2.10斑蝥中斑蝥素的含量测定一气相色谱法 内容提要 本实验采用气相色谱法测定斑蝥中斑蝥素的含量，以控制其质量。 通过实验掌握气相色谱法用于中药中易挥发性成分含量测定的基本方法。 原理 用气相色谱法将中药中被测组分进行分离，根据各组分的量（重量或在载气中的浓度）与 检测的响应值（通常表现为峰面积）成正比的关系，采用外标法计算含量。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器气相色谱仪，容量瓶(50mL),锥形瓶，滤纸，漏斗，量筒，试管，烧杯等。 2)材料斑蝥药材。对照品：斑蝥素。 (2)试剂氯仿。 操作步骤 (1)对照品溶液的制备取斑蝥素适量，精密称定，加氯仿制成lmL含lmg的溶液， 即得（必要时可稀释）。 (2)供试品溶液的制备取斑蝥粗粉约1g,精密称定，置具塞锥形瓶中，加氯仿30mL, 振摇l5min,放置6h,滤过，滤液置50mL量瓶中，用氯仿洗涤残渣与滤纸，洗液滤入同 一量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀。 (3)测定方法 1)色谱条件固定液：甲基硅胶(SE-30)。涂布浓度：3.5%。柱温：(175±10)℃。 理论板数：按斑蝥素峰计算不低于2600。 2)测定分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各2L,注入气相色谱仪测定。 名
92 2.10 斑蝥中斑蝥素的含量测定—气相色谱法 内容提要 本实验采用气相色谱法测定斑蝥中斑蝥素的含量，以控制其质量。 通过实验掌握气相色谱法用于中药中易挥发性成分含量测定的基本方法。 原理 用气相色谱法将中药中被测组分进行分离，根据各组分的量(重量或在载气中的浓度)与 检测的响应值(通常表现为峰面积)成正比的关系，采用外标法计算含量。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器 气相色谱仪，容量瓶（50mL），锥形瓶，滤纸，漏斗，量筒，试管，烧杯等。 2)材料 斑蝥药材。对照品：斑蝥素。 （2）试剂 氯仿。 操作步骤 （1）对照品溶液的制备 取斑蝥素适量，精密称定，加氯仿制成 1mL 含 1mg 的溶液， 即得（必要时可稀释）。 （2）供试品溶液的制备 取斑蝥粗粉约 1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加氯仿 30mL， 振摇 15min，放置 6h，滤过，滤液置 50mL 量瓶中，用氯仿洗涤残渣与滤纸，洗液滤入同 一量瓶中，加氯仿至刻度，摇匀。 （3）测定方法 1）色谱条件 固定液：甲基硅胶（SE-30）。涂布浓度：3.5%。柱温：（175 ±10）℃。 理论板数：按斑蝥素峰计算不低于 2 600。 2）测定 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各 2L，注入气相色谱仪测定
(4)计算百分含量。 要点及难点解答 (1)用气相色谱法测定斑蝥中的斑蝥素，提取操作简便，斑蝥体内的脂肪和色素成分均 不出峰，斑蝥素的峰与溶剂峰达到分离，而且峰形对称，故可用峰面积法和峰高法计算含量。 斑蝥素的保留时间约为3min,一般在5min后可继续进样。 (2)气相色谱法主要用于含挥分性成分的中药鉴定。 (3)斑蝥由于品种、产地和采收时间等原因，斑蝥素的含量差异较大，小斑蝥的平均含 量较大斑蝥为高。斑蝥含斑蝥素(C10H1204)不得少0.35%。 (4)气相色谱的分析方法分为峰面积测量法和计算法2大类。