细胞生物学实验指导 细胞生物学实验课程介绍 细胞生物学是高等院校生命科学的主要课程之一，是一门实验性很强的学科。细胞生物学实验 课是理论教学的重要补充。细胞生物学实验课的教学目的主要是，通过基本技能训练及观察分析实 验结果，使学生了解并掌握有关的实验技术原理和操作方法，进而培养学生动手能力、提高学生发 现、分析和解决问题的能力。 参考书目：细胞生物学实验（第二版）杨汉民主编高等教育出版社 细胞生物学实验（第二版）李芬、胡海燕主编科学出版社 细胞生物学（第五版）丁明孝等主编高等教育出版社 实验室规则与操作要求 为获得较好的实验结果，避免发生差错与意外事故，特制定以下规则与要求，希 望实验者能严格遵守。 (一)显微镜的使用及保护 1.显微镜是细胞生物学实验的主要观察工具，使用时必须注意保持外观整洁、防 湿、防高温、防药品侵蚀，使用时勿使染液或其它溶液沾污镜头，一旦沾污，及时用 擦镜纸蘸上镜头清洗液（无水乙醚：无水乙醇=7：3）轻轻擦拭干净
细胞生物学实验指导 细胞生物学实验课程介绍 细胞生物学是高等院校生命科学的主要课程之一，是一门实验性很强的学科。细胞生物学实验 课是理论教学的重要补充。细胞生物学实验课的教学目的主要是，通过基本技能训练及观察分析实 验结果，使学生了解并掌握有关的实验技术原理和操作方法，进而培养学生动手能力、提高学生发 现、分析和解决问题的能力。 参考书目：细胞生物学实验（第二版）杨汉民主编 高等教育出版社 细胞生物学实验（第二版）李芬、胡海燕主编 科学出版社 细胞生物学（第五版）丁明孝等主编 高等教育出版社 实验室规则与操作要求 为获得较好的实验结果，避免发生差错与意外事故，特制定以下规则与要求，希 望实验者能严格遵守。 （一）显微镜的使用及保护 1. 显微镜是细胞生物学实验的主要观察工具，使用时必须注意保持外观整洁、防 湿、防高温、防药品侵蚀，使用时勿使染液或其它溶液沾污镜头，一旦沾污，及时用 擦镜纸蘸上镜头清洗液（无水乙醚：无水乙醇＝7：3）轻轻擦拭干净
2.带光源的显微镜待电压稳定后，将电源的光亮度调节器调至最小，再打开显微 镜的电源，缓慢调节光亮度适当进行量度观察，观察完毕后，则先将光亮度调节器调 至最小，然后再关闭显微镜电源开关。 3.镜头的清洗：实验完毕后，镜头的清洗很重要。用擦镜纸蘸取少量镜头清洗 液，先从镜头的中央开始清洗，轻轻旋转擦至镜头的边缘部分，如此重复2一3次。 4.载物台必须保持清洁，必要时亦可用擦镜纸蘸少量清洗液擦试载物台。聚光器 上的污物的去除亦可采用类似的方法。 5.使用完毕后，玻片一律取下，套上布袋放回原处。本桌的显微镜一律不准搬离 本实验桌。若需使用者，可到该桌使用，使用后务必保持该显微镜的清洁。 如若发现违章使用情况，必追究使用者责任，本次实验作零分计。 (一)实验时，实验室内，一律不准高声喧哗整洁，保持室内安静，认真操作， 仔细做好各项观察与记录。 (二)实验室内的一切仪器、物品必须爱护。节约材料、药品，取用时不要过 量。公用物品不得独自占用，用后归还原处。 (三)注意安全。使用有毒物品、强酸、强碱等，应严格按照操作规程。易燃物 品远离火源。禁止湿手拿取电源开关或接触电源。如发生触电等事故，及时报告。 (四)取用各种试剂，要用及时盖上瓶盖。按献宝取出所需之药品或溶液后，不 得将原液倒回瓶内。滴管、玻棒、吸管不可混用。 (五)实验中如有丢失、损坏仪器设备及用具，及时登记并报告，凡违反操作规 程造成不应有的损失者，视其情节轻重，态度好坏，按有关规定处理。 (六)本实验室欢迎各位实验者对每一实验本身提出新的看法与做法，至于能否 采用，视具体情况而定。任何人未经老师许可，不得自作主张，改动任何实验步骤与 操作方法
