目录 《微生物学实验》实验课程简企 实验守则 实验一准备实验棉塞的制作及实验器皿的洗涤包装 实验二细菌的单染色及革兰乐染色 实验三细菌大小的测微和特殊结构染色实验 实验四放线菌和霉菌的形态观察 实验五酵母菌形态观察和直接计数法 实验六培养基配制及王湿热灭菌 实验土从土壤中分离微生物 实验八水的细菌学检查(1) 实验水的细菌学检查(2) 实验土实验技能考核 《微生物学实验》实验课程简介 微生物学是一门实践性、技术性很强的课程，微生物学实验的方法是根据微生物被特的形态、生理、繁殖特征 设计的。主要包含三大部分共十次实验内容，第一部分：微主物学基本操作技能。训练学生拿提微生物学最基本的 操作技能，包括油镜的正确使用和显微镜维护、不同微生物的染色、运动、个体和群体形态观察比较、测微技术、 培养和分离技术等；第二部分：综合提升实验，在拿报微生物学基本技能的基础上，训练学生独立设计和自主创 新，培养学生观察、思考、分析问题的能力。第三部分：实验技能综合考试。该课程的目的：训练学生掌提微生物 学最基本的作技能；进一步了解、深化生物学的基本理论，加深理解课堂讲的有关微生物学理论知识，同时 通过实验，培养同学观察、思考、分析问题和解决问题的能力，实事求是，严肃认真的科学态度，以及勤俭节约的 优良品质
目录 《微生物学实验》实验课程简介 实验守则 实验一 准备实验-棉塞的制作及实验器皿的洗涤包装 实验二 细菌的单染色及革兰氏染色 实验三 细菌大小的测微和特殊结构染色实验 实验四 放线菌和霉菌的形态观察 实验五 酵母菌形态观察和直接计数法 实验六 培养基配制及干湿热灭菌 实验七 从土壤中分离微生物 实验八 水的细菌学检查（1） 实验九 水的细菌学检查（2） 实验十 实验技能考核 《微生物学实验》实验课程简介 微生物学是一门实践性、技术性很强的课程，微生物学实验的方法是根据微生物独特的形态、生理、繁殖特征 设计的。主要包含三大部分共十次实验内容，第一部分：微主物学基本操作技能。训练学生掌握微生物学最基本的 操作技能，包括油镜的正确使用和显微镜维护、不同微生物的染色、运动、个体和群体形态观察比较、测微技术、 培养和分离技术等；第二部分：综合提升实验，在掌握微生物学基本技能的基础上，训练学生独立设计和自主创 新，培养学生观察、思考、分析问题的能力。第三部分：实验技能综合考试。该课程的目的：训练学生掌握微生物 学最基本的操作技能；进一步了解、深化微生物学的基本理论，加深理解课堂讲授的有关微生物学理论知识，同时 通过实验，培养同学观察、思考、分析问题和解决问题的能力，实事求是，严肃认真的科学态度，以及勤俭节约的 优良品质
实验守则 1、实验室内保持千净整洁，勿高声说话和随意走动，保持室内安静。 2、进入实验室一定穿实验服，非必要物品禁止带入实验室。不准吸烟、吃喝东西、禁止用嘴移液或用未 经清洗的手接触眼睛等。 3、要严格按照实验室安全规程操作，避免或者减少气溶胶的产生。万一遇到襟作不镇打破盛有茵的试言 或三角瓶，皮肤划伤、微生物入眼或口等情况，应立即用清水先处理伤口并报告老师。 4、对于泄露或污染的物品或者台面要进行消毒处理，使用75%的酒精进行擦找。所有污染物要进 行统一灭菌后倾倒。 5、实验过程中女生长头发不允许被肩，最好束起来并盘到头顶。