1mg/mL溶液，测定其紫外吸收光谱，本品在277±2nm波长处有最大吸收。 要点及难点解答 (1)中药的紫外吸收光谱是多种成分特征吸收光谱叠加而成的，在一定的条件下，中 药多成分的复杂组合也有一定的规律性，从而在紫外叠加光谱上显示出一定的特异性和稳定 性。 (2)分光光度计紫外光区的波长范围200~400nm:可见光区的波长范围400-760nm。 (3)测定供试品前，应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近必须符合下列要求： 溶剂和吸收池的吸收度在220~240nm范围内不得超过0.40：在241~250nm范围内不得超过 0.20:在251~300nm范围内不得超过0.10：在300nm以上不得超过0.05。 习题与作业 (1)习题 1)用可见-紫外光谱法鉴定中药的原理与基本方法。 2)总结常用中药的紫外光谱定性鉴定的主要特征。 (2)作业 简述实验步骤，记录实验结果。 2.1.3红外光谱鉴定 内容提要 本实验采用红外光谱法对不同药用部位的6种中药进行品种或质量鉴定。 通过实验掌握红外光谱鉴定中药的基本理论、基本方法和基本技术。掌握常用中药红外 光谱鉴别的特征。 60
60 1mg/mL 溶液，测定其紫外吸收光谱,本品在 277±2nm 波长处有最大吸收。 要点及难点解答 （1）中药的紫外吸收光谱是多种成分特征吸收光谱叠加而成的，在一定的条件下，中 药多成分的复杂组合也有一定的规律性，从而在紫外叠加光谱上显示出一定的特异性和稳定 性。 （2）分光光度计紫外光区的波长范围 200~400nm；可见光区的波长范围 400~760nm。 （3）测定供试品前，应先检查所用的溶剂在供试品所用的波长附近必须符合下列要求： 溶剂和吸收池的吸收度在 220~240nm 范围内不得超过 0.40；在 241~250nm 范围内不得超过 0.20；在 251~300nm 范围内不得超过 0.10；在 300nm 以上不得超过 0.05。 习题与作业 （1）习题 1）用可见-紫外光谱法鉴定中药的原理与基本方法。 2）总结常用中药的紫外光谱定性鉴定的主要特征。 （2）作业 简述实验步骤，记录实验结果。 2.1.3 红外光谱鉴定 内容提要 本实验采用红外光谱法对不同药用部位的 6 种中药进行品种或质量鉴定。 通过实验掌握红外光谱鉴定中药的基本理论、基本方法和基本技术。掌握常用中药红外 光谱鉴别的特征
原理 红外光谱法是以红外区域电磁波连续光谱作为辐射源照射供试品，记录供试品吸收曲线 的一种物理光学分析方法。中药的红外光谱鉴定是通过测定其粉末、提取物或化学单体的红 外吸收曲线反映中药所含各组分官能团的差异，以鉴别中药的品种和质量，主要用于中药的 定性鉴别。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器红外分光光度计，样品筛，试管，烧杯，容量瓶(5L),供试品瓶，粉碎机 等。 2)材料粉末：黄芩，赤芍，血竭（进口血竭）达马胶，松香，全蝎，蝉蜕，天麻。 (2)试剂溴化钾，乙醚，50%乙醇等。 操作步骤 1)黄芩取本品粉末，采用溴化钾压片法测其红外光谱。本品在2927cm1、1614 cm1、1027cm1有特征峰，在1451cm、1360cm1、1247cm1处有3个小峰并列出现。 2)赤芍取本品粉末（过200目筛），采用溴化钾压片法测其红外光谱，本品在2930 cml、1622cm1、1050cm1、1317cm1、781cm1处有特征峰（图8-43）。 3)血竭取进口血竭乙醚提取物测定其红外光谱，特征吸收峰是1120cm1、1610cm (掺假物达马胶的红外吸收峰是1380cm、1460cm、1707cml,以1707cm1为特征吸 收峰：松香的特征吸收峰主要是1692cml、1280cm)。 