峰面积测量法主要包括峰 高乘半峰宽法、峰高乘基线宽度法、峰高乘保留时间法、剪纸称重法、积分仪测量法。计算 法主要包括外标法、面积归一化法、内标法和追加法。 习题与作业 (1)习题 1)用气相色谱法测定中药中易挥发性成分的基本步骤和方法。 2)斑蝥中主要化学成分及其含量限定指标。 (2)作业 简述实验步骤，记录实验结果，根据实验结果确定供试品是否符合药用标准。 2.11朱砂中硫化汞的含量测定 内容提要 本实验采用容量法测定朱砂中硫化汞的含量，以控制其质量。 通过实验掌握容量法用于矿物类中药中物及成分含量测定的基本方法。 9
93 （4）计算百分含量。 要点及难点解答 （1）用气相色谱法测定斑蝥中的斑蝥素，提取操作简便，斑蝥体内的脂肪和色素成分均 不出峰，斑蝥素的峰与溶剂峰达到分离，而且峰形对称，故可用峰面积法和峰高法计算含量。 斑蝥素的保留时间约为 3min，一般在 5min 后可继续进样。 （2）气相色谱法主要用于含挥分性成分的中药鉴定。 （3）斑蝥由于品种、产地和采收时间等原因，斑蝥素的含量差异较大，小斑蝥的平均含 量较大斑蝥为高。斑蝥含斑蝥素（C10H12O4）不得少 0.35%。 （4）气相色谱的分析方法分为峰面积测量法和计算法 2 大类。峰面积测量法主要包括峰 高乘半峰宽法、峰高乘基线宽度法、峰高乘保留时间法、剪纸称重法、积分仪测量法。计算 法主要包括外标法、面积归一化法、内标法和追加法。 习题与作业 （1）习题 1）用气相色谱法测定中药中易挥发性成分的基本步骤和方法。 2）斑蝥中主要化学成分及其含量限定指标。 （2）作业 简述实验步骤，记录实验结果，根据实验结果确定供试品是否符合药用标准。 2.11 朱砂中硫化汞的含量测定 内容提要 本实验采用容量法测定朱砂中硫化汞的含量，以控制其质量。 通过实验掌握容量法用于矿物类中药中物及成分含量测定的基本方法
原理 在供试品中加硫酸硝酸钾溶液，分解硫化汞并生成硫酸汞、硫酸钾和亚硝酸，加适量的 高锰酸钾除去亚硝酸后，再用硫酸亚铁除去多余的高锰酸钾。以F3+离子为指示剂，用 0.1mol/L硫氰酸铵滴定液滴定至浅红色，根据消耗的0.1mol/L硫氰酸铵滴定液的量，计算 朱砂中硫化汞的含量。 即：在一定的条件下，Hg2*与CNS形成一种稳定的化合物Hg2++2CNSˉ→ Hg(CNS)2,用Fe3*作为指示剂，生成血红色的Fe(CNS)h+。 Fe3++3CNS→Fe(CNS)3 Fe(CNS)2*+CNS- 血红色 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器锥形瓶，分析天平，电炉子，滴定管，烧杯，吸管等。 2)材料朱砂。 (2)试剂硫酸铁铵指示液，2%硫酸亚铁溶液，1%高锰酸钾溶液，硫酸，硝酸钾， 0.lmol/L硫氰酸铵滴定液。 操作步骤 (1)供试品溶液的制备取朱砂粉末约0.3g，精密称定，置锥形瓶中，加硫酸10mL 与硝酸钾1.5g加热使溶解，放冷。 (2)测定方法取供试品溶液，加水50L,加1%高锰酸钾溶液至显粉红色，再滴加 2%的硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液2mL,用0.1mol/L硫氰酸铵滴定液滴 定。 (3)计算按1mL0.1mol/L硫氰酸铵液等于11.63mg的硫化汞计算。 要点及难点解答 (1)本品含硫化汞(Hg$)不得少于96.0%。 8