2. 带光源的显微镜待电压稳定后，将电源的光亮度调节器调至最小，再打开显微 镜的电源，缓慢调节光亮度适当进行量度观察，观察完毕后，则先将光亮度调节器调 至最小，然后再关闭显微镜电源开关。 3. 镜头的清洗：实验完毕后，镜头的清洗很重要。用擦镜纸蘸取少量镜头清洗 液，先从镜头的中央开始清洗，轻轻旋转擦至镜头的边缘部分，如此重复2－3次。 4. 载物台必须保持清洁，必要时亦可用擦镜纸蘸少量清洗液擦试载物台。聚光器 上的污物的去除亦可采用类似的方法。 5. 使用完毕后，玻片一律取下，套上布袋放回原处。本桌的显微镜一律不准搬离 本实验桌。若需使用者，可到该桌使用，使用后务必保持该显微镜的清洁。 如若发现违章使用情况，必追究使用者责任，本次实验作零分计。 （一）实验时，实验室内，一律不准高声喧哗整洁，保持室内安静，认真操作， 仔细做好各项观察与记录。 （二）实验室内的一切仪器、物品必须爱护。节约材料、药品，取用时不要过 量。公用物品不得独自占用，用后归还原处。 （三）注意安全。使用有毒物品、强酸、强碱等，应严格按照操作规程。易燃物 品远离火源。禁止湿手拿取电源开关或接触电源。如发生触电等事故，及时报告。 （四）取用各种试剂，要用及时盖上瓶盖。按献宝取出所需之药品或溶液后，不 得将原液倒回瓶内。滴管、玻棒、吸管不可混用。 （五）实验中如有丢失、损坏仪器设备及用具，及时登记并报告，凡违反操作规 程造成不应有的损失者，视其情节轻重，态度好坏，按有关规定处理。 （六）本实验室欢迎各位实验者对每一实验本身提出新的看法与做法，至于能否 采用，视具体情况而定。任何人未经老师许可，不得自作主张，改动任何实验步骤与 操作方法
(七)实验完毕后，须摆齐药品，洗净器皿，做好实验桌清洁。整个实验室清洁 由本班班长安排。离开前要关好门、窗、水、电。 目录 实验一细胞膜的通透性实验， .1 实验二细胞的凝集实验 3 实验三动物细胞的融合实验， .5 实验四植物细胞骨架的光学显微镜观察 .7 实验五线粒体的超活染色. 9 实验六植物染色体标本的制备及有丝分裂过程的观察.11 实验七细胞器和亚细胞组分的分离及观察。 13 实验八氧电极法测定植物的光合和呼吸速率。 17 实验九DNA的Feulgen染色观察， 23 实验十液泡系的活体染色观察. .25 实验十一植物组织培养及愈伤组织的分化诱导27 实验十二小鼠骨髓间充质细胞的分离培养及观察.31
（七）实验完毕后，须摆齐药品，洗净器皿，做好实验桌清洁。整个实验室清洁 由本班班长安排。离开前要关好门、窗、水、电。 目 录 实验一 细胞膜的通透性实验. 1 实验二 细胞的凝集实验. 3 实验三 动物细胞的融合实验. 5 实验四 植物细胞骨架的光学显微镜观察. 7 实验五 线粒体的超活染色. 9 实验六 植物染色体标本的制备及有丝分裂过程的观察. 11 实验七 细胞器和亚细胞组分的分离及观察. 13 实验八 氧电极法测定植物的光合和呼吸速率. 17 实验九 DNA的Feulgen染色观察. 23 实验十 液泡系的活体染色观察. 25 实验十一 植物组织培养及愈伤组织的分化诱导. 27 实验十二 小鼠骨髓间充质细胞的分离培养及观察. 31
实验一细胞膜的通透性实验 一、实验目的 1.了解动物细胞膜的特性 2.掌握观察细胞膜通透性的原理和方法 二、实验原理 动物细胞膜是具有流动性、半通透性的双膜结构，有些小分子能自由通过如水分子，而有些小分 子不能自由透过如钠离子，钾离子、蔗糖等。水是地球上大部分生命物质存在的基础，水能自由通 过细胞膜。钠离子是阳离子不能自由通过，水与细胞接触时，细胞外钠离子浓度低于细胞，细胞内 为高渗状态，水分子自由进入红细胞，细胞吸水膨胀，最后细胞膜破裂。高渗的NC1水溶液与红细 胞接触，红细胞相对于溶液处于低渗状态，细胞内水分子自由出细胞，细胞缩水。 三、实验仪器、材料和试剂 1仪器及用具：显微镜、天平、载玻片、盖玻片、滴管、小烧杯、离心管：镊子、吸水纸、擦镜 纸、吸管、烧杯、量筒、冰箱。 2.材料：鸡血（采血） 3试剂：氯化钠，氯化钾，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠 (1)PBS缓冲液 称取7.2gNaC1,1.48gNaH2PO4,0.46gKH2PO4,用蒸馏水定容至1000ml,调pH为7.2。 (2)0.9%NaC1 称取0.9 g NaCl,.加水定容至1O0ml