4)全蝎取本品粉末，采用溴化钾压片法测其红外光谱，本品在2925cm、2854cm1、 1658cml、1536cm'、1240cm1、1745cm处有特征峰。 5)蝉蜕取本品粉末，采用溴化钾压片法测其红外光谱，本品在2962cm1、2930cml、 1656cm1、1546cm1、1259cm1、1031cm处有特征峰。 6)天麻取本品粉末2μg,采用溴化钾压片法测其红外光谱，供试品在1700~1600cm 有1个中强的宽吸收，峰位为1645cm'。 或取本品50%乙醇浸出物(10.0mg/2.0mL),供试品在1510cm1处有1明显的、尖锐的 6
61 原理 红外光谱法是以红外区域电磁波连续光谱作为辐射源照射供试品，记录供试品吸收曲线 的一种物理光学分析方法。中药的红外光谱鉴定是通过测定其粉末、提取物或化学单体的红 外吸收曲线反映中药所含各组分官能团的差异，以鉴别中药的品种和质量，主要用于中药的 定性鉴别。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器 红外分光光度计，样品筛，试管，烧杯，容量瓶（5mL），供试品瓶，粉碎机 等。 2)材料 粉末：黄芩，赤芍，血竭（进口血竭）达马胶，松香，全蝎，蝉蜕，天麻。 （2）试剂 溴化钾，乙醚，50%乙醇等。 操作步骤 1）黄芩 取本品粉末，采用溴化钾压片法测其红外光谱。本品在 2 927 cm-1、1 614 cm-1、1 027 cm-1 有特征峰，在 1 451 cm-1、1 360 cm-1、1 247 cm-1 处有 3 个小峰并列出现。 2）赤芍 取本品粉末（过 200 目筛），采用溴化钾压片法测其红外光谱，本品在 2 930 cm-1、1 622 cm-1、1 050 cm-1、1 317 cm-1、781 cm-1 处有特征峰 (图 8- 43) 。 3）血竭 取进口血竭乙醚提取物测定其红外光谱，特征吸收峰是 1 120 cm-1、1 610 cm-1 （掺假物达马胶的红外吸收峰是 1 380 cm-1、1 460 cm-1、1 707 cm-1，以 1 707 cm-1 为特征吸 收峰；松香的特征吸收峰主要是 1 692 cm-1、1 280 cm-1）。 4）全蝎 取本品粉末，采用溴化钾压片法测其红外光谱，本品在 2 925 cm-1、2 854 cm-1、 1 658 cm-1、1 536 cm-1、1 240 cm-1、1 745 cm-1 处有特征峰。 5）蝉蜕 取本品粉末，采用溴化钾压片法测其红外光谱，本品在 2 962cm-1、2 930 cm-1、 1 656 cm-1、1 546 cm-1、1 259 cm-1、1 031 cm-1 处有特征峰。 6）天麻 取本品粉末 2μg，采用溴化钾压片法测其红外光谱，供试品在 1 700～1 600cm-1 有 1 个中强的宽吸收，峰位为 1 645cm-1。 或取本品 50%乙醇浸出物(10.0mg/2.0mL)，供试品在 1 510 cm-1 处有 1 明显的、尖锐的
吸收峰，在1235cm1处有1个明显的宽吸收峰。 要点及难点解答 (1)用红外光谱法鉴定中药，实质上就是解析红外光谱或与标准光谱进行对照，从红外 光谱所提供的信息来确定未知中药的种类及其性质。红外光谱法主要用于中药的定性鉴定， 在定性分析中，应选用适宜的样品处理方法及测量条件，以便与标准光谱进行对照。 (2)红外区的波长范围是0.76~500um,在可见光与微波之间，习惯上按红外线的波 长将红外波谱分成3个区段，即近红外区、中红外区和远红外区，其中红外区是应用最广泛 的区段。进行红外光谱分析时，首先应根据对象不同，采用各种分离手段，保证被测样品的 纯度。供试品制备可根据物态的不同采用不同的方法进行，如液体样品采用液膜法和溶液法： 固体样品采用压片法、糊剂法、薄膜法、溶液法：气体样品纯化后可直接用气体池进行测定。 (3)采用红外光谱法鉴定生物类中药，一般应固定供试品的条件，如品种、产地、商品 规格或加工方法等。 (4)供试品的粉末均过200目筛。 习题与作业 (1)习题 1)用红外光谱法鉴定中药的原理与基本方法。 2)总结常用中药的红外光谱定性鉴定的主要特征。 (2)作业 简述实验步骤，记录和分析实验结果。 2.2中药的电泳鉴定 内容提要 本实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)法对苦杏仁等7种中药的进行品种或质量鉴 定。 62
62 吸收峰，在 1 235cm-1 处有 1 个明显的宽吸收峰。 要点及难点解答 （1）用红外光谱法鉴定中药，实质上就是解析红外光谱或与标准光谱进行对照，从红外 光谱所提供的信息来确定未知中药的种类及其性质。红外光谱法主要用于中药的定性鉴定， 在定性分析中，应选用适宜的样品处理方法及测量条件，以便与标准光谱进行对照。 （2）红外区的波长范围是 0.76～500μm，在可见光与微波之间，习惯上按红外线的波 长将红外波谱分成 3 个区段，即近红外区、中红外区和远红外区，其中红外区是应用最广泛 的区段。进行红外光谱分析时，首先应根据对象不同，采用各种分离手段，保证被测样品的 纯度。供试品制备可根据物态的不同采用不同的方法进行，如液体样品采用液膜法和溶液法； 固体样品采用压片法、糊剂法、薄膜法、溶液法；气体样品纯化后可直接用气体池进行测定。 （3）采用红外光谱法鉴定生物类中药，一般应固定供试品的条件，如品种、产地、商品 规格或加工方法等。 （4）供试品的粉末均过 200 目筛。 习题与作业 （1）习题 1）用红外光谱法鉴定中药的原理与基本方法。 2）总结常用中药的红外光谱定性鉴定的主要特征。 （2）作业 简述实验步骤，记录和分析实验结果。 2.2 中药的电泳鉴定 内容提要 本实验采用聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）法对苦杏仁等 7 种中药的进行品种或质量鉴 定
通过实验掌握电泳鉴定中药的基本理论、基本方法和基本技术。掌握常用中药电泳鉴别 的特征。 原理 电泳是一种分离和鉴定混合物中带电离子的技术。本实验是利用中药含有蛋白质带电荷 的成分，在同一电场作用下，由于各组分所带电荷的性质、电荷数目以及分子质量不同，而 泳动方向和速度不同，在一定时间内，各成分的泳动率不同，结合谱带数和染色不同达到鉴 定的目的。聚丙烯酰胺凝胶电泳是由丙烯酰胺和N,N-亚甲基双丙烯酰胺在催化剂作用下聚 合交联成三维网状结构的凝胶，并以此为支持物的电泳技术。在电泳开始阶段，由于连续 pH梯度作用，将供试品压缩成1条狭窄的区带（浓缩效应），再加上整个电泳过程中存在的 分子筛效应和电荷效应，从而提高供试品的分离效果。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器SCR-稳压稳流电泳仪或CYYⅢ稳压稳流电泳仪，ZVS-100型垂直板电泳槽， 恒温培养箱，离心机，分析天平，扭力天平，真空干燥器，微量进样器，烧杯(100mL,500mL, 1000mL),量筒(10mL,100mL,1000mL),刻度吸管(1mL,2mL,10mL),试管，离心 管，大培养皿，玻璃注射器(5mL,10mL,20mL),剪刀，镊子，研体，滤纸，粉碎机等。 2)材料药材或粉末：苦杏仁，桃仁，蕲蛇，乌梢蛇，金钱白花蛇，小茴香，莳萝子。 (2)试剂分离胶缓冲液，分离胶贮液，浓缩胶缓冲液，浓缩胶贮液，电极缓冲液， 40%蔗糖溶液，过硫酸铵溶液，四甲基乙二胺，溴酚蓝指示剂，考马斯亮蓝染色液，脱色液 等。 操作步骤 (1)聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本方法 1)供试品液的制备取纯净的供试品约1g,加入稀释4倍的浓缩胶缓冲液（或电极缓 冲液、稀醇液等)0.5~1mL,研磨成匀浆，3500rpm离心15min,取上清液加等体积的40% 蔗糖溶液，4℃保存，供点样用。 2)电泳槽的安装垂直板电泳槽的式样很多，目前流行的是用有机玻璃做的由两个半 6⊙
