4、第二次变性 取上述离心后的上清液稀释至20- 30倍（以鱼精原料为基础程），加紧入其1/9体 程（以20倍稀释时）的混合变性剂（5%SDS ， CHCL3=1：2），同时加入固体NaCL，使整个 体系氯化钠浓度保持1M。搅拌变性1h后，静 置6-12h，离心。 5、DNA-Na的析出、洗涤和干燥 将二次变性后 所得的上清液，徐徐倾入1倍体积的95%乙醇中， 用两个容器往复倾倒几次，纤维状的DNA-Na就 析出，将析出的DNA-Na依次用95%的乙醇、丙 酮和无水乙醇洗涤二次后，迅速用P2O5进行真 空干燥
4、第二次变性 取上述离心后的上清液稀释至20- 30倍（以鱼精原料为基础程），加紧入其1/9体 程（以20倍稀释时）的混合变性剂（5%SDS ， CHCL3=1：2），同时加入固体NaCL，使整个 体系氯化钠浓度保持1M。搅拌变性1h后，静 置6-12h，离心。 5、DNA-Na的析出、洗涤和干燥 将二次变性后 所得的上清液，徐徐倾入1倍体积的95%乙醇中， 用两个容器往复倾倒几次，纤维状的DNA-Na就 析出，将析出的DNA-Na依次用95%的乙醇、丙 酮和无水乙醇洗涤二次后，迅速用P2O5进行真 空干燥
（四）、5′ -脱氧核酸的分离与精制 ◼ 工艺流程： 鱼精DNA-Na → 配成1%（w/v）溶液 → 100℃ 沸水浴热变性10分钟 → 速冷 → 72℃±0.5酶解 1.5h 升温至100℃，10min → 速冻 → 过滤 → 滤 液（测酶解率） →上201×8柱（同时脱氧核苷 等穿漏）→用不同洗脱液脱分离（洗脱顺序为 Dcmp dAMP TMP dGMP） →收集的各种洗脱 液用炭柱浓缩→ 一级真空浓缩 → 冷冻升华干燥→ 两级真空浓缩 → 用冷酒精析出→ 洗涤→结晶 → 真空干燥→ 结晶成品→ 成品检验
（四）、5′ -脱氧核酸的分离与精制 ◼ 工艺流程： 鱼精DNA-Na → 配成1%（w/v）溶液 → 100℃ 沸水浴热变性10分钟 → 速冷 → 72℃±0.5酶解 1.5h 升温至100℃，10min → 速冻 → 过滤 → 滤 液（测酶解率） →上201×8柱（同时脱氧核苷 等穿漏）→用不同洗脱液脱分离（洗脱顺序为 Dcmp dAMP TMP dGMP） →收集的各种洗脱 液用炭柱浓缩→ 一级真空浓缩 → 冷冻升华干燥→ 两级真空浓缩 → 用冷酒精析出→ 洗涤→结晶 → 真空干燥→ 结晶成品→ 成品检验