实验一 细胞膜的通透性实验 一、实验目的 1. 了解动物细胞膜的特性 2. 掌握观察细胞膜通透性的原理和方法 二、实验原理 动物细胞膜是具有流动性、半通透性的双膜结构，有些小分子能自由通过如水分子，而有些小分 子不能自由透过如钠离子，钾离子、蔗糖等。水是地球上大部分生命物质存在的基础，水能自由通 过细胞膜。钠离子是阳离子不能自由通过，水与细胞接触时，细胞外钠离子浓度低于细胞，细胞内 为高渗状态，水分子自由进入红细胞，细胞吸水膨胀，最后细胞膜破裂。高渗的NaCl水溶液与红细 胞接触，红细胞相对于溶液处于低渗状态，细胞内水分子自由出细胞，细胞缩水。 三、实验仪器、材料和试剂 1.仪器及用具：显微镜、天平、载玻片、盖玻片、滴管、小烧杯、离心管；镊子、吸水纸、擦镜 纸、吸管、烧杯、量筒、冰箱。 2.材料：鸡血（采血） 3.试剂：氯化钠，氯化钾，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠 （1）PBS缓冲液 称取7.2g NaCl，1.48 g NaH PO ， 0.46 g KH PO ，用蒸馏水定容至1000 ml，调pH为7.2。 （2）0.9% NaCl 称取0.9 g NaCl，加水定容至100 ml。 2 4 2 4
(3)饱和NaCI 称取36gNaC1,加水定容至100ml。 四、实验方法与步骤 (1)用PBS充分洗涤新鲜采集的鸡血，PBS洗涤3次以上，除去血液中的纤溶蛋白，离心后细胞 沉淀用0.9%NaCI溶液稀释成0.5%血细胞。 (2)准备纯净水，0.9%和饱和NaCI溶液 (3)取3片载玻片，分别滴入一滴鸡血红细胞。 (4)在鸡血滴上分别滴加一滴不同溶液，轻轻混匀，10min后，盖上盖玻片，在显微镜下观察 细胞形态变化。 五、注意事项 1从离心机内拿出离心管时切勿振荡，不要倾倒离心管倒上清，以免红细胞流出。清洗红细胞时 用移液器缓缓吹打，防止红细胞破裂。 2.红细胞悬液放置一段时间会发生沉降，取用之前应当轻轻摇匀。 六、结果与分析 1观察不同浓度盐水下细胞膜的变化，同时分析其中的原因 实验二细胞的凝集实验 一、实验目的 1.了解植物凝集素的本质： 3.掌握细胞凝集的原理和方法。 红细胞凝集：红细胞凝集包括由病毒、细胞凝集素和抗体而引起的三种类型的细胞凝集现象。 凝集素(lectin)是从各种植物的种子和动物组织中提取的糖蛋白或结合糖蛋白，因为能凝集红 细胞，故名凝集素
（3）饱和NaCl 称取36 g NaCl，加水定容至100 ml。 四、实验方法与步骤 （1）用PBS充分洗涤新鲜采集的鸡血， PBS洗涤3次以上，除去血液中的纤溶蛋白，离心后细胞 沉淀用0.9% NaCl溶液稀释成0.5%血细胞。 （2）准备纯净水，0.9%和饱和NaCl溶液 （3）取3片载玻片，分别滴入一滴鸡血红细胞。 （4）在鸡血滴上分别滴加一滴不同溶液，轻轻混匀，10 min后，盖上盖玻片，在显微镜下观察 细胞形态变化。 五、注意事项 1.从离心机内拿出离心管时切勿振荡，不要倾倒离心管倒上清，以免红细胞流出。清洗红细胞时 用移液器缓缓吹打，防止红细胞破裂。 2.红细胞悬液放置一段时间会发生沉降，取用之前应当轻轻摇匀。 六、结果与分析 1.观察不同浓度盐水下细胞膜的变化，同时分析其中的原因 实验二 细胞的凝集实验 一、实验目的 1.了解植物凝集素的本质； 3. 掌握细胞凝集的原理和方法。 红细胞凝集：红细胞凝集包括由病毒、细胞凝集素和抗体而引起的三种类型的细胞凝集现象。 凝集素（lectin）是从各种植物的种子和动物组织中提取的糖蛋白或结合糖蛋白，因为能凝集红 细胞，故名凝集素