63 通过实验掌握电泳鉴定中药的基本理论、基本方法和基本技术。掌握常用中药电泳鉴别 的特征。 原理 电泳是一种分离和鉴定混合物中带电离子的技术。本实验是利用中药含有蛋白质带电荷 的成分，在同一电场作用下，由于各组分所带电荷的性质、电荷数目以及分子质量不同，而 泳动方向和速度不同，在一定时间内，各成分的泳动率不同，结合谱带数和染色不同达到鉴 定的目的。聚丙烯酰胺凝胶电泳是由丙烯酰胺和 N,N-亚甲基双丙烯酰胺在催化剂作用下聚 合交联成三维网状结构的凝胶，并以此为支持物的电泳技术。在电泳开始阶段，由于连续 pH 梯度作用，将供试品压缩成 1 条狭窄的区带（浓缩效应），再加上整个电泳过程中存在的 分子筛效应和电荷效应，从而提高供试品的分离效果。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器 SCR-稳压稳流电泳仪或 CYY-Ⅲ稳压稳流电泳仪，ZVS-100 型垂直板电泳槽， 恒温培养箱，离心机，分析天平，扭力天平，真空干燥器，微量进样器，烧杯（100mL，500mL， 1000mL），量筒（10mL，100mL，1000mL），刻度吸管（1mL，2mL，10mL），试管，离心 管，大培养皿，玻璃注射器（5mL，10mL，20mL），剪刀，镊子，研钵，滤纸，粉碎机等。 2)材料 药材或粉末：苦杏仁，桃仁，蕲蛇，乌梢蛇，金钱白花蛇，小茴香，莳萝子。 （2）试剂 分离胶缓冲液，分离胶贮液，浓缩胶缓冲液，浓缩胶贮液，电极缓冲液， 40%蔗糖溶液，过硫酸铵溶液，四甲基乙二胺，溴酚蓝指示剂，考马斯亮蓝染色液，脱色液 等。 操作步骤 （1）聚丙烯酰胺凝胶电泳的基本方法 1）供试品液的制备 取纯净的供试品约 1g，加入稀释 4 倍的浓缩胶缓冲液（或电极缓 冲液、稀醇液等）0.5~1mL，研磨成匀浆，3500rpm 离心 15min，取上清液加等体积的 40% 蔗糖溶液[3]，4℃保存，供点样用。 2）电泳槽的安装 垂直板电泳槽的式样很多，目前流行的是用有机玻璃做的由两个半
槽组成的方形或长方形电泳槽。两半槽之间夹着凝胶模子，模子的两侧形成正负2个槽，供 装电极缓冲液用。凝胶模子由两块玻璃装入1个塑料或硅酮橡胶的夹套内构成。 玻璃板先用热的去污剂轻轻擦洗或用洗液浸泡，然后用水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗， 直立干燥，禁止用手接触洁净的玻璃板面。手持玻璃板两边，将两块玻璃板装入夹套内，然 后垂直地放入两半槽之间，长螺杆固定。上螺丝时，要按顺序逐步拧紧，均匀用力。 电泳槽装好后，将琼脂熔化，放冷后注入正极槽的小池内，使在凝胶模子的下部凝结成 约5mm厚的琼脂层。 3)分离胶与浓缩胶的制备将分离胶缓冲液、分离胶贮液、过硫酸铵溶液、蒸馏水按 1:2:1:4的比例(VN)混合，配成分离胶液16mL:将浓缩胶缓冲液、浓缩胶贮液、过 硫酸铵溶液、40%蔗糖溶液按1：2：1：4的比例(VV)混合，配成浓缩胶液4mL。将配 好的两种胶液及20-50mL新鲜蒸馏水置真空干燥器内抽气20min。 分离胶液中加入四甲基乙二胺30L,混匀，立即缓缓注入已安装好的凝胶模子中，注 意防止气泡。分离胶液上覆盖约3mm后的蒸馏水，静置1h以上，待分离胶与水层间界面 清晰时，用滤纸条小心吸净水层。插上电泳槽模板，使其底部距分离胶上层约1cm。向浓缩 胶液中加入四甲基乙二胺15uL,混匀后注入凝胶模子中，静置30min,浓缩胶变为乳白色， 垂直向上小心取出电泳槽模板。