2选择实验 2.1中药的光谱鉴定 2.1.1荧光鉴定 内容提要 本实验采用荧光法对不同药用部位的19种中药进行品种鉴定。 通过实验掌握荧光鉴定中药的基本理论、基本方法和基本技术。掌握常用中药荧光鉴别 的特征。 原理 荧光鉴定是利用中药中所含的某些化学成分（通常具有共轭双键体系和芳香环分子）在 吸收自然光或紫外光后能发生荧光的性质，对中药及其所含成分进行鉴定。本实验主要是通 过荧光定性分析以鉴定中药的品种或质量。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器荧光分光光度计，紫外分析灯(365nm,254nm),试管，烧杯，吸管，漏斗， 滤纸，广口瓶，索氏提取器，超声波提取器，离心机，粉碎机，天平，电炉子等。 2)材料药材：牛膝，川牛膝，黄连，秦艽，麦冬，蜈蚣，珍珠。粉末或饮片：板蓝根， 葛根，白芷，川芎，丹参，苏木，厚朴，秦皮，木瓜，栀子，石韦，天麻。 (2)试剂1%氨水，乙醚，乙醇，氢氧化钠试液，盐酸，氯仿，三氯化铝试液，石 油醚(60-90℃)。 操作步骤 (1)荧光检查 55
55 2 选择实验 2.1 中药的光谱鉴定 2.1.1 荧光鉴定 内容提要 本实验采用荧光法对不同药用部位的 19 种中药进行品种鉴定。 通过实验掌握荧光鉴定中药的基本理论、基本方法和基本技术。掌握常用中药荧光鉴别 的特征。 原理 荧光鉴定是利用中药中所含的某些化学成分（通常具有共轭双键体系和芳香环分子）在 吸收自然光或紫外光后能发生荧光的性质，对中药及其所含成分进行鉴定。本实验主要是通 过荧光定性分析以鉴定中药的品种或质量。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器 荧光分光光度计，紫外分析灯（365nm，254nm），试管，烧杯，吸管，漏斗， 滤纸，广口瓶，索氏提取器，超声波提取器，离心机，粉碎机，天平，电炉子等。 2)材料 药材：牛膝，川牛膝，黄连，秦艽，麦冬，蜈蚣，珍珠。粉末或饮片：板蓝根， 葛根，白芷，川芎，丹参，苏木，厚朴，秦皮，木瓜，栀子，石韦，天麻。 （2）试剂 1% 氨水，乙醚，乙醇，氢氧化钠试液，盐酸，氯仿，三氯化铝试液，石 油醚(60~90℃)。 操作步骤 （1）荧光检查
1)牛膝取牛膝断面，置紫外光灯下观察，显黄色荧光：滴加1%氨水后，显淡黄绿 色荧光（川牛膝新鲜断面置紫外光灯下显淡绿色荧光，滴加1%氨水后，显绿黄色荧光）。 2)黄连取黄连药材断面置在紫外光灯下观察，显金黄色荧光，木质部尤为显著。 3)板蓝根取板蓝根水煎液，置紫外光灯下观察，显蓝色荧光。 4)葛根取葛根粉末少量在紫外光灯下观察，显亮蓝色荧光。 5)白芷取白芷粉末0.5g,加乙醚适量，冷浸，振摇，放置，取上清液2滴，点于滤 纸上，置紫外光灯下观察，显黄绿色荧光。 6)川芎取川芎横切面置紫外光灯下观察，显亮淡紫色荧光，外皮显暗棕色荧光。 7)秦艽取秦艽药材横切面，置紫外光灯下观察，显黄白色或金黄色荧光。 8)丹参取丹参粉末5g,加水50mL,煮沸15~20min,放冷，滤过，滤液置水浴 上浓缩至黏稠状，放冷后，加乙醇3~5L使溶解，滤过，滤液作如下试验：取滤液数滴， 点于滤纸条上，干后，置紫外光灯下观察，显亮蓝灰色荧光。将此纸条悬挂在氨水瓶中（不 接触液面)，20min后取出，置紫外光灯(365nm)下观察，显淡亮蓝绿色荧光。 9)麦冬取麦冬切片置紫外光灯下观察，显浅蓝色荧光。 10)苏木取苏木粉末10g,置带塞试管中，加水50mL,密塞，反复振摇并放置4h, 滤过，滤液显橘红色，置紫外光灯下观察，显黄绿色荧光。 取滤液加氢氧化钠试液2滴，显猩红色，置紫外光灯下观察，显蓝色荧光，再加盐酸使 成酸性后，溶液变为橙色，置紫外光灯下观察，显黄绿色荧光。 