第五章 核酸的序列测定 易发平 基础医学院生物化学与分子生物学教研室
核酸的序列测定 第五章 易发平 基础医学院生物化学与分子生物学教研室
DNA的测序是分子生物学研究中非常重要和关键的内 容。对DNA一级结构的研究，有助于探索基因结构与功 能、基因与疾病关系，进而推动生命科学研究获得质的 飞跃。测定基因组的全部核苷酸序列、阅读和分析全部 遗传信息，正是人类基因组计划(human genome project,.HGP)的最主要目标之一
DNA的测序是分子生物学研究中非常重要和关键的内 容。对DNA一级结构的研究，有助于探索基因结构与功 能、基因与疾病关系，进而推动生命科学研究获得质的 飞跃。测定基因组的全部核苷酸序列、阅读和分析全部 遗传信息 ，正 是 人 类基 因 组 计划 （ human genome project, HGP)的最主要目标之一
将DNA片段用荧光等分析仪，测出DNA序列碱基排 列顺序。 DNA序列测定方法： 1.Sangerl的双脱氧法：A/T/G/C四个反应。 ÷2.化学降解法：G反应；G+T反应；T+C反应和C反 应。 ÷3.自动测序法
将DNA片段用荧光等分析仪，测出DNA序列碱基排 列顺序。 DNA 序列测定方法： ❖ 1. Sanger的双脱氧法：A/T/G/C四个反应。 ❖ 2.化学降解法：G反应；G+T反应；T+C反应和C反 应。 ❖ 3.自动测序法
DNA测序的主要方法有两种，即双脱氧链终止法(Sanger 法、酶促法)和化学裂解法(Maxam-Gelbert法)。二者 均依赖于高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。 不管是酶促法还是化学法，都是分为4个反应体系进行测序 反应，寡核苷酸链分别终止于不同位置的A、T、G或C碱基。 4种反应体系的寡核苷酸链产物，进行变性聚丙烯酰胺凝胶 电泳，放射自显影后，读出待测DNA的连续序列
DNA 测序的主要方法有两种，即双脱氧链终止法（Sanger 法、酶促法）和化学裂解法（Maxam-Gelbert 法）。二者 均依赖于高分辨率的变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）。 不管是酶促法还是化学法，都是分为4个反应体系进行测序 反应，寡核苷酸链分别终止于不同位置的A、T、G或C碱基。 4种反应体系的寡核苷酸链产物，进行变性聚丙烯酰胺凝胶 电泳，放射自显影后，读出待测DNA的连续序列
70年代末 Walter Gilbert发明化学法 Frederick Sanger发明双脱氧终止法 手动测序，同位素标记 80年代中期 出现自动测序仪 荧光代替同位素，计算机图象识别 90年代中期 测序仪重大改进 集束化的毛细管电泳代替凝胶电泳