实验50胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇【原理】血清中总胆固醇(total cholesterol，TC)包括游离胆固醇(free cholesterol，FC)和胆固醇酯(cholesterolester，CE)两部分。血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇和游离脂肪酸（FFA)，胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆笛烯酮和过氧化氢H2O2在4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腺的红色醒类化合物，其颜色深浅与标本中TC含量成正比。【试剂】1．胆固醇液体酶试剂组成(具体含量见相关文献)GOOD's 缓冲液(pH6.7)50mmol/L胆固醇酯酶≥200U/L胆固醇氧化酶≥100U/L过氧化物酶≥3 000U/L4-AAP0.3mmol/L苯酚5mmol/L2.胆固醇标准溶液5.17mmol/L(200mg/dl）精确称取胆固醇200mg，用异丙醇配成100ml溶液，分装后，4℃保存，临用取出。也可用定值的参考血清作标准。【操作步骤】终点法检测TC按表9-3依次加样。表9-3酶法测定TC操作步骤加入物空白管标准管测定管血清(μl)1010/标准液或定值血清(μ)一10蒸馏水(μI)-10001 0001 000酶试剂(μl)混匀后，37℃保温5min，用分光光度计比色，于500m波长处以空白管调零，读出各管吸光度。【计算】测定管吸光度×胆固醇标准液浓度血清 TC (mmol/L)=标准管吸光度
6 实验 50 胆固醇氧化酶法测定血清总胆固醇 【原理】 血清中总胆固醇(total cholesterol，TC)包括游离胆固醇(free cholesterol，FC) 和胆固醇酯(cholesterol ester，CE)两部分。血清中胆固醇酯可被胆固醇酯酶水解为游离胆固醇 和游离脂肪酸(FFA)，胆固醇在胆固醇氧化酶的氧化作用下生成△4-胆甾烯酮和过氧化氢， H2O2 在 4-氨基安替比林和酚存在时，经过氧化物酶催化，反应生成苯醌亚胺非那腙的红色醌 类化合物，其颜色深浅与标本中 TC 含量成正比。 【试剂】 1．胆固醇液体酶试剂组成(具体含量见相关文献) GOOD's 缓冲液(pH6.7) 50mmol/L 胆固醇酯酶 ≥200U/L 胆固醇氧化酶 ≥100U/L 过氧化物酶 ≥3 000U/L 4-AAP 0.3mmol/L 苯酚 5mmol/L 2．胆固醇标准溶液 5.17 mmol/L (200 mg/dl) 精确称取胆固醇 200 mg，用异丙醇配成 100 ml 溶液，分装后，4℃保存，临用取出。也可用定值的参考血清作标准。 【操作步骤】 终点法检测 TC 按表 9-3 依次加样。 表 9-3 酶法测定 TC 操作步骤 加入物 空白管 标准管 测定管 血清(μl) － － 10 标准液或定值血清(μl) － 10 － 蒸馏水(μl) 10 － － 酶试剂(μl) 1 000 1 000 1 000 混匀后，37℃保温 5 min，用分光光度计比色，于 500 nm 波长处以空白管调零，读出各 管吸光度。 【计算】 血清 TC (mmol/L)＝ 标准管吸光度 测定管吸光度 ×胆固醇标准液浓度
【参考范围】血清参考值：3.0~5.20mmol/L；危险阈值：5.20~6.20mmol/L；高胆固醇血症：≥6.20mmol/L【临床意义】1.TC增高常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症(如家族性高胆固醇血症、家族性ApoB 缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等)、糖尿病、肾病综合征、总胆管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。2.TC 降低常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝脏疾病、严重感染、营养不良、肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疽及慢性消耗性疾病，如癌症晚期等。【注意事项】1．试剂中酶的质量影响测定结果。2．若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成分中去掉胆固醇酯酶即可。3.检测标本可为血清或者血浆(以肝素或EDTAK2抗凝)。【评价】本方法线性范围为≤19.38mmol/L(750mg/d1)。本方法特异性好和灵敏度高，既可用于手工操作，也可自动化分析；既可作终点法检测，也可作速率法检测。在终点法中血红蛋白高于2g/L时引起正干扰；胆红素高于0.1g/L时有明显负干扰；血中维生素C与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使结果降低。但是在速率法中上述干扰物质影响较小。高TG血症对本法无明显影响。检测TC的血清(浆)标本密闭保存时，在4℃可稳定1周，一20℃可稳定半年以上。第三节血清(浆)脂蛋白的测定在脂蛋白中既有蛋白质又有胆固醇，还有磷脂的复合体，较难定量。由于其中的胆固醇含量较为稳定，因此目前以测定脂蛋白中胆固醇总量的方法作为脂蛋白的定量依据，即测定HDL、LDL或VLDL中的胆固醇，并分别称为高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白-胆固醇(LDL-C)或极低密度脂蛋白-胆固醇(VLDL-C)。实验51磷钨酸-镁沉淀法测定高密度脂蛋白-胆固醇7
7 【参考范围】 血清参考值：3.0～5.20 mmol/L；危险阈值：5.20～6.20 mmol/L；高胆固 醇血症：≥6.20 mmol/L。 【临床意义】 1．TC 增高 常见于动脉粥样硬化、原发性高脂血症(如家族性高胆固醇血症、家族性 ApoB 缺陷症、多源性高胆固醇血症、混合性高脂蛋白血症等)、糖尿病、肾病综合征、总胆 管阻塞、甲状腺功能减退、肥大性骨关节炎、老年性白内障和牛皮癣。 2．TC 降低 常见于低脂蛋白血症、贫血、败血症、甲状腺功能亢进、肝脏疾病、严重 感染、营养不良、肠道吸收不良和药物治疗过程中的溶血性黄疸及慢性消耗性疾病，如癌症 晚期等。 【注意事项】 1．试剂中酶的质量影响测定结果。 2．若需检测游离胆固醇浓度，将酶试剂成分中去掉胆固醇酯酶即可。 3．检测标本可为血清或者血浆(以肝素或 EDTAK2 抗凝)。 【评价】 本方法线性范围为≤19.38 mmol/L (750 mg/d1)。 本方法特异性好和灵敏度高，既可用于手工操作，也可自动化分析；既可作终点法检测， 也可作速率法检测。 在终点法中血红蛋白高于 2g/L 时引起正干扰；胆红素高于 0.1g/L 时有明显负干扰；血中 维生素 C 与甲基多巴浓度高于治疗水平时，会使结果降低。但是在速率法中上述干扰物质影 响较小。高 TG 血症对本法无明显影响。 检测 TC 的血清(浆)标本密闭保存时，在 4℃可稳定 1 周，－20℃可稳定半年以上。 第三节 血清(浆)脂蛋白的测定 在脂蛋白中既有蛋白质又有胆固醇，还有磷脂的复合体，较难定量。由于其中的胆固醇 含量较为稳定，因此目前以测定脂蛋白中胆固醇总量的方法作为脂蛋白的定量依据，即测定 HDL、LDL 或 VLDL 中的胆固醇，并分别称为高密度脂蛋白-胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白 -胆固醇(LDL-C)或极低密度脂蛋白-胆固醇(VLDL-C)。 实验 51 磷钨酸-镁沉淀法测定高密度脂蛋白-胆固醇