11)厚朴取厚朴粗粉3g,加氯仿30mL,回流30min,滤过。取滤液，在紫外光灯下， 顶面观显紫色，侧面观显二层，上层黄绿色，下层黄绿色荧光。 12)秦皮取秦皮少许浸入水或乙醇中，浸出液在日光下可见碧蓝色荧光。 13)木瓜取木瓜粉末1g,加70%乙醇10mL,回流1h,滤过，取滤液备用。取滤液 滴于滤纸上，待干，喷三氯化铝试液，干燥后，置紫外光灯下观察，显蓝色荧光。 14)栀子取栀子粉末0.2g,加水5mL,水浴加热3min,取上清液滴于滤纸上，挥干， 置紫外光灯下观察，显天蓝色荧光。 15)石韦取石韦粉末2g,加95%乙醇溶液20mL回流提取30min,取滤液加蒸馏水 6mL,再加石油醚(60-90℃)20mL抽提，分取乙醇层，在水浴上蒸干，残渣加95%乙醇溶液 8L溶解，取溶液滴于滤纸上，干后置紫外光灯下观察。庐山石韦显黄色荧光，石韦与有 柄石韦均显蓝色荧光。 16)蜈蚣取蜈蚣水浸液在紫外光灯(254m)下观察，呈现亮绿色荧光。 56
56 1）牛膝 取牛膝断面，置紫外光灯下观察，显黄色荧光；滴加 1% 氨水后，显淡黄绿 色荧光（川牛膝新鲜断面置紫外光灯下显淡绿色荧光，滴加 1%氨水后，显绿黄色荧光）。 2）黄连 取黄连药材断面置在紫外光灯下观察，显金黄色荧光，木质部尤为显著。 3）板蓝根 取板蓝根水煎液，置紫外光灯下观察，显蓝色荧光。 4）葛根 取葛根粉末少量在紫外光灯下观察，显亮蓝色荧光。 5）白芷 取白芷粉末 0.5g，加乙醚适量，冷浸，振摇，放置，取上清液 2 滴，点于滤 纸上，置紫外光灯下观察，显黄绿色荧光。 6）川芎 取川芎横切面置紫外光灯下观察，显亮淡紫色荧光，外皮显暗棕色荧光。 7）秦艽 取秦艽药材横切面，置紫外光灯下观察，显黄白色或金黄色荧光。 8）丹参 取丹参粉末 5 g，加水 50 mL，煮沸 15～20min，放冷，滤过，滤液置水浴 上浓缩至黏稠状，放冷后，加乙醇 3～5 mL 使溶解，滤过，滤液作如下试验：取滤液数滴， 点于滤纸条上，干后，置紫外光灯下观察，显亮蓝灰色荧光。将此纸条悬挂在氨水瓶中（不 接触液面），20min 后取出，置紫外光灯（365nm）下观察，显淡亮蓝绿色荧光。 9）麦冬 取麦冬切片置紫外光灯下观察，显浅蓝色荧光。 10）苏木 取苏木粉末 10 g，置带塞试管中，加水 50 mL，密塞，反复振摇并放置 4 h， 滤过，滤液显橘红色，置紫外光灯下观察，显黄绿色荧光。 取滤液加氢氧化钠试液 2 滴，显猩红色，置紫外光灯下观察，显蓝色荧光，再加盐酸使 成酸性后，溶液变为橙色，置紫外光灯下观察，显黄绿色荧光。 11）厚朴 取厚朴粗粉 3g，加氯仿 30mL，回流 30min，滤过。取滤液，在紫外光灯下， 顶面观显紫色，侧面观显二层，上层黄绿色，下层黄绿色荧光。 12）秦皮 取秦皮少许浸入水或乙醇中，浸出液在日光下可见碧蓝色荧光。 13）木瓜 取木瓜粉末 1g，加 70%乙醇 10mL，回流 1h，滤过，取滤液备用。取滤液 滴于滤纸上，待干，喷三氯化铝试液，干燥后，置紫外光灯下观察，显蓝色荧光。 14）栀子 取栀子粉末 0.2g，加水 5mL，水浴加热 3min，取上清液滴于滤纸上，挥干， 置紫外光灯下观察，显天蓝色荧光。 15）石韦 取石韦粉末 2g，加 95%乙醇溶液 20mL 回流提取 30min，取滤液加蒸馏水 6mL，再加石油醚(60~90℃)20mL 抽提，分取乙醇层，在水浴上蒸干，残渣加 95%乙醇溶液 8mL 溶解，取溶液滴于滤纸上，干后置紫外光灯下观察。庐山石韦显黄色荧光，石韦与有 柄石韦均显蓝色荧光。 16）蜈蚣 取蜈蚣水浸液在紫外光灯（254nm）下观察，呈现亮绿色荧光
