引物1和2：可确定有无缺失及缺失片段的相对大小。引物3 和4：确定缺失部位。引物3和4的设计要通过研究来加以确 定。对于一些较长的基因，设计两端引物(1和2)进行扩增是 不合适的，PCR扩增2kb以上的片段比较困难。在这种情况 下可采用多重PCR的方法。 利用PCR可以检测基因重排，其前提是已知重排基因和重排 位点的序列。可设计3条PCR引物进行2个PCR反应。 （4）基因重排(染色体易位)的诊断
引物1引物2 3 引物3 引物1：正常位点的序列； 引物2：重排位点的序列； 引物3：基因内的序列。 引物(1+3)可扩增得到正常基因的PCR产物； 引物(2+3)可扩增得到重排基因的PCR产物。 也可单用引物(2+3)有无产物判断有无重排。但同时用(1+3)和(2+3) 进行PCR反应，互为阴性对照和阳性对照，结果更可靠
5′ 3′ 引物1 引物2 引物3 引物1：正常位点的序列； 引物2：重排位点的序列； 引物3：基因内的序列。 引物(1+3)可扩增得到正常基因的PCR产物； 引物(2+3)可扩增得到重排基因的PCR产物。 也可单用引物(2+3)有无产物判断有无重排。但同时用(1+3)和(2+3) 进行PCR反应，互为阴性对照和阳性对照，结果更可靠