94 原理 在供试品中加硫酸-硝酸钾溶液，分解硫化汞并生成硫酸汞、硫酸钾和亚硝酸，加适量的 高锰酸钾除去亚硝酸后，再用硫酸亚铁除去多余的高锰酸钾。以 Fe3 ＋离子为指示剂，用 0.1mol/L 硫氰酸铵滴定液滴定至浅红色，根据消耗的 0.1mol/L 硫氰酸铵滴定液的量，计算 朱砂中硫化汞的含量。 即：在一定的条件下，Hg2 ＋与 CNS － 形成一种稳定的化合物 Hg2 ＋＋ 2CNS －→ Hg(CNS)2，用 Fe3＋作为指示剂，生成血红色的 Fe(CNS)2 ＋。 Fe3＋＋3CNS－→ Fe(CNS)3 Fe(CNS)2 ＋＋CNS－ 血红色 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器 锥形瓶，分析天平，电炉子，滴定管，烧杯，吸管等。 2)材料 朱砂。 （2）试剂 硫酸铁铵指示液，2%硫酸亚铁溶液，1%高锰酸钾溶液，硫酸，硝酸钾， 0.1mol/L 硫氰酸铵滴定液。 操作步骤 （1）供试品溶液的制备 取朱砂粉末约 0.3g ，精密称定，置锥形瓶中，加硫酸 10mL 与硝酸钾 1.5g 加热使溶解，放冷。 （2）测定方法 取供试品溶液，加水 50mL，加 1%高锰酸钾溶液至显粉红色，再滴加 2%的硫酸亚铁溶液至红色消失后，加硫酸铁铵指示液 2mL，用 0.1mol/L 硫氰酸铵滴定液滴 定。 （3）计算 按 1 mL0.1mol/L 硫氰酸铵液等于 11.63mg 的硫化汞计算。 要点及难点解答 （1）本品含硫化汞（HgS）不得少于 96.0%
(2)朱砂用水飞法研成细粉。 (3)供试品中加硫酸硝酸钾溶液，反应过程如下： HgS+4H2S04+8KNO3-Hg S04+4K2S04+4NO2+4H2O 由于有亚硝酸的存在(2NO2+2H2O→HNO3+HNO2),可将Hg2+还原成Hg而 使结果偏低故采用高锰酸钾除去[2NO2ˉ+MnO4ˉ+4H'→MnNO3)2+2H2O],过量的高锰酸 钾影响滴定，故用硫酸亚铁除去(MnO4ˉ+Fe2*+8H→Mn2*+Fe3*+4H20)。 (4)由于Hg(CNS)2的离解度远小于Hg(CNS)3的离解度，所以溶液中全部的Hg2+生成 Hg(CNS)2后，过量的CNS即与Fe3+作用生成血红色的Fe(CNS)2以示终点。 (5)供试品分解后的溶液用水稀释的目的是由于滴定时，大量的Hg(CNS)2析出，对 Hg的吸附作用很显著，同时析出沉淀、溶液挥发，终点不清晰，测定结果偏低。稀释后 可避免上述缺点。 习题与作业 (1)习题 1)用容量法测定矿物药无机成分的基本步骤和方法。 2)朱砂中主要化学成分及其含量限定指标。 (2)作业 简述实验步骤，记录和分析实验结果，根据实验结果确定供试品是否符合药用标准。 2.12未知粉末中药的显微鉴定 内容提要 本实验采用显微鉴定的原理与技术，观察和描述未知粉末性中药的显微特征，以鉴定其 品种。 通过实验掌握未知粉末性中药显微鉴定的原理与基本技术。 95
95 （2）朱砂用水飞法研成细粉。 （3）供试品中加硫酸-硝酸钾溶液，反应过程如下： HgS＋4H2SO4＋8KNO3→Hg SO4＋4K2SO4＋4NO2＋4H2O 由于有亚硝酸的存在（2NO2＋2H2O→HNO3＋HNO2）,可将 Hg2＋还原成 Hg＋而 使结果偏低故采用高锰酸钾除去[2NO2 －＋MnO4 －＋4H＋→Mn(NO3) 2＋2H2O]，过量的高锰酸 钾影响滴定，故用硫酸亚铁除去（MnO4 －＋Fe2＋＋8H＋→Mn2＋＋Fe3＋＋4H2O）。 （4）由于 Hg(CNS)2 的离解度远小于 Hg(CNS)3 的离解度，所以溶液中全部的 Hg2＋生成 Hg(CNS)2 后，过量的 CNS－即与 Fe3＋作用生成血红色的 Fe(CNS)2 ＋以示终点。 (5) 供试品分解后的溶液用水稀释的目的是由于滴定时，大量的 Hg(CNS)2 析出，对 Hg2＋的吸附作用很显著，同时析出沉淀、溶液挥发，终点不清晰，测定结果偏低。稀释后 可避免上述缺点。 习题与作业 （1）习题 1）用容量法测定矿物药无机成分的基本步骤和方法。 2）朱砂中主要化学成分及其含量限定指标。 （2）作业 简述实验步骤，记录和分析实验结果，根据实验结果确定供试品是否符合药用标准。 2.12 未知粉末中药的显微鉴定 内容提要 本实验采用显微鉴定的原理与技术，观察和描述未知粉末性中药的显微特征，以鉴定其 品种。 通过实验掌握未知粉末性中药显微鉴定的原理与基本技术