向正负电极槽内加入电极缓冲液共约800L,两槽内液面 介于高低玻璃板之间。 4)点样用微量进样器吸取供试品溶液20~40μL,注入电泳槽底部即可。 5)电泳将正负极电泳槽分别与电泳仪的正负极相连，在负极槽电极缓冲液中加溴酚 蓝指示剂1~2滴，打开电源，开始电泳。电泳采用稳流控制，开始时电流15mA,当样品进 入分离胶后，电流25A。为防止温度过高，可将电泳槽放在冰箱内。当溴酚蓝前沿行至距 琼脂层约Icm时，停止电泳，整个过程约需3h。 6)染色与保存打开电泳槽，取出胶板，标记前沿。将凝胶板浸于考马斯亮蓝R250染 色液内，37℃染色1。染色后用蒸馏水冲去凝胶表面附着的染料，再用脱色液脱色。经常 更换脱色液，直到背景清晰为止。凝胶板可放入脱色液中长期保存。 (2)常用中药的电泳鉴定 1)苦杏仁及桃仁供试品溶液的制备：分取供试品粉末各约1.0g,分别加入25%浓 缩胶缓冲液1mL,超声提取30min,3500rpm离心20min,吸取上清液，加入40%蔗糖溶液 (11),混匀。 电泳方法：吸取上述2种溶液各20L,分别点样于同一聚丙烯酰胺凝胶胶片上，用溴 64
64 槽组成的方形或长方形电泳槽。两半槽之间夹着凝胶模子，模子的两侧形成正负 2 个槽，供 装电极缓冲液用。凝胶模子由两块玻璃装入 1 个塑料或硅酮橡胶的夹套内构成。 玻璃板先用热的去污剂轻轻擦洗或用洗液浸泡，然后用水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗， 直立干燥，禁止用手接触洁净的玻璃板面。手持玻璃板两边，将两块玻璃板装入夹套内，然 后垂直地放入两半槽之间，长螺杆固定。上螺丝时，要按顺序逐步拧紧，均匀用力。 电泳槽装好后，将琼脂熔化，放冷后注入正极槽的小池内，使在凝胶模子的下部凝结成 约 5mm 厚的琼脂层。 3）分离胶与浓缩胶的制备 将分离胶缓冲液、分离胶贮液、过硫酸铵溶液、蒸馏水按 1∶2∶1∶4 的比例（V/V）混合，配成分离胶液 16mL；将浓缩胶缓冲液、浓缩胶贮液、过 硫酸铵溶液、40%蔗糖溶液按 1∶2∶1∶4 的比例（V/V）混合，配成浓缩胶液 4mL。将配 好的两种胶液及 20~50mL 新鲜蒸馏水置真空干燥器内抽气 20min。 分离胶液中加入四甲基乙二胺 30μL，混匀，立即缓缓注入已安装好的凝胶模子中，注 意防止气泡。分离胶液上覆盖约 3mm 后的蒸馏水，静置 1h 以上，待分离胶与水层间界面 清晰时，用滤纸条小心吸净水层。插上电泳槽模板，使其底部距分离胶上层约 1cm。向浓缩 胶液中加入四甲基乙二胺 15μL，混匀后注入凝胶模子中，静置 30min，浓缩胶变为乳白色， 垂直向上小心取出电泳槽模板。向正负电极槽内加入电极缓冲液共约 800mL，两槽内液面 介于高低玻璃板之间。 4）点样 用微量进样器吸取供试品溶液 20~40μL，注入电泳槽底部即可。 5）电泳 将正负极电泳槽分别与电泳仪的正负极相连，在负极槽电极缓冲液中加溴酚 蓝指示剂 1~2 滴，打开电源，开始电泳。电泳采用稳流控制，开始时电流 15mA，当样品进 入分离胶后，电流 25mA。为防止温度过高，可将电泳槽放在冰箱内。当溴酚蓝前沿行至距 琼脂层约 1cm 时，停止电泳，整个过程约需 3h。 6）染色与保存 打开电泳槽，取出胶板，标记前沿。将凝胶板浸于考马斯亮蓝 R250 染 色液内，37℃染色 1h。染色后用蒸馏水冲去凝胶表面附着的染料，再用脱色液脱色。经常 更换脱色液，直到背景清晰为止。凝胶板可放入脱色液中长期保存。 （2）常用中药的电泳鉴定 1）苦杏仁及桃仁 供试品溶液的制备：分取供试品粉末各约 1.0g，分别加入 25%浓 缩胶缓冲液 1mL，超声提取 30min，3 500rpm 离心 20min，吸取上清液，加入 40%蔗糖溶液 （1∶1），混匀。 电泳方法：吸取上述 2 种溶液各 20μL，分别点样于同一聚丙烯酰胺凝胶胶片上，用溴