17)珍珠取珍珠横剖面置荧光灯下观察，天然珍珠显浅蓝色荧光，养殖珍珠显亮黄绿 色荧光，通常环周部分较明亮。 (2)荧光光谱取天麻粉末38mg,置具塞试管中，加乙醇10mL,密塞，超声波提 取60min,离心，取上清液作为供试品溶液。选择激发波长，-ex(max)254nm,用荧光分光光度 计测定。供试品在302nm和592nm波长处有特征峰。 要点及难点解答 (1)必须指出，并不是所有的中药或其成分都有发生荧光的性质。有些中药本身不发 生荧光，但若用酸、碱或荧光染色处理后，就可能使某些成分在紫外光线下变为可见色彩。 有的中药附有地衣或有多量霉菌生长，也可能有荧光出现，因此荧光鉴定还可用于检查某些 中药的变质情况。此外，在色谱分析应用上，也可能使吸附在吸附柱上、纸条上及薄层板上 的各种成分产生荧光色谱。 (2)中药荧光检查所用的紫外分析灯，在没有特殊注明的情况下，波长均为365m。 (3)荧光鉴定法灵敏度高，能够测定出104109mol/L浓度的荧光物质。 (4)荧光鉴定中药有直接荧光法和间接荧光法两种类型，直接荧光法是根据中药本身所 含物质产生荧光的特性直接观察或测定：间接荧光发是利用具有高灵敏度的荧光试剂使无荧 光或荧光很弱的中药产生荧光载测定，或通过化学反应使中药中的化学成分产生荧光基团再 进行测定。 习题与作业 (1)习题 1)用荧光法鉴定中药的原理与基本方法。 2)总结常用中药荧光定性鉴定的主要特征。 (2)作业 简述实验步骤，记录和分析实验结果。 2.1.2可见-紫外光谱鉴定 57
57 17）珍珠 取珍珠横剖面置荧光灯下观察，天然珍珠显浅蓝色荧光，养殖珍珠显亮黄绿 色荧光，通常环周部分较明亮。 （2）荧光光谱 取天麻粉末 38mg，置具塞试管中，加乙醇 10mL，密塞，超声波提 取 60min，离心，取上清液作为供试品溶液。选择激发波长 λex(max)254nm，用荧光分光光度 计测定。供试品在 302nm 和 592nm 波长处有特征峰。 要点及难点解答 （1）必须指出，并不是所有的中药或其成分都有发生荧光的性质。有些中药本身不发 生荧光，但若用酸、碱或荧光染色处理后，就可能使某些成分在紫外光线下变为可见色彩。 有的中药附有地衣或有多量霉菌生长，也可能有荧光出现，因此荧光鉴定还可用于检查某些 中药的变质情况。此外，在色谱分析应用上，也可能使吸附在吸附柱上、纸条上及薄层板上 的各种成分产生荧光色谱。 （2）中药荧光检查所用的紫外分析灯，在没有特殊注明的情况下，波长均为 365nm。 （3）荧光鉴定法灵敏度高，能够测定出 10－4~10－9mol/L 浓度的荧光物质。 （4）荧光鉴定中药有直接荧光法和间接荧光法两种类型，直接荧光法是根据中药本身所 含物质产生荧光的特性直接观察或测定；间接荧光发是利用具有高灵敏度的荧光试剂使无荧 光或荧光很弱的中药产生荧光载测定，或通过化学反应使中药中的化学成分产生荧光基团再 进行测定。 习题与作业 （1）习题 1）用荧光法鉴定中药的原理与基本方法。 2）总结常用中药荧光定性鉴定的主要特征。 （2）作业 简述实验步骤，记录和分析实验结果。 2.1.2 可见-紫外光谱鉴定
内容提要 本实验采用可见-紫外光谱法对不同药用部位的9种中药进行品种或质量鉴定。 通过实验掌握可见-紫外光谱鉴定中药的基本理论、基本方法和基本技术。掌握常用中 药可见-紫外光谱鉴别的特征。 原理 本方法是用分光光度计测定中药中被测物质在紫外光区和可见光区特定的波长处或一 定的波长范围光的吸收度，对中药进行定性或定量分析。 (1)紫外光谱法是利用中药中所含成分有不饱和结构及共轭双键结构，在紫外光的照 射下，能引起物质内部原子、分子、运动状态的变化，消耗一部分能量后再透射出来，通过 棱镜或光栅分成按波长顺序排列的吸收光谱，不同物质产生的紫外吸收光谱各不相同。由于 不同中药所含不饱和成分的差异，即根据光谱图所提供的参数，如最大吸收波长、最小吸收 波长、肩峰及吸收系数等作为鉴定的依据。 (2)可见吸收度光谱法仅适用鉴定本身具有颜色或能与显色剂作用呈现颜色的中药及其 化学成分。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器紫外分光光度计，硅胶干燥器，分析天平，锥形瓶，滤纸，漏斗，容量瓶(10mL, 100mL,500mL),水浴锅，3号垂熔玻璃漏斗，样品筛，碘量瓶，分液漏斗，索氏提取器， 粉碎机等。 2)材料粉末或药材：红花，五味子，黄亲，半夏，天麻，蟾酥，附子，血竭，赤芍。 (2)试剂丙酮，无水乙醇，氯仿，甲醇，乙醇，乙醚，氨试液，0.25moL硫酸溶 液等。 操作步骤 1)红花 58
58 内容提要 本实验采用可见-紫外光谱法对不同药用部位的 9 种中药进行品种或质量鉴定。 通过实验掌握可见-紫外光谱鉴定中药的基本理论、基本方法和基本技术。掌握常用中 药可见-紫外光谱鉴别的特征。 原理 本方法是用分光光度计测定中药中被测物质在紫外光区和可见光区特定的波长处或一 定的波长范围光的吸收度，对中药进行定性或定量分析。 （1）紫外光谱法是利用中药中所含成分有不饱和结构及共轭双键结构，在紫外光的照 射下，能引起物质内部原子、分子、运动状态的变化，消耗一部分能量后再透射出来，通过 棱镜或光栅分成按波长顺序排列的吸收光谱，不同物质产生的紫外吸收光谱各不相同。由于 不同中药所含不饱和成分的差异，即根据光谱图所提供的参数，如最大吸收波长、最小吸收 波长、肩峰及吸收系数等作为鉴定的依据。 （2）可见吸收度光谱法仅适用鉴定本身具有颜色或能与显色剂作用呈现颜色的中药及其 化学成分。 仪器、材料与试剂 (1)仪器与材料 1)仪器 紫外分光光度计，硅胶干燥器，分析天平，锥形瓶，滤纸，漏斗，容量瓶（10mL， 100mL，500mL），水浴锅，3 号垂熔玻璃漏斗，样品筛，碘量瓶，分液漏斗，索氏提取器， 粉碎机等。 2)材料 粉末或药材：红花，五味子，黄亲，半夏，天麻，蟾酥，附子，血竭，赤芍。 （2）试剂 丙酮，无水乙醇，氯仿，甲醇，乙醇，乙醚，氨试液， 0.25mol/L 硫酸溶 液等。 操作步骤 1）红花
黄色素吸收度测定：取本品置硅胶干燥器中干燥24h,研成细粉，精密称取0.1g,置锥 形瓶中，加水l50mL,浸泡1h,时时振摇，用滤纸滤过，滤液置500mL量瓶中，用水分数 次洗涤滤纸上的残渣至洗液无色，加水至刻度，摇匀，用分光光度法在401nm的波长处测 吸收度，不得低于0.40。 红色素吸收度测定：取上述细粉约0.25g,精密称定，置锥形瓶中，加80%丙酮溶液50mL, 置50℃水浴上温浸90min,放冷，用3号垂熔玻璃漏斗滤过，收集滤液于100mL量瓶中，用 80%丙酮溶液25L分次洗涤，洗液并入量瓶中，加80%丙酮溶液至刻度，摇匀，用分光光 度法测定在518nm的波长处测吸收度，不得低于0.20。 2)五味子称取本品粉末（阴干，水分10%~15%，过20-40目筛）2份，每份约1g, 分置于碘量瓶中，各加水、无水乙醇20.0mL,室温浸泡2h,振摇，滤过，作为供试品溶液。 先将供试品溶液上机扫描测试，吸收度上限超过3.0时，应将供试品溶液用相同溶剂稀释至 吸收度上限不超过3.0。水溶液在285.0nm、208.5nm处有最大吸收，无水乙醇溶液在 285.0nm、240.0nm处有最大吸收。 3)蟾酥取本品1%的氯仿提取液，蒸干后用甲醇溶解，测定其紫外光谱，在波长300nm 附近有最大吸收。 4)黄芩取本品粉末0.2g,加乙醇5mL,浸渍24h,滤过.取滤液，用乙醇稀释为1mgmL 的溶液，以乙醇为空白，用紫外分光光度计测定，于278nm、219nm、320±1nm处有吸收 峰。 5)半夏取本品粉末0.2g,加乙醇20mL,放置12h,滤过，滤液供测试用。样品在 212士3nm、220士2nm处有最大吸收。 