原理 显微鉴定法就是利用显微镜、显微技术及显微化学方法等对中药进行分析鉴定。在鉴定 过程中，以采用显微镜观察动、植物的组织构造、细胞形状、内含物的特征以及矿物的光学 特性等为主要内容，通过对显微特征的观察、描述和特征的分析以达到鉴定中药品种或质量 的目的。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器光学显微镜，目镜测微尺，盖玻片，载玻片，镊子，解剖针等。 2)材料单纯未知药材粉末：混合粉末(2~4种中药)：粉末性中成药粉末。 (2)试剂水合氯醛溶液，间苯三酚溶液，盐酸，乙醇，稀碘液，苏丹Ⅲ试液，钉红 试液，稀甘油试液等。 操作步骤 (1)取样按照规定的方法进行。 (2)预试主要注意粉末的颜色、质地、气、味，或水试、火试等特征。预示某种、 某类或含有某种化学成分的药材可能存在，为显微鉴定做好准备工作。 (3)粉末制片分别用水、水合氯醛溶液制片，或用间苯三酚和浓盐酸、碘试液、苏 丹Ⅲ试液、钉红试液等显微化学试剂制片。 (3)显微特征观察和描述在显微镜下观察上述的显微标本片，并对观察到的显微特 征进行描述、记录。 (4)显微特征的罗列将观察到的显微特征归纳整理，选定鉴定点，绘制主要的显微 特征图。 (5)分析鉴定结果结合预试和显微特征观察的结果，做出初步结论。 (6)复核根据初步结论，重新制作粉末标本片进行核对，或做一些理化定性的实验 等，或与标准药材相比较以确证结论的准确性，必要时也可以核对文献。 (7)结论写出供试品粉末包括哪些药材及其主要鉴别特征，并填写鉴定报告。 96
96 原理 显微鉴定法就是利用显微镜、显微技术及显微化学方法等对中药进行分析鉴定。在鉴定 过程中，以采用显微镜观察动、植物的组织构造、细胞形状、内含物的特征以及矿物的光学 特性等为主要内容，通过对显微特征的观察、描述和特征的分析以达到鉴定中药品种或质量 的目的。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器 光学显微镜，目镜测微尺，盖玻片，载玻片，镊子，解剖针等。 2)材料 单纯未知药材粉末；混合粉末（2~4 种中药）；粉末性中成药粉末。 （2）试剂 水合氯醛溶液，间苯三酚溶液，盐酸，乙醇，稀碘液，苏丹Ⅲ试液，钌红 试液，稀甘油试液等。 操作步骤 （1）取样 按照规定的方法进行。 （2）预试 主要注意粉末的颜色、质地、气、味，或水试、火试等特征。预示某种、 某类或含有某种化学成分的药材可能存在，为显微鉴定做好准备工作。 （3）粉末制片 分别用水、水合氯醛溶液制片，或用间苯三酚和浓盐酸、碘试液、苏 丹Ⅲ试液、钌红试液等显微化学试剂制片。 （3）显微特征观察和描述 在显微镜下观察上述的显微标本片，并对观察到的显微特 征进行描述、记录。 （4）显微特征的罗列 将观察到的显微特征归纳整理，选定鉴定点，绘制主要的显微 特征图。 （5）分析鉴定结果 结合预试和显微特征观察的结果，做出初步结论。 （6）复核 根据初步结论，重新制作粉末标本片进行核对，或做一些理化定性的实验 等，或与标准药材相比较以确证结论的准确性，必要时也可以核对文献。 （7）结论 写出供试品粉末包括哪些药材及其主要鉴别特征，并填写鉴定报告