切勿使乙醇、乙能、丙酮等易燃易爆药 品接近火焰。如遇危险，应保持冷静，先关梓火源，再遗行有效的灭火处理。 6、使用显微镜或其他贵重仪器，要求细心操作，特别爱护。对消耗品和药品要力求节约，用完后放回原 处。 7、年次实验进行培养的材料，应标明自己的组别及处理方法，放于指定地点。实验室中的菌林和物品禁 止私自携带外出。 8、每次实验前必须充分预习，了解实验原理，做到心中有数，思路清楚 9、认真做好实验过程中的记录，实验报告必领使用统一的报告单 10、离开实验室前将手洗千净，注意关闭电源，门窗和灯等。 实验一准备实验棉塞的制作及实验器皿的洗涤包装 一、实验目的 1、通过简单的棉塞的制作，训练学生左右手相互协调的能力，为微生物实验中的具体操 作打下基础。 2、清洗实验器皿以及包装，让同学们理解微生物实验过程中无菌的概念，且这一概念贯 串整个微生物学任何实验的过程中。 3、让同学们理解例如培养皿、琼脂、接种针等简单的设计起到非常重要的作用
实验守则 1、 实验室内保持干净整洁，勿高声说话和随意走动，保持室内安静。 2、 进入实验室一定穿实验服，非必要物品禁止带入实验室。不准吸烟、吃喝东西、禁止用嘴移液或用未 经清洗的手接触眼睛等。 3、 要严格按照实验室安全规程操作，避免或者减少气溶胶的产生。万一遇到操作不慎打破盛有菌的试管 或三角瓶，皮肤划伤、微生物入眼或口等情况，应立即用清水先处理伤口并报告老师。 4、 对于泄露或污染的物品或者台面要进行消毒处理，使用75%的酒精进行擦拭。所有污染物要进 行统一灭菌后倾倒。 5、 实验过程中女生长头发不允许披肩，最好束起来并盘到头顶。切勿使乙醇、乙醚、丙酮等易燃易爆药 品接近火焰。如遇危险，应保持冷静，先关掉火源，再进行有效的灭火处理。 6、 使用显微镜或其他贵重仪器，要求细心操作，特别爱护。对消耗品和药品要力求节约，用完后放回原 处。 7、 每次实验进行培养的材料，应标明自己的组别及处理方法，放于指定地点。实验室中的菌株和物品禁 止私自携带外出。 8、 每次实验前必须充分预习，了解实验原理，做到心中有数，思路清楚。 9、 认真做好实验过程中的记录，实验报告必须使用统一的报告单。 10、 离开实验室前将手洗干净，注意关闭电源，门窗和灯等。 实验一 准备实验-棉塞的制作及实验器皿的洗涤包装 一、 实验目的 1、通过简单的棉塞的制作，训练学生左右手相互协调的能力，为微生物实验中的具体操 作打下基础。 2、清洗实验器皿以及包装，让同学们理解微生物实验过程中无菌的概念，且这一概念贯 串整个微生物学任何实验的过程中。 3、 让同学们理解例如培养皿、琼脂、接种针等简单的设计起到非常重要的作用
二、实验原理 1、试管塞子或者是三角瓶塞子的作用原理。 2、培养皿无菌培养的原理。 3、琼脂在培养基中的作用原理。 4、接种针的设计原理。 三、实验材料、仪器和试剂 棉花，纱布，线绳，剪刀，培养皿，报纸，接种针，试管，三角瓶，灭菌锅。 四、实验方法及步骤 棉塞制作的过程， 培养皿包装灭菌过程。 五、注意事项 重在锻炼学生的动手能力和学习能力以及自我的思考能力。在实践中不断摸索不断学习的过程 结果不要求多而要求精。 六、思考题 无 实验二细菌的单染色及革兰氏染色 一、实验目的 学习并掌握油镜的使用方法： 学习并掌握对细菌进行涂片染色的方法： 学习无菌操作技术。 二、实验原理 1、细菌单染色和革兰氏染色的原理。 2、油镜的使用原理。 三、实验材料、仪器和试剂