6)附子取黑顺片或白附片粗粉4g,加乙醚30mL与氨试液5mL,振摇20min,滤过。 滤液置分液漏斗中，加0.25mol/L硫酸液20mL,振摇提取，分取酸液测定其紫外光谱，在 231nm与274nm波长处有最大吸收。 7)天麻取本品粉末0.2g,加乙醇10mL,加热回流1h,滤过。取滤液1mL,置10mL 容量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，用分光光度法测定，在270m的波长处有最大吸收或出 现1个肩峰。 8)血竭取本品粉末30.0mg,精密称量，置50mL量瓶中，加乙醇适量，浸泡10min 后用力振摇20min使溶解，加乙醇至刻度，摇匀，置1cm石英吸收池中，以同批乙醇作空 白，照紫外分光光度法测定，在270±1nm处有最大吸收。 9)赤芍取本品粉末0.2g,加乙醇20mL,放置12h,滤过，滤液用乙醇稀释，制成 59
59 黄色素吸收度测定：取本品置硅胶干燥器中干燥 24h，研成细粉，精密称取 0.1g，置锥 形瓶中，加水 150mL，浸泡 1h，时时振摇，用滤纸滤过，滤液置 500mL 量瓶中，用水分数 次洗涤滤纸上的残渣至洗液无色，加水至刻度，摇匀，用分光光度法在 401nm 的波长处测 吸收度，不得低于 0.40。 红色素吸收度测定：取上述细粉约 0.25g，精密称定，置锥形瓶中，加 80%丙酮溶液 50mL， 置 50℃水浴上温浸 90min，放冷，用 3 号垂熔玻璃漏斗滤过，收集滤液于 100mL 量瓶中，用 80%丙酮溶液 25mL 分次洗涤，洗液并入量瓶中，加 80%丙酮溶液至刻度，摇匀，用分光光 度法测定在 518nm 的波长处测吸收度，不得低于 0.20。 2）五味子 称取本品粉末（阴干，水分 10%~15%，过 20~40 目筛）2 份，每份约 1g， 分置于碘量瓶中，各加水、无水乙醇 20.0mL，室温浸泡 2h，振摇，滤过，作为供试品溶液。 先将供试品溶液上机扫描测试，吸收度上限超过 3.0 时，应将供试品溶液用相同溶剂稀释至 吸收度上限不超过 3.0。水溶液在 285.0nm 、 208.5nm 处有最大吸收，无水乙醇溶液在 285.0nm、 240.0nm 处有最大吸收。 3）蟾酥 取本品 1%的氯仿提取液，蒸干后用甲醇溶解，测定其紫外光谱，在波长 300nm 附近有最大吸收。 4）黄芩 取本品粉末 0.2g，加乙醇 5mL，浸渍 24h，滤过。取滤液，用乙醇稀释为 1mg/mL 的溶液，以乙醇为空白，用紫外分光光度计测定，于 278nm、219nm、320±1nm 处有吸收 峰。 5）半夏 取本品粉末 0.2g，加乙醇 20mL，放置 12h，滤过，滤液供测试用。样品在 212±3nm、220±2nm 处有最大吸收。 6）附子 取黑顺片或白附片粗粉 4g，加乙醚 30mL 与氨试液 5mL，振摇 20min，滤过。 滤液置分液漏斗中，加 0.25mol/L 硫酸液 20mL，振摇提取，分取酸液测定其紫外光谱，在 231nm 与 274nm 波长处有最大吸收。 7）天麻 取本品粉末 0.2g，加乙醇 10mL，加热回流 1h，滤过。取滤液 1mL，置 10mL 容量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，用分光光度法测定，在 270nm 的波长处有最大吸收或出 现 1 个肩峰。 8）血竭 取本品粉末 30.0mg，精密称量，置 50mL 量瓶中，加乙醇适量，浸泡 10min 后用力振摇 20min 使溶解，加乙醇至刻度，摇匀，置 1cm 石英吸收池中，以同批乙醇作空 白，照紫外分光光度法测定，在 270±1nm 处有最大吸收。 9）赤芍 取本品粉末 0.2g，加乙醇 20mL，放置 12h，滤过，滤液用乙醇稀释，制成