二、 实验原理 1、 试管塞子或者是三角瓶塞子的作用原理。 2、 培养皿无菌培养的原理。 3、 琼脂在培养基中的作用原理。 4、 接种针的设计原理。 三、 实验材料、仪器和试剂 棉花，纱布，线绳，剪刀，培养皿，报纸，接种针，试管，三角瓶，灭菌锅。 四、 实验方法及步骤 棉塞制作的过程。 培养皿包装灭菌过程。 五、 注意事项 重在锻炼学生的动手能力和学习能力以及自我的思考能力。在实践中不断摸索不断学习的过程。 结果不要求多而要求精。 六、 思考题 无 实验二 细菌的单染色及革兰氏染色 一、 实验目的 学习并掌握油镜的使用方法； 学习并掌握对细菌进行涂片染色的方法； 学习无菌操作技术。 二、 实验原理 1、细菌单染色和革兰氏染色的原理。 2、油镜的使用原理。 三、 实验材料、仪器和试剂
B1(枯草芽孢杆菌)，B5(金黄色葡萄球菌)，B7(大肠杆菌)，螺旋菌（口腔），显 微镜，培养皿，报纸，接种针，试管，三角瓶，灭菌锅，各种染色液等。 四、实验方法及步骤 1、细菌的单染色 11要求：分别制作B1和自身口腔牙垢螺旋菌涂片，染色并观察。 1.2过程：涂片→干燥→固定→结晶紫染色(2分钟)→水洗→干燥→镜检。 2、细菌的苹兰氏染色 2.1要求：制作B5和B7的混合涂片，染色并观察(B7比B5多涂一些)。 2.2过程：涂片，干燥，固定一结晶紫染色(2分钟)→水洗→碘液(1分钟)一水 洗→酒精(15秒)→立刻水洗→番红(2分钟)→水洗→干燥→镜检。 3、细菌的群体形态观察（菌落的大小、色泽、透明度、形状、边缘、突起程度）。 五、注意事项 同学们操作过程中要注意的问题： 1)涂片不能太多水？要涂开一些，如果有聚集的现象说明不干净，用去污粉洗干净后重新进行。 2)图片不要太厚，要均匀，固定温度不能太高。（都要问为什么？） 3)染料只要覆盖涂片的区域即可。 4)为什么我们要采取混合图片的方式呢？强调对照的重要性。 5)如何快速的定位自己要观察的对象。 6)重点说明脱色的过程和如何把握脱色的过程 六、思考题 1)如何判断显微镜下视野中看到的东西是否是我们需要观察的对象？分析多种可能性，所得结论对应 的依据是什么 2)怎样确定一株未知菌株是革兰氏阳性还是革兰氏阴性，具体过程怎样进行？ 3)自己革兰氏染色过程结果分析？
B1（枯草芽孢杆菌），B5（金黄色葡萄球菌），B7（大肠杆菌），螺旋菌（口腔），显 微镜，培养皿，报纸，接种针，试管，三角瓶，灭菌锅，各种染色液等。 四、 实验方法及步骤 1、细菌的单染色 1.1 要求：分别制作B1和自身口腔牙垢螺旋菌涂片，染色并观察。 1.2 过程：涂片 → 干燥 → 固定 → 结晶紫染色（2分钟）→ 水洗 →干燥 → 镜检。 2、细菌的革兰氏染色 2.1 要求：制作B5和B7的混合涂片，染色并观察（B7比B5多涂一些）。 2.2 过程：涂片，干燥，固定 → 结晶紫染色（2分钟）→ 水洗 → 碘液（1分钟）→ 水 洗 → 酒精（15秒）→ 立刻水洗 → 番红（2分钟）→ 水洗 → 干燥 → 镜检。 3、细菌的群体形态观察（菌落的大小、色泽、透明度、形状、边缘、突起程度）。 五、 注意事项 同学们操作过程中要注意的问题： 1) 涂片不能太多水？要涂开一些，如果有聚集的现象说明不干净，用去污粉洗干净后重新进行。 2) 图片不要太厚，要均匀，固定温度不能太高。（都要问为什么？） 3) 染料只要覆盖涂片的区域即可。 4) 为什么我们要采取混合图片的方式呢？强调对照的重要性。 5) 如何快速的定位自己要观察的对象。 6) 重点说明脱色的过程和如何把握脱色的过程。 六、思考题 1) 如何判断显微镜下视野中看到的东西是否是我们需要观察的对象？分析多种可能性，所得结论对应 的依据是什么。 2) 怎样确定一株未知菌株是革兰氏阳性还是革兰氏阴性，具体过程怎样进行？ 3) 自己革兰氏染色过程结果分析？
实验三细菌大小的测微和特殊结构染色实验 一、实验目的 1、掌握细菌大小的测微技术。 2、掌握细菌芽孢和荚膜的染色方法。 3、掌握细菌运动运动性的观察方法（悬滴法）。 二、实验原理 1、对细菌大小进行测量的原理。 2、芽孢和荚膜的染色原理。 3、细菌运动性观察和判别的原理。 三、实验材料、仪器和试剂 枯草芽孢杆菌(B1)、金黄色葡萄球菌(B5)、原核固氨菌，显微镜，载玻片，酒精灯， 接种针，水，镜台测微尺，目镜测微尺，灭菌锅，各种染色液等。 四、实验方法及步骤 1、细菌大小测微的实验 1.1用镜台测微尺分别对低倍镜、高倍镜和油镜的目镜测微尺进行校正。 1.2分别对B1、B5进行单染色。 1.3在油镜条件下，用目镜测微尺分别对B1、B5进行观察和测量（选五个不同的菌体 取其平均值)。 2、细菌的芽孢染色实验 涂片、干燥、固定，加数滴孔雀绿染液于玻片上，微火加热至燃料冒蒸汽并维持，计 时5分钟，待玻片冷却后水洗，蕃红复染2分钟，然后水洗，干燥，镜检。 3、荚膜染色法 用结晶紫单染色法对原核固氨菌进行染色（涂片稍厚，不能加热进行干燥和固定，稍水洗），镜 检时菌体细胞外一圈透明区域即为英膜。 4、用悬滴法观察细菌的运动性
实验三 细菌大小的测微和特殊结构染色实验 一、 实验目的 1、掌握细菌大小的测微技术。 2、掌握细菌芽孢和荚膜的染色方法。 3、掌握细菌运动运动性的观察方法（悬滴法）。 二、 实验原理 1、对细菌大小进行测量的原理。 2、芽孢和荚膜的染色原理。 3、细菌运动性观察和判别的原理。 三、 实验材料、仪器和试剂 枯草芽孢杆菌（B1）、金黄色葡萄球菌（B5）、原核固氮菌，显微镜，载玻片，酒精灯， 接种针，水，镜台测微尺，目镜测微尺，灭菌锅，各种染色液等。 四、 实验方法及步骤 1、细菌大小测微的实验 1.1 用镜台测微尺分别对低倍镜、高倍镜和油镜的目镜测微尺进行校正。 1.2 分别对B1、B5进行单染色。 1.3 在油镜条件下，用目镜测微尺分别对B1、B5进行观察和测量（选五个不同的菌体 取其平均值）。 2、细菌的芽孢染色实验 涂片、干燥、固定，加数滴孔雀绿染液于玻片上，微火加热至燃料冒蒸汽并维持，计 时5分钟，待玻片冷却后水洗，蕃红复染2分钟，然后水洗，干燥，镜检。 3、荚膜染色法 用结晶紫单染色法对原核固氮菌进行染色（涂片稍厚，不能加热进行干燥和固定，稍水洗），镜 检时菌体细胞外一圈透明区域即为荚膜。 4、用悬滴法观察细菌的运动性